国家自然科学基金(20476085) 作品数:16 被引量:63 H指数:6 相关作者: 范代娣 骆艳娥 马晓轩 薛文娇 米钰 更多>> 相关机构: 西北大学 长安大学 西安工程科技学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家科技攻关计划 国家高技术研究发展计划 更多>> 相关领域: 化学工程 生物学 医药卫生 轻工技术与工程 更多>>
离子交换批量层析纯化重组类人胶原蛋白Ⅱ 被引量:6 2006年 对阳离子交换树脂CM52纯化类人胶原蛋白Ⅱ(Hum an-like Collagen B ioprote inⅡ,HCBⅡ)的合适条件进行了研究。通过实验,确定了批量层析的最佳操作条件,即在pH=4.0、NaC l 0.15 mol/L、进料质量浓度7 mg/mL、处理量17.26 mL/g进行吸附,吸附时间为60 m in,然后在pH=4.0、NaC l 0.30 mol/L下进行脱附。实验表明:采用批量层析吸附HCBⅡ后上柱洗脱,树脂CM52对HCBⅡ的吸附量可达到48.6 mg/g,回收率83.8%,最终纯化的HCBⅡ达电泳纯,相对分子质量为97k。 薛文娇 范代娣 尚龙安 鱼奇鳞关键词:离子交换 类人胶原蛋白基因工程菌诱导后比生长速率优化 2008年 目的优化类人胶原蛋白基因工程菌高温诱导后的比生长速率。方法通过分析不同比生长速率下发酵液中菌体浓度、类人胶原蛋白浓度、细胞得率系数(YX/S)、产物得率系数(YP/S)的变化,确定诱导后的最佳比生长速率。结果当比生长速率为0.04~0.05h-1,细胞浓度和类人胶原蛋白的浓度分别可达69.5g/L(DCW)和13.8g/L。结论诱导后的比生长速率对细胞生长、类人胶原蛋白的合成均产生显著性影响。 骆艳娥 范代娣 米钰 马晓轩 迟雷 王小刚关键词:类人胶原蛋白 重组大肠杆菌 比生长速率 基因重组大肠杆菌表达类人胶原蛋白诱导条件优化研究 被引量:7 2005年 为了提高重组大肠杆菌BL 21高密度发酵生产类人胶原蛋白的产量,分别研究了诱导时 机、乙酸浓度、诱导强度以及补氮方式对外源基因表达的影响,并对各因素进行了优化。采用补 料-分批式发酵,初始装液体积为6L。最终细胞密度可达到84.3g/L,类人胶原蛋白的表达量为 14.6g/L。结果表明:在对数生长的中后期进行诱导,尽量减少乙酸的积累量,42℃诱导3h后降温 至39℃继续诱导,并采用每隔10min补36ml补料氮溶液的周期操作方式,有利于细胞的生长和 外源蛋白的表达。 马晓轩 范代娣 骆艳娥 米钰关键词:类人胶原蛋白 大肠杆菌表达 基因重组 外源基因表达 细胞密度 积累量 BHK-21细胞在生物材料溶液中黏附及增殖比较 被引量:2 2007年 目的比较BHK-21细胞在3种生物材料溶液中黏附及增殖情况,探讨以类人胶原蛋白为基础制备组织工程材料的可行性。方法将BHK-21细胞分别种植于类人胶原蛋白、壳聚糖、透明质酸以及共混溶液中,在倒置显微镜下观察细胞的黏附和生长情况,并利用MTT方法检测种植后1~5 d细胞的增殖情况。结果BHK-21细胞种植12 h,类人胶原蛋白、壳聚糖以及两者共混溶液能显著促进BHK的黏附(P<0.01);BHK-21细胞在类人胶原蛋白溶液及类人胶原蛋白与其他生物材料共混溶液中功能活跃,维持其形态且能持续增殖,其中类人胶原蛋白/壳聚糖共混溶液促细胞增殖能力最强。结论类人胶原蛋白能够维持BHK细胞的生长与繁殖,在组织工程领域是一种极有潜力的组织工程材料。 