中央高校基本科研业务费专项资金(JC2011-2)
- 作品数：6 被引量：56H指数：4
- 相关作者：陈少良沈昕马旭君孙健丁明全更多>>
- 相关机构：北京林业大学国家农业信息化工程技术研究中心浙江农林大学更多>>
- 发文基金：中央高校基本科研业务费专项资金北京市自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 盐胁迫下硫化氢调控杨树根系的离子流被引量：23
- 2013年
- 本文应用非损伤微测技术(non-invasive micro-test technique,NMT)研究了H2S对盐胁迫下耐盐的胡杨和不耐盐的群众杨根部K+、Na+和H+流速的影响。结果表明,两种杨树根系在瞬时(100mmol·L-1NaCl)和短期(24h,50mmol·L-1NaCl)盐胁迫下呈现出K+外流,这种盐诱导的根部K+外流能被50mol·L-1NaHS抑制。此外,H2S能增加短期盐胁迫下Na+的外排,而Na+的外流被Na+/H+逆向转运体抑制剂amiloride或者质膜H+泵抑制剂sodium orthovanadate有效抑制。盐胁迫下,H2S对不耐盐的群众杨根系K+外流的抑制作用和对Na+/H+逆向转运的促进作用高于耐盐的胡杨。据此推测,H2S是通过上调杨树根系胞质膜Na+/H+逆向转运体系(H+泵和Na+/H+逆向转运体),促进Na+和H+逆向跨膜转运,并且,H+泵通过抑制去极化激活的离子通道来限制盐诱导的K+外流。
- 朱会朋孙健赵楠马旭君张玉红沈昕陈少良
- 关键词：群众杨非损伤微测技术
- 胡杨谷胱甘肽过氧化物酶PeGPX基因的克隆及转化植株耐盐性分析被引量：18
- 2012年
- 胡杨(Populus euphratica Oliv.)具有极强抗盐碱能力。本实验室前期胡杨微阵列芯片数据结果显示:盐胁迫下,胡杨谷胱甘肽过氧化物酶基因(PeGPX)的转录上调,暗示该基因可能对胡杨耐盐性具有一定的作用。为分析 GPX 对植物耐盐性的贡献,本研究以胡杨为材料,利用 RT-PCR 方法克隆了胡杨谷胱甘肽过氧化物酶PeGPX基因,并在烟草中过量表达该基因,以分析谷胱甘肽过氧化物酶活性与植物耐盐性的关系。研究结果显示,实验中克隆的 cDNA (PeGPX)编码谷胱甘肽过氧化物酶,其 ORF 为 693 bp,其蛋白由 231 个氨基酸编码。过量表达 PeGPX 基因的烟草与野生型烟草的耐盐性实验结果显示,野生型烟草植株在加 NaCl(200 mmol/L)的 MS 培养基中生长 15 d 后,无明显的长高,且不长根;而转基因烟草在同样的加盐培养基上,生长基本没有受到抑制,植株生长状态良好,并且能够长根。光合数据显示,在盐胁迫下过量表达 PeGPX 基因烟草的净光合速率受到影响明显小于野生型烟草的净光合速率。酶活数据显示,转基因株系 GPX 酶活与野生型的相比在盐胁迫下活性有非常显著的提高。我们的研究结果说明:过表达 PeGPX 基因使得烟草的耐盐性得到显著提高,这对深入研究PeGPX基因在胡杨耐盐机制中的作用具有重要的意义。高,这对深入研究PeGPX基因在胡杨耐盐机制中的作用具有重要的意义。
- 王菲菲丁明全邓澍荣王美娟孙健侯佩臣马旭君张玉红赵楠沈昕陈少良
- 关键词：谷胱甘肽过氧化物酶转基因烟草抗盐性
- 胡杨果糖-1,6-二磷酸醛羧酶基因PeALD的克隆及耐盐性分析被引量：6
- 2011年
- 胡杨(Populus euphratica Oliv)是优良的抗逆树种,有很强的耐盐碱性。前期胡杨转录组研究结果显示盐胁迫可诱导果糖-1,6-二磷酸醛羧酶基因(PeALD)转录上调,提示该基因可能对胡杨耐盐性方面有某种贡献。为分析PeALD基因在胡杨耐盐性中的作用,本研究以胡杨为材料,利用RT-PCR方法克隆了胡杨果糖-1,6-二磷酸醛羧酶基因的全长cDNA,通过基因转化法尝试在烟草中过量表达该基因,并对转基因株系的耐盐性进行初步分析。研究结果显示,克隆的cDNA编码果糖-1,6-二磷酸醛羧酶,ORF为1177bp,是由247个氨基酸编码的疏水性蛋白,理论等电点为6.84,分子量为26.79kD。