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人结肠腺癌Lovo细胞系蛋白质双向凝胶电泳技术的建立及其优化被引量：6: 2006年; 目的优化人结肠癌Lovo细胞系的蛋白质样品制备方法,建立人结肠癌Lovo细胞系的双向凝胶电泳(2-DE)图谱。方法分别用磷酸盐缓冲液和等渗蔗糖溶液冲洗细胞,胰酶酶解后裂解和皿上直接裂解的方法提取所培养Lovo细胞的总蛋白质,利用固相pH梯度双向凝胶电泳技术进行分离,凝胶经银染显色后,用Melanie4软件分析2-DE图谱。结果以等渗蔗糖缓冲液冲洗细胞并经皿上直接裂解的方法所提取Lovo细胞总蛋白质进行双向电泳,可获得分辨率高、重复性好的人结肠癌Lovo细胞系2-DE图谱。结论以等渗蔗糖溶液冲洗细胞结合皿上直接裂解是一种较好的细胞蛋白质双向电泳样品制备方法,初步建立了分辨率较高且重复性好的人结肠癌Lovo细胞系蛋白质双向凝胶电泳图谱。; 赵亮李祖国丁彦青; 关键词：LOVO 双向凝胶电泳结肠癌蛋白质组

采用蛋白质组学技术筛选大肠癌转移相关蛋白被引量：14: 2006年; 采用对同一亲本来源、不同转移潜能细胞株SW480和SW620的蛋白质表达谱进行双向凝胶电泳和质谱技术分析,并在蛋白质和mRNA水平进行验证,成功鉴定了10个大肠癌转移相关蛋白,其中SW620细胞株表达上调的蛋白质有磷酸甘油酸变位酶1,磷脂酰乙醇胺结合蛋白和高迁移率族蛋白B-1,而热休克蛋白27,膜联蛋白Ⅰ,甲硫腺苷磷酸化酶,切丝蛋白1和表皮型脂肪酸结合蛋白在SW620中表达下调.大多数差异蛋白质功能涉及肿瘤细胞生长、运动、粘附、凋亡等过程,研究结果为阐明大肠癌转移机制及寻找预测大肠癌转移的潜在标志物提供了理论依据.; 赵亮刘莉王爽李祖国丁彦青; 关键词：大肠癌蛋白质组双向凝胶电泳

结直肠癌转移动物模型血清中几种蛋白变化的观察被引量：5: 2007年; 目的建立可视化结直肠癌转移模型,并应用血清蛋白质组学技术分析可视化结直肠癌转移模型血清蛋白质的变化。方法用 pEGFP-N1绿色荧光蛋白基因转染具有转移能力的 SW480细胞株,在裸鼠皮下接种成瘤后,再原位接种于裸鼠右半结肠,利用整体荧光成像系统观察结直肠癌原位成瘤及发生转移的情况。同时采集裸鼠原位成瘤后不同转移阶段的血清,进行双向电泳联合时间飞行质谱分析差异蛋白质,观察结直肠癌转移模型裸鼠癌转移前后血清蛋白的变化。结果获得稳定表达绿色荧光蛋白的 SW480-EGFP 细胞株,裸鼠皮下接种成瘤率为100%,原位种植成瘤率为10/10,区域淋巴结转移为10/10,肝转移率为4/10,肺转移率为3/10。通过血清蛋白质组学技术成功鉴定了5个在癌转移发生后血清内显著升高的血清蛋白:结合珠蛋白α链,载脂蛋白 A4,载脂蛋白E,免疫球蛋白κ型 V 区 L 链和转铁蛋白。结论成功建立结直肠癌可视化转移模型,利用不同转移阶段鼠血清进行双向电泳图谱差异分析筛选出5个在癌转移发生后血清中显著升高的蛋白可能是与结直肠癌转移相关的蛋白。; 李祖国赵亮刘莉丁彦青; 关键词：结直肠肿瘤肿瘤转移动物血蛋白质类

两种样品制备方法对血清蛋白质双向凝胶电泳分离效果的影响被引量：4: 2007年; 目的评价两种样品制备方法对血清蛋白质双向凝胶电泳(2-DE)分离效果的影响,建立高分辨率、高重复性的血清2-DE图谱,为鉴定疾病相关血清蛋白质奠定基础。方法分别用热SDS法和直接溶解法处理大肠癌血清样品,采用固相pH梯度双向凝胶电泳技术分离总蛋白质,图像软件分析后,对其中3个差异蛋白质点行基质辅助激光解吸电离/飞行时间质谱鉴定。结果应用热SDS法处理血清总蛋白质进行双向电泳,可获得分辨率高、重复性好的人血清双向电泳图谱。对直接溶解和热SDS法处理的蛋白样品进行3次重复性检测,凝胶的平均蛋白质点数为675±46和702±49,平均匹配点数为573±42和623±52,匹配率为85.3%和89.6%,分析3块不同胶间蛋白质点在IEF方向的位置偏差为(0.85±0.30)mm和(0.81±0.28)mm,在SDS-PAGE方向上的偏差为(1.02±0.18)mm和(0.97±0.12)mm。热SDS处理的2-DE胶蛋白质点质谱可获得高质量质谱图,并可以检测到相对低丰度的血清蛋白质。结论热SDS法是一种更有效的血清蛋白质样品制备方法,我们利用热SDS法处理血清样品建立了分辨率较高且重复性好的人血清蛋白质双向凝胶电泳图谱。; 赵亮丁彦青梁莉李欣李雪华吴丽莎; 关键词：双向凝胶电泳蛋白质组

血清蛋白质组学研究中白蛋白和IgG去除方法的建立与评价被引量：14: 2004年; 目的建立和评价血清蛋白质组学研究中白蛋白和IgG的去除方法。方法应用Micro Bio-Spin column过滤纯化血清蛋白,去除白蛋白和IgG,利用双向凝胶电泳(2-DE)分析评价血清蛋白过滤效果。结果建立了血清白蛋白和IgG去除方法;过滤后大部分血清白蛋白和IgG能够去除,2-DE图谱中低丰度蛋白质分辨率增加。结论本研究建立的血清蛋白质纯化技术,可有效应用于疾病的血清蛋白质组学研究。; 李雪华李欣徐守军丁彦青; 关键词：蛋白质组学白蛋白 IGG 去除方法双向凝胶电泳

热休克蛋白27在大肠癌中的表达及其与淋巴结转移的关系被引量：3: 2008年; 目的探讨热休克蛋白27(HSP27)表达与大肠癌淋巴结转移的关系。方法应用免疫组化方法检测68例临床大肠癌组织标本中Hsp27的表达情况。应用RT-PCR、Western blotting和免疫组化方法检测不同转移潜能大肠癌细胞株中Hsp27mRNA和蛋白的表达情况。结果在大肠癌组织中,热休克蛋白27的表达率与年龄、性别、淋巴结转移、临床分期无相关性(χ2test,P>0.05),但其过表达和大肠癌淋巴结转移显著负相关(Fisher'sexacttest,P=0.035)。应用RT-PCR、Western blotting和免疫组化方法检测结果显示Hsp27基因和蛋白在高淋巴结转移潜能的SW620细胞中呈低表达,在低淋巴结转移潜能的SW480细胞中呈高表达。结论Hsp27和大肠癌肿瘤细胞的转移行为可能为负相关,可能在阻止其转移中发挥重要作用。; 赵亮李祖国丁彦青; 关键词：大肠癌热休克蛋白27 淋巴结转移

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广东省重大科技专项(2003A308401)