国家自然科学基金(81071481)
- 作品数：11 被引量：19H指数：3
- 相关作者：殷国勇张宁胡志毅芮泽王长军更多>>
- 相关机构：江苏省人民医院南京医科大学沭阳县人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 持续性压力促进成骨细胞分泌VEGF的机制被引量：5
- 2011年
- 目的:探讨持续性压力促进成骨细胞分泌血管内皮生长因子(VEGF)的机制。方法:取1～2日龄SD大鼠颅盖骨进行成骨细胞原代培养,检测并鉴定成骨细胞。细胞培养至第3代,分为加压组和不加压组,每组再分成PD98059不预处理组和预处理组。加压组在密闭容器内采用压缩空气施以100 kPa的静压力,分别加压0.5、2.0、6.0 h,ELISA法检测培养液中VEGF浓度,RT-PCR检测VEGF mRNA的变化;Western blot检测各组成骨细胞内磷酸化ERK1/2(pERK1/2)的水平。结果:持续性压力促进成骨细胞VEGF mRNA的表达和蛋白的分泌,同时也明显增加ERK1/2的磷酸化水平;而ERK1/2总蛋白的量却无明显变化。PD98059在显著抑制持续性加压所诱导的成骨细内ERK1/2磷酸化水平的同时,抑制了VEGF的表达及分泌。结论:持续性压力通过ERK1/2的激活调节成骨细胞VEGF的分泌。
- 芮泽张宁胡志毅殷国勇
- 关键词：细胞外信号调节激酶1/2血管内皮生长因子
- JNK抑制剂及NAC对氧糖剥离后复氧复糖所致脊髓神经元损伤的保护作用
- 2011年
- 目的:初步探讨JNK(The c-Jun NH-terminal kinase)抑制剂及N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)对脊髓神经细胞氧糖剥夺复糖复氧的保护作用。方法:离体脊髓神经元氧糖剥夺复糖复氧损伤(oxggen-glucose deprivation/regain,OGD/R)模型建立。随机分组:A组对照组(n=6);B组JNK抑制剂组(n=6);C组NAC处理组(n=6)。分别于脊髓神经元氧糖剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)4 h后,再复氧复糖4、12、24 h,应用MTT法检测细胞凋亡。结果:成功建立OGD/R模型;脊髓神经元OGD/R后,B组和C组MTT各时间点吸光值均高于A组,但B组和C组间差异不显著。结论:JNK抑制剂及NAC能有效抑制体外培养的脊髓神经元氧糖剥夺复糖复氧所引起的凋亡。
- 华政哲张子韬张宁胡志毅蔡卫华殷国勇
- 关键词：脊髓神经细胞缺血再灌注损伤JNK抑制剂凋亡
- 骨髓间充质干细胞与成骨细胞复合培养对成骨细胞增殖的影响被引量：3
- 2011年
- 目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)与成骨细胞复合培养对成骨细胞增殖的影响。方法将BMSCs与成骨细胞分别按1∶2、1∶4、1∶1、2∶1和4∶1比例复合培养(分别为A1组、A2组、A3组、A4组和A5组);另设成骨细胞培养组(B1组)和BMSCs培养组(B2组)为对照。流式细胞术检测复合培养组的细胞比例;细胞计数试剂盒8(CCK-8)测定所有细胞培养组的生长曲线;RT-PCR检测碱性磷酸酶(ALP)及Ⅰ型胶原mRNA表达。结果 BMSCs与成骨细胞复合培养能促进成骨细胞增殖,以A2组效果最好,明显大于B1组(P<0.05);而A2组ALP及Ⅰ型胶原mRNA表达与B1组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论 BMSCs与成骨细胞复合培养能促进成骨细胞增殖,其中1∶4比例最佳。
- 王长军殷国勇李翔沈国强
- 关键词：成骨细胞骨髓间充质干细胞
- GIT1发夹结构对成骨细胞内局部黏附激酶的磷酸化和分布的影响被引量：1
- 2011年
- 目的探索G蛋白偶联受体激酶结合蛋白1的RNA发夹结构(GIT1-RNAh)对成骨细胞内局部黏附激酶(FAK)的磷酸化和分布的影响。方法成功构建含GFP-RNAh和GIT1-RNAh的腺病毒,在血小板衍生生长因子(PDGF)刺激的条件下,免疫荧光染色法检测成骨细胞内FAK的蛋白分布,Western blot检测FAK的磷酸化水平,Image J软件检测成骨细胞的扩增面积。结果与感染GFP-RNAh的成骨细胞相比,在PDGF刺激条件下,GIT1-RNAh明显抑制FAK磷酸化水平(P<0.05),扰乱FAK的分布,抑制成骨细胞的面积扩增(P<0.05)。结论 GIT1-RNAh通过扰乱FAK的分布及其磷酸化抑制成骨细胞的面积扩增。
