国家自然科学基金(30470415)
- 作品数：7 被引量：46H指数：4
- 相关作者：蔡建明崔建国唐古生李百龙倪瑾更多>>
- 相关机构：第二军医大学上海交通大学医学院附属瑞金医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 反义STAT3寡核苷酸对B16细胞辐射敏感性的研究被引量：7
- 2006年
- 目的探讨反义STAT3转染鼠恶性黑色素瘤B16细胞后,肿瘤细胞辐射敏感性的变化。方法利用反义寡核苷酸转染B16细胞后,以不同剂量γ射线照射。通过CCK-8试剂盒检测细胞增殖变化,Hoechst33258染色对细胞凋亡作形态学上的观察。用Annexin V/PI复染,流式细胞仪检测细胞早期凋亡率的变化。结果反义STAT3转染后加以γ射线照射,B16细胞的增殖相比于两者单独作用组受到明显抑制,细胞凋亡水平也增加。结论反义STAT3寡核苷酸联合γ射线对B16细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用明显增强,提高了鼠黑色素瘤B16细胞的辐射敏感性;表明阻断STAT3蛋白表达可能成为一种新的提高肿瘤辐射敏感性的有效手段。
- 唐古生蔡建明倪瑾吴君项莺松崔建国单鹄声赵芳
- 关键词：B16凋亡肿瘤治疗
- STAT3反义寡核苷酸对人肺腺癌放射治疗的增效作用被引量：8
- 2005年
- 目的:评价STAT3反义寡核苷酸对人肺腺癌细胞A549增殖抑制作用及辐射增敏作用,探讨新的肺癌分子靶向治疗药物。方法:2003-10/2004-11于解放军第二军医大学放射医学教研室,应用阳离子脂质体介导STAT3反义寡核苷酸转染人肺腺癌A549细胞,westernblot检测STAT3总蛋白和p-STAT3蛋白的表达;MTT法检测细胞增殖状态;流式细胞术检测细胞周期;用克隆形成分析和SF2研究人肺腺癌细胞A549辐射敏感性的变化。结果:STAT3反义寡核苷酸转染人肺腺癌A549后STAT3蛋白的表达和磷酸化水平下降,细胞增殖受抑制,出现G1阻滞;照射后12d,反义寡核苷酸组测定SF2值是(46.78%±3.25%),较对照组(61.52%±2.74%)明显降低(P<0.01)。结论:STAT3反义寡核苷酸可以抑制STAT3蛋白表达和细胞增殖,对人肺腺癌细胞A549有辐射增敏作用。
- 高伟王雅杰唐古生蔡建明金冶宁韩玲薛春燕
- 关键词：寡核苷酸类反义肺腺肿瘤
- STAT3反义核酸对肺腺癌A549细胞辐射增敏作用研究
- 2011年
- 目的探讨STAT3反义核酸对肺腺癌辐射敏感性的影响。方法以本室自行设计的STAT3反义核酸转染肺腺癌A549细胞,分别接受4、8、12、16、20 Gy 60Coγ射线照射,CCK-8法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞早期凋亡。建立局部照射荷瘤小鼠模型,瘤内多点注射STAT3反义核酸,给药剂量15 mg/kg,连续2周,给药后2 h以60Coγ射线局部照射,照射剂量20 Gy,每次2 Gy,每周5次,连续2周,照射剂量率1 Gy/min。计算肿瘤体积、肿瘤生长延缓时间、相对生长速率、生长抑制率、q值,测量肿瘤质量。结果体外实验结果表明,与单独照射组相比,反义STAT3联合照射能降低A549细胞的存活率,增加细胞早期凋亡;体内实验结果表明反义STAT3联合肿瘤局部照射能明显减慢移植瘤的生长速度。结论反义STAT3既具有化疗效果,又具备放疗增敏作用,对提高肿瘤的放疗效果有良好的开发前景。
- 孙顶祝宝让高福李百龙程赢蔡建明崔建国
- 关键词：反义寡核苷酸类STAT3辐射增敏药肺腺癌