PCR与RT-PCR检测结果表明,外源的PeALD基因通过转化已经整合到烟草的染色体中,并在4个株系中得到较强的表达。转化株系表型筛选实验表明,在200mmol/L NaCl的MS培养基中培养15d后,野生型烟草植株无明显高生长,叶片全部黄化并萎缩;而转基因烟草高生长基本没有受到抑制,植株生长良好。说明在烟草中过表达PeALD使转化植株的耐盐性显著提高。光合数据结果显示,ALD基因能够降低盐胁迫对烟草叶片净光合速率的影响,可能是PeALD过表达加速了卡尔文循环的运转,提高了CO2的固定速率,进而促进了光合活性,通过光合作用促进碳的积累,利于呼吸作用和氧化磷酸化产生ATP,为维持跨膜质子浓度梯度提供能量,从而有可能促进质膜上的Na+/H+逆向转运,利于细胞质膜保持拒盐性。这些结果初步验证了PeALD基因的耐盐性功能,为进一步深入研究该基因在耐盐机制中的作用奠定了良好基础。
- 张帆常李伟丁明全侯佩臣沈昕陈少良
- 关键词：转基因烟草抗盐性
- 用GPC-HPLC法测定植物组织中的细胞分裂素被引量：1
- 2012年
- 为了探讨和开发凝胶渗透色谱(GPC)--高压液相色谱(HPLC)法定量测定植物组织中的细胞分裂素,以群众杨叶片和烟草组培苗为试验材料,根据细胞分裂素标准品回收率的测定,得出最佳试验方法:80%甲醇研磨后4℃浸提24h,抽滤,滤液离心,上清液加2滴氨水,40℃浓缩至干,用含3%甲醇的CH2Cl2溶解样品,经0.22μm滤膜过滤后过GPC纯化,最后HPLC外标曲线法定量。用液相--质谱联用仪(LC-MS)对所检测的细胞分裂素定性。测试表明:群众杨叶片中玉米素鲜质量含量439.5018ng/g,烟草叶片中玉米素鲜质量含量为617.9957ng/g。在植物样品中检测到的激动素(鲜质量含量49.4739～124.7124ng/g)应为外源引入。研究结果表明,GPC纯化植物细胞分裂素后用HPLC定量是可行的。
- 李金克邓文红陈少良
- 关键词：细胞分裂素凝胶渗透色谱
- 秋茄KcRD22基因的克隆与功能分析被引量：4
- 2011年
- 本文以用200mmol/LNaCl处理24h后的秋茄幼苗为材料提取秋茄叶片总RNA,利用RT-PCR方法克隆获得KcRD22基因的全长cDNA,通过构建pCAMBIA-2300-KcRD22过表达载体,利用农杆菌侵染的方式获得过表达KcRD22的烟草转基因株系,并对转基因株系的耐盐性做出初步分析。实验结果显示:KcRD22基因的ORF长1131bp,编码1个等电点为9.07、分子量为39.8kD、由375个氨基酸组成的蛋白。PCR及RT-PCR鉴定结果表明,KcRD22基因已经分别整合到8株烟草的染色体中,并在两个株系中获得表达。对转基因烟草进行光合作用测定,结果显示100mmol/LNaCl处理显著降低了野生型烟草的净光合速率,而转基因植株叶片的光合作用受到的影响较小。盐浓度达到200mmol/L时,转基因植株及野生型烟草净光合速率都明显降低,但盐胁迫解除后,转基因烟草光合作用的恢复情况明显好于野生型烟草,说明KcRD22的过表达提高了烟草的抗盐性。本文初步确定了KcRD22基因对植物耐盐性的贡献,这为进一步深入研究该基因在耐盐机制中的功能奠定了良好基础。
- 黄旭新侯佩臣丁明全王美娟邓澍荣李妮亚周晓阳沈昕陈少良
- 关键词：秋茄转基因烟草抗盐性
- 盐胁迫下外生菌根菌Paxillus抗氧化酶活性的变化被引量：4
- 2012年
- [目的]通过测定2种菌株的抗氧化酶活性来研究其抗盐机理。[方法]以外生菌根真菌Paxillus involutus的2种菌株MAJ和NAU作为材料,研究在不同NaCl浓度(0、100、200、500 mmol/L)处理条件下抗氧化酶活性的变化。[结果]100 mmol/L NaCl可以促进菌株MAJ和NAU的增长及其生物量的增加;短期盐胁迫(1 d)诱导了菌株MAJ中SOD、CAT和POD活性的升高,但随着盐处理时间的延长,这些酶活性在100和200 mmol/L盐胁迫下均有所降低;而菌株NAU在长期盐胁迫(9 d)下能更好地维持各抗氧化酶活性,尤其是APX、GPX和POD。[结论]盐处理的菌株抗氧化酶活性明显高于对照菌株。
- 包斯琴李静孙健马旭君陈少良
- 关键词：抗氧化酶活性耐盐性
