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广西眼镜王蛇毒酸性磷脂酶A_2的肌毒性研究被引量：7: 2001年; 目的　研究广西眼镜王蛇毒一种酸性磷脂酶 A2 (命名为 APLA2 -1 )的肌毒性。　方法　大鼠注射 2 .6 mg/ kg的 APLA2 -1后 ,分别于 6 h、2 4 h取心肌和骨骼肌通过光镜和电镜观察它们的病理改变 ;或于0 h、 3h、 6 h、 1 2 h、 2 4 h取尾静脉血测定血清肌酶的动态变化。　结果　光镜检查显示 ,大鼠注射 APLA2 -1 2 4 h后 ,骨骼肌发生变性和轻度坏死 ,心肌无明显改变 ;电镜结果显示 ,骨骼肌在 6 h、 2 4 h,心肌在 2 4 h,细胞超微结构均受到不同程度的破坏 ;血清肌酶检测显示 ,注射 APLA2 -1后 ,肌酶升高显著 ,1 2 h达到最大值。　结论　广西眼镜王蛇毒酸性磷脂酶 A2 具有肌毒性 ,骨骼肌比心肌对其更为敏感 ;与别的肌毒性PLA2 相比。; 王秋雁庄茂辛林文珍舒雨雁林政炯; 关键词：眼镜王蛇蛇毒磷脂酶A2

广西眼镜王蛇毒一种新的酸性磷脂酶A_2的基因克隆和性质被引量：5: 2001年; 通过SephadexG 75 ,CM SepharoseCL 6B和DEAE SephadexA 5 0连续的柱层析 ,从广西眼镜王蛇 (Ophiophagushannah)蛇毒中分离到一种新的酸性磷脂酶A2 (pI 4 .0 ) ,命名为APLA2 2 .它的分子量约为 14 0 0 0 ,具有较高的磷脂酶活力 (4 2 9mol·g- 1·min- 1) .它对小鼠没有致死性 (LD50 >2 0mg·kg- 1) ,但具有抗血小板聚集功能及诱导水肿形成能力 .通过cDNA测序解决了它的完全的一级结构 .由cDNA推导的APLA2 2蛋白质全序列与福建眼镜王蛇和台湾眼镜王蛇蛇毒酸性磷脂酶A2 的同源性分别为73.9% ,64.7% ,它不存在 62～ 66位的“胰腺环” ,因而它可能是一种新的眼镜王蛇毒酸性磷脂酶A2 .APLA2 2基因克隆及其生化药理性质的研究 ,为探讨蛇毒活性蛋白结构与功能关系及蛇伤中毒机理创造了良好的条件 .; 王秋雁舒雨雁庄茂辛林政炯; 关键词：眼镜王蛇磷脂酶A2 基因克隆

cDNA cloning and expression of earthworm fibrinolytic enzyme component A: 2003年; Earthworm fibrinolytic enzyme component A (EFEa), a protein with dual fibrinolytic activity, is one of the major therapeutically important earthworm fibrinolytic enzyme components. The cDNA fragment encoded the ma-ture protein was cloned from earthworm (Eisenia fetida) by the RT-PCR technique. The deduced amino acid sequence of the EFE component A shows high homology with some members of serine proteases trypsin family, and the amino acid residues constituting the active sites are conserved in the EFEa as compared with the other proteins of the trypsin family. The cDNA fragment was subcloned into the expres-sion vector pQE31 and pMAL-c2X of E. coli. The resulting expression plasmids, pQE-efea and pMAL-efea, were used to transform the E. coli strain M15. Recombinant protein bands corresponding with calculated molecular weights were induced. The induced His6-EFEa fusion protein with pQE- efea was accumulated into inclusion body, while the induced MBP-EFEa fusion protein with pMAL-efea was soluble and showed fibrinolytic activities.; LIUJunfengWANGXinquan等; 关键词：蚯蚓 CDNA 基因克隆

蚯蚓纤溶酶组分A（EFEa）的晶体结构研究: ＜正＞血栓病是在现代社会中广泛发生的致死致残率较高的疾病之一。药物溶栓是目前被广泛应用于临床实践的治疗血栓病最有效的方法。蚯蚓纤溶酶是从蚯蚓中分离提纯的一组具有纤维蛋白溶解活力的酶,在临床上己经作为口服制剂被应用于心脑...; 汤涌王锋望超江涛张季平梁栋材常文瑞; 文献传递

