国家自然科学基金(81071433)
- 作品数：7 被引量：23H指数：3
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- 相关机构：深圳市疾病预防控制中心中国疾病预防控制中心深圳大学更多>>
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- 葡萄球菌和蜡样芽胞杆菌肠毒素液相悬浮芯片方法的建立
- 2012年
- 目的采用Luminex液相悬浮芯片检测方法,建立一管同时检测19种葡萄球菌肠毒素和蜡样芽胞杆菌肠毒素的快速筛查方法。方法根据GenBank公布的葡萄球菌肠毒素entA-entR基因、蜡样芽胞杆菌cesB,nheB基因,设计特异性引物和探针,优化反应体系和条件,建立19种肠毒素的Luminex液相悬浮芯片检测法。结果 Luminex液相悬浮芯片体系检测19种肠毒素互不干扰,经验证80株金葡菌和蜡样芽胞杆菌菌株,均出现特异性荧光中值信号。Lu minex液相悬浮芯片技术从样品处理到检测结果需3.5h左右。结论 Luminex液相悬浮芯片筛查方法可应用于食物中毒等应急检测的快速和高通量筛查。
- 石晓路吕冬月林一曼邱亚群李迎慧扈庆华
- 关键词：葡萄球菌蜡样芽胞杆菌肠毒素
- 腹泻病原体高通量分子诊断与预警体系建立研究进展被引量：1
- 2021年
- 2019年全球疾病、伤害和风险因素负担研究(GBD)的数据显示,在全球9岁以下儿童的伤残调整寿命年数前10位的疾病中,腹泻病排名第3位,在传染性疾病中排名第2位[1]。2020年全国甲乙类传染病中肠道传染病发病率排名第3位[2];此外,肠道传染病因其起病急、症状重、传播范围广、易发生群体性聚集性疫情,仍是我国重要的疾病负担.
- 扈庆华李迎慧
- 关键词：分子诊断预警体系
- 高通量荧光PCR组合方法鉴定16种金黄色葡萄球菌肠毒素的方法建立及评估被引量：3
- 2018年
- 目的建立一种高效、特异的荧光探针熔解曲线方法,用于鉴定16种金黄色葡萄球菌肠毒素。方法根据金黄色葡萄球菌肠毒素SEA～SEQ特异基因序列设计不同杂交连接探针,建立金黄色葡萄球菌肠毒素检测体系,评估其最低检出限、特异度、可重复性等指标。与普通PCR方法比较,采用荧光探针熔解曲线方法对本实验室的158株食物中毒金黄色葡萄球菌进行检测,评估新方法的灵敏度和特异度。结果荧光探针熔解曲线方法最低检出限为0.80～2.15 ng/μl,特异度为100.0%,无交叉荧光信号产生,变异系数<1%。与普通PCR方法比较,新方法的灵敏度为95.4%,特异度为100.0%,Kappa值为0.88。结论荧光探针熔解曲线技术检测金黄色葡萄球菌肠毒素的方法可覆盖金黄色葡萄球菌16种肠毒素,具有快速、准确、特异性高的特点。
- 左乐姜尹祥石晓路邱亚群林一曼江敏扈庆华
- 关键词：金黄色葡萄球菌肠毒素荧光PCR
- 伤寒、甲、乙、丙型副伤寒沙门菌多重荧光PCR方法的评估及临床应用被引量：3
- 2013年
- 目的建立和评估多重荧光PCR方法快速鉴定伤寒、甲、乙、丙型副伤寒沙门菌的方法,并应用于临床血培养样品的检测。方法收集留取医院的可疑伤寒患者的血培养标本,用多重实时荧光PCR法和传统分离培养法同时进行分离鉴定,分析比较双盲实验结果,评价多重实时荧光PCR方法的灵敏度、特异度等检测性能指标。结果共检测临床样本538例,多重荧光PCR法检出阳性218例,比传统培养法多检出6例;阴性320例,与传统培养法一致。以传统检测方法为金标准,多重荧光PCR方法的灵敏度为100%,特异度为98.2%。结论建立的多重荧光PCR检测方法操作简便,可快速、特异、灵敏地检测出伤寒、甲、乙、丙型副伤寒沙门菌,可以应用于临床标本的早期快速分型诊断,提升重大传染病的应急处置能力和监测能力。
- 马淑贞石晓路林一曼邱亚群李迎慧扈庆华
- 关键词：伤寒沙门菌甲型副伤寒沙门菌丙型副伤寒沙门菌
