深圳市科技计划项目(200802100)
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
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- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- DNA甲基化对调控胰岛分化基因表达的影响被引量：3
- 2010年
- 目的探讨DNA甲基化对调控胰岛分化基因表达的影响,为调控干细胞分化为胰岛细胞提供理论依据。方法采用甲基化DNA免疫共沉淀-实时定量PCR法(MeDIP-qPCR)检测129/J小鼠胚胎干细胞、NIT1细胞及NIH3T3细胞中Pdx-1、MafA、Nkx6.1和Oct4四种调控胰岛分化基因的DNA甲基化程度;同时采用实时定量RT-PCR检测上述3种细胞中4种基因mRNA表达水平,分析这些基因DNA甲基化水平差异与基因表达之间的关系。结果 Pdx-1、MafA和Nkx6.1基因在129/J小鼠胚胎干细胞和NIT1细胞中呈低甲基化,在NIH3T3细胞中则呈高甲基化,前两种细胞的甲基化程度明显低于后者(P<0.05);Oct4基因在129/J小鼠胚胎干细胞中未甲基化,在NIT1和NIH3T3细胞中呈低甲基化,NIT1细胞的甲基化程度明显低于NIH3T3细胞(P<0.05)。低甲基化的Pdx-1、MafA和Nkx6.1基因在NIT1细胞中可高效表达,而在NIH3T3和129/J小鼠胚胎干细胞中则未见表达(P<0.05);Oct4基因在129/J小鼠胚胎干细胞中可高效表达,在NIT1和NIH3T3细胞中则未见表达。结论转录起始区DNA甲基化程度可影响Pdx-1、MafA、Nkx6.1和Oct4基因的表达,参与β细胞的分化过程。
- 方爱平张悦林宝行郭辉余小舫李富荣胡泓
- 关键词：DNA甲基化胰岛素分泌细胞分化基因表达
- 胎鼠胰腺干细胞体内移植向胰岛样细胞团的分化被引量：1
- 2009年
- 背景:由于干细胞的转分化受细胞外基质和基因程序的调控,因此在体外很难模拟体内干细胞巢的微环境而使干细胞定向分化,或许干细胞原位移植是可行方法之一。目的:探讨胎鼠胰腺干细胞在糖尿病鼠体内不同部位移植后分化为胰岛细胞团的可能性。设计、时间及地点:细胞学体内观察,于2006-03/2007-04在深圳市人民医院中心实验室完成。材料:16d龄SD胎鼠12只,10周龄200～250g的SD雌鼠50只,均由广东省实验动物中心提供。方法:分离纯化胎鼠胰腺干细胞,经荧光原位杂交检测为雄性的第5代胎鼠胰腺干细胞用于体内移植。50只SD雌鼠取10只作为正常对照组,余40只通过腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病模型,造模后分为4组:胰腺实质内移植组在胰腺实质内多点注射1×106个雄性胎鼠胰腺干细胞,肝内移植组行门静脉穿刺注射等量细胞悬液,肾包膜下移植组于左肾包膜下注射等量细胞悬液,模型对照组胰腺实质内多点注射相同体积的PBS液,10只/组,培养8周。主要观察指标:定期监测大鼠血糖及血浆胰岛素水平,观察胰腺、肝脏及肾脏组织病理学变化。结果:雄性胎鼠胰腺干细胞培养传3代后,巢蛋白阳性细胞率为74.1%。胰腺实质内移植组在移植后第3周血糖开始下降,血浆胰岛素水平逐渐升高;第5周血糖降至正常水平并维持,血浆胰岛素达到正常水平,病理学观察在胰腺内可见外源性胰岛样细胞团,胰岛素免疫组化染色呈阳性,巢蛋白免疫组化染色呈强阳性,荧光原位杂交检测Y染色体呈阳性。肝内移植组、肾包膜下移植组大鼠仍维持高血糖状态,相应组织内均未见外源性细胞团形成。结论:分离纯化的胎鼠胰腺干细胞在胰腺内原位移植后,于体内可转分化为胰岛样细胞团,并使血糖降至正常水平。
- 张悦张育森余小舫周汉新李富荣
- 关键词：胰腺干细胞胎鼠胰岛样细胞团分化降血糖