- 谭诗平张宁胡志毅殷国勇
- 关键词：成骨细胞
- 退变性腰椎滑脱症Modic分型和椎间盘退变分级的关系被引量：5
- 2012年
- 目的:研究退变性腰椎滑脱症需手术治疗患者术前Modic改变与椎间盘退变程度之间的关系。方法:2009年1月～2011年10月,腰椎滑脱症需手术治疗的患者44例,术前MRI对病变节段进行Modic分型,并用Pfirrmann分级和改良的Pfir-rmann分级评定病变节段椎间盘的退变程度;分析不同类型的Modic改变之间椎间盘退变分级的差异;评价Modic改变与椎间盘退变程度之间的关系。结果:44例患者中,12例无Modic改变,Pfirrmann分级为3.92±0.29,改良分级为5.92±0.90;ModicⅠ型改变16例,Pfirrmann分级为4.31±0.60,改良分级为6.88±1.54;ModicⅡ型改变15例,Pfirrmann分级为4.27±0.46,改良分级为6.87±0.83;ModicⅢ型改变1例,Pfirrmann分级为Ⅳ级和改良分级为6级。统计显示,ModicⅠ、Ⅱ型与无改变组之间的Pfirrmann分级与改良分级有显著性差异(P<0.01)。ModicⅠ型改变和Ⅱ型改变之间的Pfirrmann分级及改良分级均无显著性差异(P>0.05)。ModicⅠ型改变和无改变组之间、Ⅱ型和无改变组之间的改良Pfirrmann分级有统计学性差异(P<0.05)。结论:在本组退变性腰椎滑脱症病例中,Modic改变与椎间盘退变Pfirrmann分级和改良分级之间有明确关联;ModicⅠ型和Ⅱ型改变之间的Pfirrmann分级与改良分级无明显差别。
- 钱文武成意余利鹏殷国勇张宁
- 关键词：退变性腰椎滑脱症MODIC改变
- 缺血再灌注损伤时iNOS通过激活BAD诱发脊髓神经元凋亡被引量：1
- 2013年
- 目的:探讨大鼠脊髓缺血再灌注损伤过程中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)调控脊髓神经元凋亡的具体机制。方法:42只SD大鼠随机分为假手术组(A组,6只)、缺血再灌注组(B组,18只)和iNOS抑制组(C组,18只)。A组动物麻醉后仅腹腔切开,B组及C组采用腹主动脉阻断法(夹闭腹主动脉1 h后松开,再灌注6、12、24 h)建立脊髓缺血再灌注损伤模型。手术后,A组及B组动物按5 ml/kg腹腔注射5%二甲基亚砜,C组动物按150 mg/kg腹腔注射同等量氨基胍。Tarlov运动功能评分法评估三组大鼠的后肢运动功能。取腰段脊髓组织,透射电镜观察脊髓神经细胞形态学变化,神经元特异性抗体NeuN免疫荧光计算各组脊髓组织中存活神经元数目,Western blot检测iNOS、Bcl-xL/Bcl-2相关死亡启动因子(Bcl-xL/Bcl-2 associated death promoter,BAD)、磷酸化BAD(p-BAD)、14-3-3及细胞色素C的表达,免疫共沉淀检测BAD与14-3-3的结合状态。结果:Tarlov运动功能评分显示A组大鼠后肢运动功能无损害,B组和C组大鼠后肢功能明显损害,但C组大鼠后肢功能好于B组(P<0.05)。NeuN免疫荧光结果显示B组和C组大鼠脊髓神经元数目明显减少,但C组大鼠脊髓神经元数目多于B组(P<0.05)。电镜结果示B组及C组中脊髓组织均有明显凋亡现象,但C组大鼠凋亡程度较轻。Western blot结果表明iNOS和细胞色素C表达量在B组及C组中随再灌注时间延长而增加,但相同再灌注时间C组表达强度明显弱于B组(P<0.05);p-BAD表达量则随着灌注时间延长而下降,但C组中下降程度明显小于B组(P<0.05)。免疫共沉淀结果表明:BAD与14-3-3结合力随着再灌注时间的延长在B组和C组中逐渐降低,但是C组程度更慢(P<0.05)。结论:脊髓缺血再灌注过程中,iNOS通过促进pBAD去磷酸化,降低BAD与14-3-3的结合力,进而诱发脊髓神经元的凋亡。
- 黄瑶李益明凡进李青青殷国勇
- 关键词：缺血再灌注损伤脊髓诱导型一氧化氮合酶BCL-XL