- 改良分子信标-实时PCR快速检测4种食源性致病菌被引量：4
- 2015年
- 目的建立高效、特异、简便、快速的四重实时荧光PCR（real—timePCR）检测体系同时检测沙门菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特菌、大肠杆菌0157：H74种常见的主要食源性致病菌。方法从GenBank数据库中下载沙门菌侵袭性基因ssaR、金黄色葡萄球菌肠毒素nuc基因、单增李斯特菌的hlyA基因、大肠杆菌0157：H7的rfbE基因序列，设计引物和探针，利用HAND系统和多色探针编码技术，通过对PCR反应的组分和条件进行优化，建立针对肉类食品中4种食源性致病菌四重实时荧光PCR体系。结果成功建立了检测肉类食品中4种食源性致病菌四重实时荧光体系，DNA和细菌纯培养的最低检测限达到1～100fg／PCR和1～6．25CF-U／PCR，特异性均达98％以上。结论本文利用HAND系统和多色探针编码技术相结合，构建了针对4种食源性致病菌四重实时荧光PCR体系。可用于食品中食源性致病菌的快速筛查和食源性疾病暴发的快速诊断。
- 邱亚群扈庆华石晓路李迎慧林一曼江敏
- 关键词：食源性致病菌实时荧光PCR
- 腹泻病原体高通量分子诊断与预警体系的建立及应用
- 2020年
- 1主要研究内容在我国39种法定传染病中,感染性腹泻病例报告数历年居前五位,引起感染性/食源性腹泻的病原体包括细菌、病毒和寄生虫等40余种病原体。针对我国腹泻病防控面临着病原体检测和分型技术落后、病原谱不清楚、临床经验性治疗、暴发疫情溯源困难和疫情应对处于被动状态等问题,本项目开展了腹泻病原体高通量检测新技术和溯源技术的研究,并在此基础上,建立感染性腹泻病原体高通量分子诊断预警体系,及时发现暴发和主动预警。
- 扈庆华李庆阁石晓路李迎慧江敏姜伊祥
- 关键词：感染性腹泻腹泻病分子诊断病原谱分型技术
- 深圳地区2002-2008年副溶血弧菌分子特征研究被引量：13
- 2013年
- 目的 了解深圳地区副溶血弧菌主要血清型和分子分型以及毒力因子分布,分析新O3：K6型克隆群与国际流行株的进化关系.方法 对2002-2008年深圳地区1005株副溶血弧菌临床分离株进行血清型分型；采用荧光PCR方法对68种不同血清型的28 1株副溶血弧菌进行tlh、toxR、tdh和trh毒力基因检测；对281株菌株进行orf8检测；采用脉冲场凝胶电泳（PFGE）对不同分离时间的5种主要血清型菌株进行分子分型,根据有代表性的分子分型图谱选取82株副溶血弧菌菌株进行GS-PCR检测,并选取60株副溶血弧菌菌株进行toxRS基因测序；进而对41株O3∶K6和O1∶K25副溶血弧菌菌株进行多位点序列分型（MLST）分析,采用eBURST软件分析进化关系.结果 1005株菌共得到79种不同的血清型,主要血清型为O3∶K6、O4∶K8、O1∶K25、O1∶KUT、O4∶K68、O1∶K56和O9∶K44,所占比例分别为57.9％、8.16％、5.27％、5.87％、1.39％、1.39％和0.99％.243株为tlh＋、toxR＋、tdh＋、trh-,37株为tlh＋、toxR＋、tdh-和trh-,1株tlh＋、toxR＋、tdh＋和trh＋.35株O3∶K6型菌株的MLST序列类型为ST3,是同源复合体CC3,O4∶K8型副溶血弧菌的序列类型为ST189,无同源复合体.结论 深圳地区主要流行的副溶血弧菌为tdh＋、trh-的O3∶K6、O4∶K8和O1∶K25菌株,2006年后出现O1∶K56、O9∶K44、O3∶K29、O4∶K9新的血清型；其中O3∶K6血清型属于新的O3∶K6克隆群,与其他国家流行的副溶血弧菌属于同一克隆群,同时也存在新、旧克隆群.血清的多样性和新旧克隆群的存在是造成深圳地区副溶血弧菌腹泻病高发态势的主要原因之一.
- 石晓路王艺扈庆华李迎慧林一曼邱亚群陈琼城崔志刚
- 关键词：副溶血弧菌脉冲场凝胶电泳多位点序列分型
