国家自然科学基金(81102162)
- 作品数：5 被引量：9H指数：2
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- 相关机构：四川大学四川省农业科学院更多>>
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- 相关领域：理学医药卫生生物学更多>>
- 毛细管电泳与微流控芯片电泳快速检测粪便中腺病毒的方法建立被引量：2
- 2015年
- 目的建立粪便中腺病毒的PCR-毛细管电泳-激光诱导荧光和PCR-微流控芯片电泳-激光诱导荧光快速检测方法。方法采用试剂盒法提取粪便中腺病毒DNA,选择腺病毒六邻体基因保守区域进行PCR扩增反应。PCR产物分别用高灵敏度的SYBR Gold和SYBR Orange核酸荧光染料进行标记,在优化的毛细管电泳和微流控芯片电泳条件下分离,采用激光诱导荧光检测特异性PCR扩增产物。结果腺病毒扩增产物在优化的毛细管电泳和微流控芯片电泳条件下可分别于9min和6min内完成检测。将PCR扩增产物测序,并与NCBI基因库中核酸序列比对,结果表明所选用的扩增序列特异性良好。商品化DNA Marker毛细管电泳和微流控芯片电泳对目标DNA片段bp值求得的日内精密度分别为1.14%-1.34%和1.18%-1.48%,日间精密度分别为1.27%-2.76%和2.85%-4.06%。毛细管电泳-激光诱导荧光法和微流控芯片电泳-激光诱导荧光法检测腺病毒的灵敏度分别为2.33×10^2 copies/mL和2.33×10^3 copies/mL。两种方法用于实际粪便样品测定,准确度高。结论本研究建立的PCR-毛细管电泳-激光诱导荧光和PCR-微流控芯片电泳-激光诱导荧光检测方法能够快速、灵敏、准确地检测出粪便中的腺病毒。
- 阮佳任冬霞杨丹旎龙品品赵洪玥王乙棋李永新
- 关键词：腺病毒聚合酶链反应毛细管电泳微流控芯片电泳激光诱导荧光检测
- 响应曲面优化-毛细管电泳-激光诱导荧光快速检测粪便中诺如病毒被引量：3
- 2013年
- 建立了粪便中诺如病毒逆转录PCR-毛细管电泳-激光诱导荧光快速检测方法。根据诺如病毒核酸保守序列选择引物，扩增出特异的PCR产物；采用响应曲面法进行毛细管电泳条件优化，以含有DNA荧光染料SYBRGold的0．5％甲基纤维素为筛分介质，通过激光诱导荧光法检测诺如病毒的PCR产物。在优化的毛细管电泳条件下，9min内可完成诺如病毒PCR产物的检测。扩增产物测序后，与基因库中诺如病毒的序列进行同源性比对，一致性达99％。迁移时间的日内和日间相对标准偏差分别为1．1％-1．3％和1．8％-2．6％，已用于粪便中诺如病毒的快速检测。
- 阮佳许欣孙成均刘亚攀周梦莹李永新
- 关键词：诺如病毒逆转录PCR毛细管电泳激光诱导荧光检测
- 毛细管电泳-激光诱导荧光法检测HSP70-2基因多态性研究被引量：2
- 2014年
- 建立了HSP70-2基因多态性的毛细管电泳-激光诱导荧光（CE-LIF）检测方法。采用试剂盒法提取人血清标本中全基因组DNA作为模板,选择特异引物进行PCR扩增反应,产物用Pst I限制性内切酶酶切;酶切产物用高灵敏度的SYBR Gold荧光染料标记后,用毛细管电泳-激光诱导荧光法检测。在优化的毛细管电泳-激光诱导荧光条件下,酶切产物在25 min内即可完成检测。GeneRular 100bp DNA ladder在同一天内连续测定6次,迁移时间和峰面积的RSD分别为1.8%~2.9%和2.8%~7.9%;连续6日测定迁移时间与峰面积的RSD分别为2.1%~4.3%和3.5%~9.3%。本研究共检测200份样品,其中G/G分型3份,A/G分型25份,A/A分型172份,检测结果与凝胶电泳结果一致。CE-LIF检测方法具有电泳时间短、试样消耗少、绿色环保等优点,能用于HSP70-2基因多态性的检测。
- 阮佳李永儒孙成均周琛李永新
- 关键词：基因多态性检测
- 转基因大米的多重降落PCR检测方法研究被引量：1
- 2014年
- 目的建立转Bt基因大米的多重降落PCR定性检测方法。方法本实验以转Bt基因大米为研究对象,针对大米的内源基因蔗糖磷酸合酶sps基因和转基因大米中普遍存在的外源基因CaMV35S启动子选择两对特异性引物,分别用于判断大米基因组DNA的存在及扩增体系的适用性和筛选转基因片段的存在,进行多重降落PCR扩增。分别对热循环参数和反应体系进行优化,同时考察了方法的特异性,并对市场出售的实际样品进行检测。结果在优化的条件下,转Bt基因大米的sps基因和CaMV35S启动子均可获得有效扩增。特异性实验结果表明本法特异性高,结果稳定;所选择的市售样品均未检测出转基因成分。结论本研究建立的转基因大米的多重降落PCR检测方法与常规PCR相比,更为快速、简便,且具有较强的特异性,可用于转基因大米的快速定性检测。
- 何如镜阮佳刘亚攀李永新
- 关键词：转基因大米多重PCR降落PCR
- 转Bt基因稻米的降落PCR-毛细管电泳快速检测研究被引量：1
- 2012年
- 目的:建立转Bt基因稻米的降落PCR-毛细管电泳快速定性检测方法。方法:转Bt基因稻米经磨碎后提取基因组DNA,对其内源蔗糖磷酸合酶SPS基因和抗虫毒蛋白Bt基因同时进行聚合酶链反应(PCR)扩增,产物用无胶筛分毛细管电泳分离、激光诱导荧光检测器检测。结果:在优化条件下,25 min内即可完成SPS和Bt基因的检测,日内精密度在2.37%～3.19%之间,特异性实验结果表明本法特异性较高。结论:所建立的方法快速、分离效能高、样品用量少且成本低廉,适用于转Bt基因稻米的快速鉴定。
- 刘亚攀欧阳华学孙成均阮佳李永新
- 关键词：降落PCR毛细管电泳激光诱导荧光检测
