国家自然科学基金(30800205)
- 作品数：3 被引量：7H指数：2
- 相关作者：徐小洁张浩杨智洪叶棋浓韩永健更多>>
- 相关机构：军事医学科学院中国人民解放军总医院中国人民解放军总医院第一附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金全球变化研究国家重大科学研究计划北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 敲减人HPIP基因表达抑制细胞生长增殖被引量：3
- 2011年
- 为了探讨人造血相关的PBX相互作用蛋白质基因(HPIP)在肿瘤发生发展中的生物学作用,构建了HPIP小干扰RNA(siRNA)的真核表达载体,验证其敲减效果并观察其对细胞生长增殖的影响.根据人HPIP的cDNA序列,设计了含有小发卡结构的寡核苷酸序列,将其克隆到siRNA表达载体上;将重组质粒转染人胚肾293T细胞,通过实时定量RT-PCR及Western印迹分析检测HPIP基因的表达水平;结晶紫实验及流式细胞技术检测敲减HPIP基因表达对细胞生长和增殖的影响,软琼脂实验检测对肿瘤细胞非锚定依赖性生长的影响.结果显示,构建的siRNA能够有效抑制HPIP基因的表达;结晶紫实验与细胞周期分析实验显示,siRNA介导的HPIP表达沉默导致细胞生长增殖的显著抑制,软琼脂实验结果表明,稳定转染HPIP siRNA能够抑制肿瘤细胞的锚定非依赖性生长.上述结果初步表明,HPIP siRNA能明显抑制肿瘤细胞的生长与增殖,可能是一个潜在的肿瘤治疗新靶点.
- 徐小洁王凌雪范忠义丁丽华张浩杨智洪李杰之叶棋浓
- 关键词：小干扰RNA细胞生长细胞增殖
- 慢病毒介导RNA干扰HPIP蛋白抑制肿瘤细胞增殖被引量：2
- 2011年
- 目的:建立高效稳定的造血相关的PBX相互作用蛋白质(HPIP)小干扰RNA(siRNA)细胞导入方法,检测HPIP的表达对肿瘤细胞生长增殖的影响。方法:构建人HPIP慢病毒siRNA干扰载体,将重组质粒转染人胚肾293T细胞,通过实时定量RT-PCR及Western印迹分析检测Lenti-H1 HPIP siRNA的干扰效果;将Lenti-H1 HPIPsiRNA与4个包装质粒共同转染293T细胞,包装成慢病毒后,感染宫颈癌HeLa和肝癌HepG2细胞,经嘌呤霉素筛选2周后,收集细胞进行Western印迹检测;用结晶紫实验检测其对肿瘤细胞生长增殖的影响。结果:构建的Lenti-H1 HPIP siRNA能有效抑制HPIP的表达;结晶紫实验显示,慢病毒介导的HPIP siRNA导致细胞增殖的显著抑制。结论:慢病毒介导的HPIP敲减能明显抑制肿瘤细胞的增殖,HPIP可能是一个潜在的肿瘤治疗新靶点。
- 徐小洁范忠义韩永健张浩丁丽华韩聚强王凌雪杨智洪杜楠叶棋浓
- 关键词：RNA干扰慢病毒细胞增殖
- 运用新型的反向PCR策略高效构建基因的点突变体被引量：4
- 2011年
- 基因的点突变体在其结构和功能研究中发挥非常关键的作用,如何高效、经济地构建基因点突变体是许多分子生物学研究遇到的棘手问题.以PIAS3点突变体的构建为对象,设计了新型的以反向PCR为基础的点突变构建流程,获得的点突变体质粒经测序后均与预期相符,并在293T细胞内得到了正确表达.以上结果表明,该实验设计方案能够高效、方便地用于基因点突变体的构建,为进一步研究它们的分子功能打下了基础.
- 程龙韩白玉侯莎韩永健徐小洁蒋凯李法曾杨智洪窦京涛吕朝晖张浩叶棋浓
- 关键词：反向PCRPIAS3点突变