- 椎间植骨融合术和后外侧植骨融合术对腰椎后凸Cobb角的影响被引量：3
- 2013年
- 目的探讨椎间植骨融合术和后外侧植骨融合术治疗腰椎退行性病变对腰椎后凸Cobb角的影响。方法 47例腰椎退行性病变患者分为椎间融合植入Cage组(A组,36例)和后外侧植骨融合组(B组,11例)。在侧位X线片上,按病变节段分别计算两组术前和末次随访时的后凸Cobb角度及其差值。结果 A、B两组患者末次随访时不同病变节段的Cobb角度均大于术前(P<0.01);A组L4-L5和L5-S1的Cobb角度差值均大于B组[(3.86±2.11)度vs.(1.29±0.92)度和(3.72±2.08)度vs.(0.73±0.22)度](P<0.01)。结论椎间融合和椎体后外侧融合两种术式都能有效改善腰椎退行性病变时腰椎后凸Cobb角;椎间融合术式增大Cobb角和维持腰椎前凸的效果更好。
- 李益明凡进刘玉文龙浩余利鹏殷国勇
- 关键词：腰椎退行性病变椎间融合COBB角
- GIT1发夹结构对骨折愈合过程中软骨细胞分化的影响
- 2011年
- 目的探索G蛋白偶联受体激酶结合蛋白1(GIT1)的RNA发夹结构对骨折愈合过程中软骨细胞分化的影响。方法按Hiltunen A方法制作闭合性大鼠左侧胫骨标准骨折模型,将40只大鼠均分成两组:对照组于骨折端注射含GIT1 WT的慢病毒;实验组骨折端注射含GIT1 RNA发夹结构(GIT1-RNAh)的慢病毒。Western blot检测蛋白表达,免疫组化法检测骨折愈合14、21 d软骨细胞内Ⅱ型胶原的表达,免疫荧光染色方法检测骨折愈合14、21 d软骨细胞的凋亡。结果对照组骨折端的骨痂内检测到GIT1蛋白的表达;而实验组骨痂内GIT1蛋白的表达明显被抑制,软骨细胞异常增生,Ⅱ型胶原的表达明显增加,软骨细胞的凋亡明显被抑制。结论 GIT1-RNAh通过降低GIT1蛋白的表达干扰了软骨细胞的分化,从而影响骨折愈合。
- 周炜殷国勇张宁
- 关键词：软骨细胞分化
- 颈椎生理弧度的恢复对脊髓型颈椎病患者术后症状改善的影响被引量：1
- 2013年
- 目的研究颈椎病患者术后颈椎弧度的恢复对临床症状改善的影响。方法 60例颈椎病患者分为术前生理弧度变直而术后弧度恢复(A组,14例)或未恢复组(B组,17例)、术前颈椎反弓而术后弧度恢复(C组,12例)或未恢复组(D组,17例)。比较各组手术前后颈椎弧度变化及日本骨科协会(JOA)评分改善率。结果各组患者术后颈椎整体弧度、手术节段弧度、颈椎JOA评分均较术前改善(P<0.05)。A组术后颈椎JOA评分改善率优于B组(P<0.05或P<0.01),C组JOA评分改善率优于D组(P<0.05)。结论对于颈椎弧度异常的颈椎病患者,前路手术能改善其颈椎弧度及临床症状;恢复颈椎生理弧度有利于患者症状改善。
- 刘玉文余利鹏凡进李益明吴敏杰顾延庆龙浩殷国勇
- 关键词：脊髓型颈椎病
- G蛋白偶联受体激酶结合蛋白1的SHD结构域对成骨细胞内局部黏附激酶活性的影响
- 2011年
- 目的探讨G蛋白偶联受体激酶结合蛋白1（GIT1）的SHD结构域对成骨细胞内局部黏附激酶（FAK）活性的影响，并分析其机制。方法取1～2dSD大鼠颅盖骨进行成骨细胞原代培养，传至第3代。体外构建野生型GIT1和删除了SHD结构域的GIT1的质粒并组成慢病毒。血小板衍生生长因子（PDGF）刺激成骨细胞后，采用免疫共沉淀法检测GIT1、删除了SHD结构域的GIT1与FAK的相互关系，采用免疫荧光法检测GIT1和FAK在成骨细胞内的位置、删除了SHD结构域的GIT1对成骨细胞内FAK位置和活性的影响。结果PDGF刺激成骨细胞后，GIT1与FAK的相互结合明显增加，且随着时间的增加，结合量逐渐增加（F=293．105，P=0．000）。免疫荧光染色结果表明：PDGF刺激后，成骨细胞局部黏附内活性形式的FAK（FAK酪氨酸397磷酸化）明显增加。PDGF刺激成骨细胞后，删除了SHD结构域的GIT1与FAK的结合明显被抑制，且随着时间的增加，二者的相互关系无明显变化（F=0．322，P=0．737）；删除了SHD结构域的GITI抑制成骨细胞局部黏附内FAK酪氨酸397的磷酸化，同时降低FAK在局部黏附内的表达。结论删除了SHD结构域的GIT1通过降低与FAK的相互结合，从而抑制成骨细胞局部黏附内FAK酪氨酸397的磷酸化，影响成骨细胞的功能。
- 于留钱张宁胡志毅殷国勇
- 关键词：载体蛋白质类