- STAT3反义寡核苷酸对人肺腺癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用被引量：2
- 2011年
- 目的探讨我们自行设计的STAT3(signal transducer and activator of transcription 3)反义核酸(ASODN)对裸鼠肺腺癌A549细胞移植瘤的成瘤能力和移植瘤的抑制作用。方法将经全硫代修饰的STAT3 ASODN加入到培养的A549细胞内,CCK-8法检测细胞生长的抑制率,然后将这种细胞接种于裸鼠颈部皮下,观察肿瘤出现的时间和肿瘤体积的变化,并计算成瘤率。同时取未经处理的A549细胞接种于裸鼠颈部皮下建立移植瘤模型,待瘤结节直径大于5 mm后,分为STAT3ASODN实验组、生理盐水组和无义寡核苷酸对照组。实验组用15 mg/kg ASODN每天1次直接瘤内注射,连续3周,隔日测量肿瘤大小。处理30 d后,剥离瘤块称质量。蛋白质免疫印迹法检测肿瘤中STAT3、p-STAT3的表达。结果 STAT3 ASODN显著抑制A549细胞生长,与无义寡核苷酸组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。STAT3 ASODN作用后的A549细胞在裸鼠皮下成瘤能力明显降低,抑瘤率达75.8%。在各组荷瘤动物模型中,生理盐水对照组和无义寡核苷酸对照组的瘤体进行性增大,而STAT3 ASODN处理组的瘤块生长缓慢,与2个对照组相比均有差异(P<0.01),处理30 d后,ASODN处理组的肿瘤质量与2个对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05),STAT3 ASODN处理组裸鼠A549细胞移植瘤的生长明显受到抑制,抑瘤率为51.1%。肿瘤中STAT3蛋白表达水平以及磷酸化水平也明显下调。结论 STAT3 ASODN能降低A549细胞的成瘤率、抑制移植瘤生长。
- 孙顶蔡建明祝宝让程赢李百龙崔建国
- 关键词：反义寡核苷酸类STAT3肿瘤移植抑瘤作用
- 反义STAT3对肿瘤细胞增殖抑制和诱导凋亡的作用被引量：23
- 2006年
- 背景与目的:研究表明STAT3蛋白在多种肿瘤组织或细胞中高表达,STAT3蛋白可能参与了肿瘤的形成和发生。本文拟研究STAT3蛋白在鼠黑色素瘤细胞B16、人肝癌细胞SMMC-7721、人肝癌细胞HepG-2、人肺癌细胞A549、人宫颈癌HeLa细胞株中表达和活化情况,研究反义STAT3寡核苷酸对B16细胞的增殖抑制和促凋亡作用,为进一步反义药物设计及应用于辐射领域作前期研究。方法:利用Westernblot检测所选几种肿瘤细胞的STAT3蛋白表达和磷酸化情况、反义干涉前后B16细胞中STAT3蛋白表达和磷酸化活化的变化情况,MTT法检测细胞增殖变化,利用Hoechst33258染色对细胞凋亡作形态学上的观察,用AnnexinⅤ/PI复染结合流式细胞仪检测细胞早期凋亡。结果:所研究的几种肿瘤细胞中均可检测到STAT3蛋白的高表达和磷酸化;反义STAT3转染后,B16细胞中STAT3蛋白的表达量及磷酸化水平均有下降;转染后48h,在0到200nmol/L范围内,反义核酸浓度越高,对B16细胞的增殖抑制效应越强,但是并不能够完全抑制肿瘤细胞的增殖(P<0.01)。寡核苷酸浓度超过250nmol/L时,正义对照也表现出一定的增殖抑制作用(P<0.05);转染后不同时间内检测,结果表明转染后24h反义核酸即开始表现出一定的增殖抑制效应,48h起表现出明显的抑制效应;反义转染后,检测各组细胞早期凋亡率:对照组早期凋亡率为5.52%,反义400、800、2000nmol/L组早期凋亡率分别为8.22%、9.99%,16.97%,正义对照400、800、2000nmol/L组早期凋亡率分别为5.87%、5.36%、13.31%。统计分析表明反义寡核苷酸与B16细胞作用后能够促进细胞的早期凋亡(P<0.01),正义低浓度转染组(400、800nmol/L组)与对照组无明显差别(P>0.05),而对照组与正义2000nmol/L组相比,细胞的早期凋亡率也有统计学差异(P<0.01)。结论:B16、SMMC-7721、HepG-2、A549、HeLa等恶性肿瘤细胞株中STAT3蛋白高表达并且可检测到磷酸化水平的增高
