北京市自然科学基金(07G0802)
- 作品数：3 被引量：4H指数：2
- 相关作者：汪思应杨晓明李长燕詹轶群翟倩更多>>
- 相关机构：安徽医科大学军事医学科学院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- THAP11转基因线虫载体的构建及转基因线虫的制备
- 2009年
- 目的构建带有线虫组织特异启动子的含不同ployQ的THAP11转基因线虫载体,并制备转基因线虫,为进一步研究THAP11基因的功能提供基础。方法设计引物,以THAP11-pcDNA3.1his/mycB真核表达载体为模板,PCR法扩增含不同ployQ的THAP11基因,将其克隆至带有线虫组织特异性启动子的pFx-unc119(Gene Marker dsRed)载体。酶切及测序鉴定正确后,用显微注射的方法制备THAP11转基因线虫,用荧光显微镜观察载体荧光表达并提取转基因线虫基因组DNA、RNA,PCR、RT-PCR方法检测其整合及表达情况。结果PCR扩增出含不同ployQ的THAP11-HIS片段,长度约1000bp,测序正确并构建pFx-unc119(THAP11)载体,THAP11转基因线虫的载体在线虫体内稳定表达红色荧光,转基因线虫基因组内有相应的THAP11插入及转录。结论成功构建的THAP11转基因线虫的载体能稳定转染线虫,将有助于THAP11功能的进一步研究。
- 杨帆李长燕任长虹赵娜杨晓明汪思应
- 关键词：动物基因修饰漂亮
- 死亡相关蛋白11对染色质形态的影响被引量：2
- 2008年
- 目的研究死亡相关蛋白11(THAP11)对染色质形态的影响。方法将THAP11与pRC-lac载体上lac的阻遏物融合表达于AO3-1细胞中,然后利用染色质形态检测技术检测THAP11对染色质形态的影响。结果与对照组比较,THAP11能使染色质更加浓缩。结论THAP11可能具有转录抑制功能和作为白血病的抑癌因子,为进一步研究THAP11功能提供了线索。
- 李扬朱晨雁翟倩丁丽华叶棋浓李长燕詹轶群杨晓明汪思应
- 关键词：基因染色质
- 人THAP11慢病毒载体的构建及表达研究被引量：2
- 2010年
- 目的构建人死亡相关蛋白11(THAP11)基因的慢病毒载体,并建立其慢病毒表达系统。方法 PCR方法获得人THAP11基因,限制性内切酶酶切和基因重组构建慢病毒载体质粒pBPLV-THAP11-myc,并通过转染HEK293细胞观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达以及Westernblot检测其表达。在脂质体介导下将重组质粒与包装质粒pLP1和pLP2、包膜质粒pLP/VSVG共转染293FT细胞包装产生慢病毒。结果构建的质粒经PCR,酶切及测序鉴定正确;该质粒与包装质粒共转染293FT细胞获取的5.5×106TU/ml慢病毒滴度。结论成功构建了人THAP11基因慢病毒载体质粒THAP11-myc-pBPLV,并建立了其慢病毒表达系统,为后续的应用研究奠定了基础。
- 黄先红李长燕詹轶群王治东许望翔杨晓明汪思应
- 关键词：质粒