王德伟 范代娣 费强关键词:类人胶原蛋白 MTT 周期操作对重组大肠杆菌高密度发酵表达类人胶原蛋白的影响 被引量:2 2006年 采用补料一分批式发酵,研究了4种不同间歇周期补氮操作对细胞生长和类人胶原蛋白表达的影响,以及发酵过程中细胞质粒稳定性、细胞菌落形成能力和乙酸生成量的变化。结果表明,在每隔10min连续补加 36mL补料氮溶液(22s完成补加操作)的周期操作下,细胞质粒稳定性明显提高,细胞菌落形成能力下降较小,乙酸生成量低,仅0.7 g/L,最终细胞密度为84 g/L,类人胶原蛋白表达量可达到14 g/L,在4种操作方式中最高。 马晓轩 范代娣 刘树文 骆艳娥关键词:重组大肠杆菌 高密度发酵 类人胶原蛋白 质粒稳定性 细胞活性 固相金属亲和层析纯化重组类人胶原蛋白 被引量:2 2008年 目的研究利用固相金属亲和层析纯化重组类人胶原蛋白的洗脱方法,以优化分离纯化的条件。方法将吸附了重组类人胶原蛋白的层析柱采用降低pH,增大离子强度和增大NH_4Cl浓度3种方法进行洗脱。结果采用增大NH_4Cl浓度的方法进行洗脱所得的洗脱峰面积最大,洗脱体积最小,纯化后重组类人胶原蛋白的纯度达97.9%,回收率为68.6%,纯化倍数为2.78。结论采用固相金属亲和层析纯化重组类人胶原蛋白是可行的,可有效地对重组类人胶原蛋白进行纯化。 王晓军 骆艳娥 范代娣关键词:纯化 重组大肠杆菌分批-补料培养生产类人胶原蛋白的过程控制 被引量:12 2005年 目的优化重组大肠杆菌高密度发酵的调控工艺。方法通过考察比生长速率、3种控氧方式以及诱导强度对细胞和类人胶原蛋白产量的影响,确定最佳的发酵工艺。结果比生长速率显著影响类人胶原蛋白的产量,且最适比生长速率为0.15~0.20h-1;在提高罐压的条件下,细胞和类人胶原蛋白的浓度均显著高于其他两种控氧方式,充入富氧空气的细胞和类人胶原蛋白的浓度均最低;诱导强度对细胞生长和蛋白质表达的影响非常大,当细胞浓度达47±2g/L(DCW)时,开始升温至42℃进行诱导,最佳条件为42℃保温2~3h,然后降温至39℃继续培养5~6h。结论通过优化重组大肠杆菌分批补料培养生产类人胶原蛋白的工艺,使得细胞和类人胶原蛋白浓度分别达68.94g/L(DCW)和13.02g/L。 骆艳娥 范代娣 花秀夫 张兮 王小刚关键词:类人胶原蛋白 重组大肠杆菌 比生长速率 壳聚糖金属螯合亲和吸附剂的制备 被引量:7 2009年 目的研究利用壳聚糖为载体、戊二醛为交联剂、亚氨基二乙酸(IDA)为螯合配基制备金属螯合亲和吸附剂的条件。方法戊二醛对壳聚糖进行交联,环氧氯丙烷法进行载体活化和螯合配基的偶联。键合IDA后与Cu2+螯合。结果采用0.22 mL/g(壳聚糖)戊二醛对壳聚糖进行交联。交联壳聚糖加入0.4 mol/L NaOH与体积分数为0.5的二甲亚砜的混合溶液中,充分搅匀,25℃下缓慢滴加1.2 mL(体积分数为0.3)的环氧氯丙烷,升温至40℃,170 r/min下振荡反应3h进行活化。之后,以4.26 g/g(壳聚糖)浓度的IDA进行连接反应,65℃下反应18 h。结论采用优化条件制备的金属螯合亲和吸附剂对Cu2+有较大螯合量,可用作固定化金属亲和层析的固定相。 王晓军 范代娣 任妍君关键词:壳聚糖 交联 螯合 重组类人胶原蛋白Ⅱ的表达与纯化 被引量:4 2006年 研究了类人胶原蛋白Ⅱ在基因工程菌E.coliBL213.7中的表达与纯化。经高密度发酵及代谢调控,重组菌在12.8L发酵罐中的最终菌体密度约为150。菌体经高压匀浆破碎、沉淀、超滤、阳离子交换色谱纯化后,表达产物纯度达96.4%,总回收率71.6%。 侯文洁 范代娣 薛文娇 张卫刚 鱼麒麟关键词:高密度发酵 纯化