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中国美利奴绵羊磷脂酶C zeta基因表达载体的构建及原核表达被引量：1: 2014年; 构建美利奴绵羊磷脂酶C zeta(PLCζ)融合蛋白表达载体,并在原核细胞内表达及纯化,为其特异性抗体的制备及生物学功能研究奠定基础。用PCR技术扩增出PLCζ基因片段,亚克隆到原核表达载体pCzn1中,导入Arctic Express TM(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达,收样后进行SDS-PAGE电泳或Western blot检验PLCζ的表达情况。用镍离子亲和层析的方法大量纯化融合蛋白。结果显示,重组质粒经PCR、酶切和测序鉴定证明载体构建正确。pCzn1表达载体在Arctic Express TM(DE3)表达菌中能很好地表达融合蛋白。表达纯化后可获得了分子量约74ku的融合蛋白,符合预期大小。成功构建pCzn1-PLCζ原核表达载体,表达并纯化了其融合蛋白,Western blot试验表明其蛋白分子的完整性良好,这将有利于对PLCζ蛋白进行深入的研究。; 木尔扎提.阿勒腾别克刘强贺志锐王银龙乌热力哈孜赛务加甫; 关键词：磷脂酶C 原核表达 WESTERN BLOT

绵羊磷脂酶C zeta基因对绵羊卵母细胞孤雌激活的初步研究被引量：3: 2015年; 旨在应用绵羊磷脂酶C zeta(PLCζ)基因对绵羊卵母细胞进行激活,探究是否可以作为一种新的卵母细胞激活物质。本研究构建了pEGFP-N1-PLCζ重组质粒,并将质粒注入绵羊MⅡ期卵母细胞,观察及统计PLCζ对卵母细胞的激活效果和胚胎发育的影响。结果表明,pEGFP-N1-PLCζ重组质粒可在卵母细胞中表达,并可自发激活卵母细胞孤雌发育。; 木尔扎提.阿勒腾别克刘强黄增文米来.夏日甫赛务加甫; 关键词：磷脂酶C 卵母细胞显微注射孤雌激活绵羊

中国美利奴绵羊磷脂酶C zeta基因的克隆及序列分析被引量：1: 2013年; 根据GenBank中公布的牛磷脂酶C zeta(PLCζ)基因序列设计引物,通过RT-PCR方法对中国美利奴绵羊的PLCζ基因进行扩增,以了解其分子生物学特征。测序表明,美利奴绵羊PLCζ基因开放阅读框全长1 905bp,共编码634个氨基酸。生物信息学分析所扩增的中国美利奴绵羊PLCζ基因具有典型的EF-hand钙结合结构域、磷脂酰肌醇特异性磷脂酶X结构域、磷脂酰肌醇特异性磷脂酶Y结构域、蛋白激酶C2保守区域,其170和215氨基酸位点为组氨酸活性位点。与牛、猪、犬、人、猴、鼠、兔和原鸡的PLCζ基因核苷酸同源性分别为97.32%、88.19%、73.93%、81.42%、83.05%、73.65%、72.42%和65.07%。氨基酸序列的系统进化树表明中国美利奴绵羊PLCζ基因与牛的亲缘关系最近。; 贺志锐肖红冉于振兴胡圣伟刘强赛务加甫; 关键词：分子克隆

中国美利奴绵羊磷脂酶C zeta基因真核表达载体的构建及其表达研究被引量：4: 2014年; 旨在构建PLCζ真核表达载体,初步研究其在体细胞系中的表达特性。本研究用PCR技术扩增出PLCζ基因片段,克隆至载体pEGFP-N1,鉴定无误后,将构建了重组质粒pEGFP-N1-PLCζ转染293T细胞和绵羊成纤维细胞,在倒置荧光显微镜和激光扫描共聚焦显微镜下观察重组质粒在细胞中的表达和分布。经酶切与测序证明,本试验成功的构建了pEGFP-N1-PLCζ真核表达载体,并且成功与绿色荧光蛋白融合表达。本试验实现了pEGFP-N1-PLCζ在绵羊胎儿成纤维细胞中的表达,这将有利于进一步通过核移植来研究其重组蛋白对卵母细胞的激活作用。; 刘强贺志锐王银龙乌热力哈孜赛务加甫; 关键词：磷脂酶C ZETA PEGFP-N1 真核表达

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国家自然科学基金(31160524)