卫生部科技专项基金(wkj2006-02-206)
- 作品数：3 被引量：6H指数：2
- 相关作者：袁利学刘洋郑金旭严玉兰步雪峰更多>>
- 相关机构：江苏大学附属人民医院江苏大学中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
- 发文基金：卫生部科技专项基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 鼠IL-28重组腺病毒体外抗肺癌活性研究被引量：1
- 2011年
- 目的将已成功构建的mlL-28A重组腺病毒载体转染至肺腺癌细胞LA795，并对其抗肺癌细胞生物学活性进行研究。方法将Ad—pshuttle—cmv—mlL-28A转染至LA795细胞，用PCR、免疫细胞荧光、Tunel、AnnexinV及MTT法等进行检测。结果LA795细胞转染Ad—mlL-28A后，mlL-28A的mRNA基因表达明显增加，且细胞内明显表达IL-28蛋白，LA795细胞凋亡增多，细胞生长明显抑制。结论成功构建的mlL-28A重组腺病毒载体转染至肺腺癌细胞LA795后表达IL-28，且可能通过促进细胞凋亡而抑制其-定程度的生长。
- 严玉兰张金刘洋袁利学朱涛峰郑金旭步雪峰
- 关键词：腺病毒肺癌凋亡
- 鼠IFN—λ2 CHO细胞系建立及生物学活性的研究被引量：3
- 2010年
- 目的稳定表达鼠IFN—λ2并对其生物学活性进行研究。方法用水疱口炎病毒（vesicular stomatitis virus，VSV）刺激小鼠脾脏细胞，克隆mIFN—λ2全长基因，构建真核表达载体PCAGG-EGFP-mIFN-λ2，并在CHO细胞稳定表达，且在小鼠黑色素瘤B16细胞上进行抗病毒活性测定；构建MDBK-Mxp—Luc细胞系诱导Mx1抗病毒蛋白产生。结果pMD18-T-mIFN—λ2双酶切鉴定，出现582bp大小的条带，成功构建了PCAGG—EGFP—mIFN—λ2真核表达载体；稳定表达mIFN—λ2 CHO的细胞株分泌的上清中mIFN-λ2蛋白在B16细胞上的抗病毒活性为10^4AU／ml；mIFN-λ2蛋白诱导鼠Mx1抗病毒蛋白的表达，9～12h达高峰，24h后消失（P〈0．05）。结论建立了稳定表达mIFN—λ2的CHO细胞株，其分泌型mIFN—λ2蛋白具有明显的抗病毒活性。
- 严玉兰袁利学刘洋曹文雁步雪峰步志高郑金旭
- 关键词：抗病毒活性
- 重组鼠IL-28的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备被引量：3
- 2009年
- 目的：获取重组鼠IL-28（m IL-28）纯化蛋白,制备多克隆抗体。方法：用PCR技术扩增鼠IL-28成熟蛋白的编码序列,克隆入原核表达载体pET-30,构建融合表达载体pET-30 a-m IL-28,转化大肠埃希菌BL21（DE3）,以IPTG诱导表达IL-28融合蛋白,经镍柱亲和层析纯化,然后免疫6-8周龄鸡,制备多克隆抗体,采用ELISA检测抗体效价。结果：成功构建了表达载体pET-30 a-m IL-28,DNA序列测定结果与预期结果一致。在37℃培养条件下,IPTG诱导表达的IL-28融合蛋白进行SDS-PAGE电泳分析,发现其与融合蛋白的理论计算值一致,免疫鸡后收获抗血清,ELISA显示抗体效价具有高度特异性。结论：获得了重组鼠IL-28纯化蛋白,制备了鼠IL-28多克隆抗体,为进一步深入研究IL-28的生物活性及其应用打下基础。
- 袁利学刘洋步雪峰郑金旭严玉兰
- 关键词：大肠埃希菌蛋白质纯化抗体制备
