江苏省自然科学基金(BK2001115)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 相关作者：周锋陈云姚堃窦洁丁传林更多>>
- 相关机构：南京医科大学更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人CD4分子cDNA的克隆及序列分析被引量：2
- 2004年
- 目的:克隆人的CD4基因,为进一步研究病毒感染CD4+细胞的分子机制奠定基础。方法:用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增出SupT1细胞株的编码CD4蛋白分子全长的基因,克隆至质粒pAS2-1中,并转入大肠杆菌DH5α。通过Amp抗性筛选、PCR及限制性内切酶EcoR I,BamH I双酶切等鉴定重组质粒并测定其中编码CD4片段的核苷酸序列。结果:克隆出编码CD4蛋白分子全长的CDNA,测序结果与文献报道进行同源比较,序列基本一致。结论:本实验成功克隆了编码人CD4蛋白全长的cDNA片段。
- 窦洁姚堃彭光勇陈云周锋丁传林
- 关键词：CD4逆转录-聚合酶链式反应克隆
- 人疱疹病毒7型pp85重组表达及抗体制备被引量：1
- 2007年
- 目的制备人疱疹病毒7型(HHV-7)pp85蛋白及其抗体。方法采用聚合酶链反应(PCR)方法自HHV-7型YY5分离株中扩增出pp85基因,经测序后构建原核表达质粒PGEX-6p-1+pp85b。重组质粒转化大肠埃希菌Rosetta,诱导蛋白表达。应用酶切鉴定、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及蛋白质印迹法等方法确保基因片段的正确性及表达蛋白的特异性。表达的蛋白经亲和层析纯化后,免疫动物制备多克隆抗体,并通过免疫荧光法鉴定抗体的特异性。结果成功地获得了高纯度的pp85融合蛋白,纯度可达90%以上;免疫动物后制备的多克隆抗体效价可达1∶102400,该抗体能特异识别HHV-7抗原,而不与HHV-6反应。结论获得高纯度的HHV-7pp85融合蛋白及其高效价的抗体,将进一步应用于临床检验。
- 徐建姚堃窦洁许文嵘尹全章陈云周锋
- 关键词：基因表达病毒抗体
