杭州市卫生科技计划项目(2012ZD001)
- 作品数：4 被引量：21H指数：2
- 相关作者：余道军陈懿何慧陈羽帅向华更多>>
- 相关机构：杭州市第一人民医院浙江中医药大学温州医科大学更多>>
- 发文基金：杭州市卫生科技计划项目浙江省公益性技术应用研究计划项目浙江省医药卫生科学研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 不同液化处理及核酸共提取方法对痰样本中病毒核酸的提取效果比较被引量：1
- 2016年
- 目的比较不同痰液液化方法及不同核酸提取方法共提取痰液中病毒RNA和DNA的效果，并比较其优劣。方法将痰液样本分为二硫苏糖醇（DTT）、氢氧化钠（NaOH）液化痰液组，以生理盐水为对照，分别使用TIANampVirusDNA／RNAKit（方法1）、KBW酶法（方法2）、KBW通用法（方法3）和单一核酸提取试剂盒（方法4）提取核酸，微量核酸分析仪检测核酸纯度，多重定量PCR方法检测核酸的浓度。结果核酸纯度测定结果：生理盐水组中方法2和方法3，DTT处理组中方法1和方法2，NaOH处理组中方法3所提DNA纯度略大于1．8；各组中采用方法l所提RNA纯度均明显超过2，方法4及NaOH处理组中方法3所提R-A纯度均低于1．8，其余纯度均在正常范围内。PCR浓度测定结果：腺病毒（DNA）Ct值：生理盐水组〈NaOH处理组（q=35．09，P〈0．05），生理盐水组和DTT处理组间差异无统计学意义（q=2．54，P〉0．05）；提取方法1〈方法3（q=12．68，P〈0．05），方法1、方法2与方法4之间差异无统计学意义（q=0．84、1．69、2．53，P〉0．05）；呼吸道合胞病毒（RNA）Ct值：生理盐水组〈DIT组〈NaOH组（F=152．76，P〈0．01）；提取方法l〈方法2〈方法3（q=6．98、3．75，P〈0．05），方法2与方法4之间差异无统计学意义（q=1．28，P〉0．05）。结论痰液液化前处理会影响病毒RNA和DNA的共提取，TIANampVirusDNA／RNAKit和KBW酶法对痰样本中病毒核酸共提取效果较好。
- 何慧陈懿潘平潘富根余道军
- 关键词：腺病毒呼吸道合胞病毒
- 小儿医院获得性肺炎的病原菌及危险因素分析被引量：4
- 2014年
- 目的调查儿童医院院内获得性肺炎(HAP)的病原菌构成,并分析HAP的危险因素。方法采集深部痰,进行革兰氏染色、细菌培养及药敏测定,并对HAP患儿危险因素进行非条件多因素Logistic回归分析。结果56例HAP患儿以革兰氏阴性菌(90.4%)感染居多,前4位分别是铜绿假单胞菌25%(14/56)、肺炎克雷伯菌21.4%(12/56)、大肠埃希氏菌14.3%(8/56)、鲍曼不动杆菌10.7%(6/56)。Logistic回归分析显示,HAP与住院时间大于7 d(P<0.01)、侵入性操作(P<0.01)、三代头孢菌素应用(P<0.05)相关。结论小儿HAP病原菌以革兰氏阴性菌多见,住院时间长、侵入性操作、三代头孢菌素应用是小儿HAP的独立危险因素。
- 张艺帅向华余道军
- 关键词：医院获得性肺炎病原菌耐药儿童
- 不同保存和处理方式对全血标本总RNA提取的影响被引量：16
- 2015年
- 目的分析全血标本RNA提取的影响因素,并对全血RNA提取条件进行优化。方法收集100例全血标本,混匀后分为低渗红细胞溶解组(A组,50例)和全血直接提取组(B组,50例),利用Trizol试剂提取放置在不同温度、不同保存时间的全血标本总RNA,并采用Ur-2401紫外分光光度计测定其浓度和纯度;另选60例全血标本作为反复冻融组(C组),取不同次数反复冻融的全血标本利用Trizol法直接提取其RNA。结果 A组和B组新鲜标本中所获取的RNA浓度分别为450.0 ng/μL和458.8 ng/μL,37℃保存7 d标本中的RNA浓度分别为374.8 ng/μL和375.2 ng/μL,不同的保存温度与时间均对总RNA浓度(P=0.003、P=0.002)和纯度(P值均为0.011)的差异均有统计学意义,而相同条件下提取的总RNA浓度和纯度的差异无统计学意义(P=0.984、P=0.311);C组全血标本反复冻融的次数与保存时间对总RNA浓度(P=0.002、P=0.001)、纯度(P值均为0.008)差异均有统计学意义,而保存温度对总RNA浓度和纯度差异无统计学意义(P=0.611、P=0.362)。结论不同条件下全血标本中所获取的总RNA浓度有所差异,但在总RNA纯度和成功率方面,低渗破坏红细胞法优于直接全血提取法,反复冻融影响全血RNA提取效率和得率。
- 何松哲何慧陈懿陈羽余道军
- 关键词：RNA提取
- TaqMan探针双重荧光定量PCR同时检测解脲支原体和巨细胞病毒
- 2014年
- 目的探讨双重荧光定量PCR技术的优化条件,建立基于TaqMan探针技术荧光定量法检测同时检测解脲支原体和巨细胞病毒的新方法。方法分别采用普通定性PCR扩增母婴垂直传播常见的病原体(解脲支原体和巨细胞病毒)测序鉴定,然后分别采用TaqMan探针的单重和双重定量PCR技术对解脲支原体和巨细胞病毒同时定性定量检测。结果解脲支原体和巨细胞病毒单种定性PCR检测均为阳性,TaqMan探针单重和双重定量PCR检测解脲支原体和巨细胞病毒阳性率和特异性均为100%,相同样品TaqMan探针单重、双重定量PCR分别检测的结果符合率100%。结论 TaqMan探针双重荧光定量PCR技术可同时检测两种靶分子,结果可靠,应用前景广阔。
- 胡洁张卫英何松哲沈雯儿余道军
- 关键词：解脲支原体巨细胞病毒TAQMAN探针