- 唐古生蔡建明倪瑾项莺松崔建国朱丹董俊瑞
- 关键词：STAT3蛋白凋亡肿瘤细胞增殖抑制
- INK4A基因及P16蛋白在辐射诱导小鼠白血病模型中的变化被引量：2
- 2008年
- 目的研究INK4A基因及编码的P16蛋白在辐射诱导的小鼠白血病模型中的改变。方法7．0Gy^60Coγ射线分4次照射BALB／c小鼠建立辐射诱导的小鼠白血病模型；PCR扩增INK4A基因第1、第2外显子，俭测等位基凶纯合性缺失，甲基化敏感酶切PCR法检测INK4A基因的甲基化发隹情况，并应用PCR单链构象多态性分析方法检测碱基突变的发生；Westernblot检测P16蛋白含量改变。结果在21例白血病模型组织中，外显子2缺失5例，4例发生甲基化，有11例蛋白表达明显下降。结论辐射诱导的小鼠白血病模型发生过程中伴有P16蛋白表达下降，INK4A基因改变以纯合性缺失和甲基化为主。
- 高福蔡建明崔建国杨平黄越承李百龙闵锐倪瑾孙顶
- 关键词：INK4A白血病模型P16蛋白
- STAT3反义核酸对A549细胞增殖和凋亡的影响被引量：11
- 2007年
- 背景与目的:研究表明,STAT3(signal transducer and activator of transcription 3)蛋白在多种肿瘤组织或细胞中高表达,STAT3蛋白可能参与了肿瘤的发生与发展。本研究拟设计筛选出针对STAT3的高效反义核酸,研究STAT3反义核酸对人肺腺癌细胞A549增殖及凋亡的影响。方法:用RNAStructure4.2软件和STAT3 mRNA全长序列设计出10组反义STAT3序列,并分别转染A549细胞;Cell Count Kit(CCK-8)检测细胞增殖变化,倒置相差显微镜观察细胞增殖和凋亡的变化;Hoechst33258染色观察细胞凋亡形态变化,AnnexinⅤ/PI复染检测细胞早期凋亡,Western blot检测STAT3蛋白表达和磷酸化,及其下游Bcl-xL蛋白表达的变化,用碘化丙啶(propidium iodide,PI)单染结合流式细胞仪检测细胞周期变化。结果:设计出的10条反义序列对A549细胞增殖有明显抑制作用,AS10对细胞的增殖抑制率达到75.46%;反义核酸浓度越高,对A549细胞的增殖抑制效应越强(P<0.01)。反义转染后,胞膜皱缩和核固缩形态的典型细胞凋亡明显增多,AnnexinV/PI双标流式细胞仪检测发现,反义转染后能够促进细胞的早期凋亡(P<0.01),早期凋亡率达11.51%;而正常对照组细胞的早期凋亡率为5.18%。STAT3蛋白及其下游Bcl-xL蛋白表达变化明显下降,STAT3蛋白磷酸化水平也降低。PI单染结合流式细胞仪检测发现,正常对照组的S期细胞为44.47%,G1期的细胞则为48.49%;反义转染后的S期细胞明显减少(23.70%),G1期细胞明显增多(63.96%)。结论:通过计算机辅助设计筛选得到的高效STAT3反义序列对A549细胞有强烈的增殖抑制作用,能有效促进A549细胞的凋亡,其机理与反义STAT3抑制STAT3蛋白表达、降低磷酸化水平、下调Bcl-xL基因以及使细胞发生G1期阻滞有关。
- 祝宝让蔡建明唐古生李百龙高福崔建国刘汉臣
- 关键词：反义核酸STAT3A549细胞增殖凋亡