广西眼镜王蛇毒酸性磷脂酶A_2-1的表达被引量：5: 2003年; 将广西眼镜王蛇毒酸性磷脂酶A2 - 1(APLA2 - 1)基因克隆至表达载体pET2 8a(+) ,转化入大肠杆菌BL2 1,经过诱导 ,SDS -PAGE检测 ,重组质粒pET2 8a-APLA2 - 1在 18KD有一明显的表达条带 ,表达产物APLA2 - 1约占细菌总量 3 0 % ,并以包涵体的形式存在 ,将产物变复性后用SephadexG - 75纯化 ,产物经过SDS -PAGE检测只有单一条带 ,通过Western -blot检测 ,证实纯化产物是酸性磷脂酶A2 .对表达的APLA2 进行酶活性和药理活性的测定 .至此我们在大肠杆菌中表达了广西眼镜王蛇毒APLA2 ,这将为以后对PLA2 的结构与功能的研究打下了良好的基础 .; 舒雨雁林文珍庄茂辛林政炯吴祥甫周元聪; 关键词：眼镜王蛇毒复性活性测定

广西眼镜王蛇毒酸性磷脂酶A_2的分离纯化和性质研究被引量：18: 2001年; 目的 :广西眼镜王蛇毒酸性磷脂酶 A2 的分离纯化和性质研究。方法 :分离纯化采用 Sephadex G- 75 ,CM- Sepharose CL -6 B和 DEAE- Sephadex A- 5 0柱层析法 ;通过电泳 ,磷脂酶 A2 活力测定 ,氨基酸组成测定 ,N端序列分析及药理实验进行性质研究。结果 :从广西眼镜王蛇毒中分离到一种酸性的磷脂酶 A2 (命名为 APL A2 - 1) ,相对分子质量为 146 0 0 u,等电点 5 .4,酶的比活力为 10 8μmol/ m g· min- 1 ,N端序列为 NL IQFGNMIQCTVPGF。它对实验用小白鼠有致死性 (L D5 0 6 .6 m g/ kg) ,具有肌毒性 ,心脏毒性 ,抗血小板聚集活性 ,能诱导水肿形成。结论 :APL A2 - 1生化和药理性质的研究 ,为阐明蛇毒 PL A2结构和功能关系 ,及蛇伤中毒机制 ,打下了良好基础。; 王秋雁庄茂辛林文珍舒雨雁; 关键词：磷脂酶A2 眼镜王蛇纯化蛇毒酸性磷脂酶A2

广西眼镜王蛇毒杂合性酸性磷脂酶A_2的基因克隆与序列分析被引量：1: 2002年; 目的　研究广西眼镜王蛇毒杂合性酸性磷脂酶A2 (APLA2 )的基因克隆与序列分析 .方法　从广西眼镜王蛇毒腺中提取总RNA ,根据种属关系接近的台湾眼镜蛇毒APLA2 两端非翻译区的保守序列设计引物 ,利用RT -PCR进行体外扩增 ,获得磷脂酶A2 基因 ,克隆至pMD18-T载体 ,经测序筛选出APLA2 - 1,APLA2 - 2及一个新的酸性磷脂酶A2 (命名为APLA2 - 3 ) .根据测序结果确定了APLA2 - 3基因的全序列 ,并由此推导编码的氨基酸序列 .结果　利用Antheprot4 3c蛋白质序列分析软件包计算它的等电点为 4 885 ,相对分子质量为 16 5 43kD ,并预测了它的二级结构和部分理化性质 .同源性比较表明 ,APLA2 - 3的 1～ 3 9位氨基酸残基序列与APLA2 - 2相同 ,其同源性为 64 % ,而 40～ 10 8位氨基酸残基序列与APLA2 - 1相同 ,其同源性为 69% ,10 9位氨基酸残基序列皆不同于这两种APLA2 .结论揭示了APLA2 具有基因多样性 ,可能与物种进化和生物活性有关 ,并为进一步研究PLA2; 林文珍舒雨雁庄茂辛林政炯吴祥甫周元聪; 关键词：眼镜王蛇毒磷脂酶A2 基因克隆

广西眼镜王蛇毒酸性磷脂酶A_2-1在不同载体的表达被引量：3: 2007年; 目的构建广西眼镜王蛇毒酸性磷脂酶A2-1(APLA2-1)在不同载体的重组表达质粒,在E.coli中表达APLA2-1并比较不同表达系统对APLA2-1的表达效果。方法将广西眼镜王蛇毒酸性磷脂酶A2-1(AP-LA2-1)基因克隆至表达载体pBLMVL2和pET28a(+),分别转化入大肠杆菌RR1和BL21,经过诱导表达,应用SDS-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)及Western blot观察重组蛋白表达情况。结果成功构建了重组质粒pBLMVL2-APLA2-1和pET28a-APLA2-1。pBLMVL2-APLA2-1在SDS-PAGE上没见明显表达带,在Western blot上可见一14 kD的表达带。pET28a-APLA2-1在SDS-PAGE上有一明显的18 kD表达条带,表达产物AP-LA2-1约占细菌总量30%,并以包涵体的形式存在。结论APLA2-1可在大肠杆菌中表达,pET28a(+)对APLA2-1的表达效果优于pBLMVL2。; 林文珍舒雨雁庄茂辛林政炯吴祥甫周元聪; 关键词：酸性磷脂酶A2

广西眼镜王蛇毒一种碱性蛋白的分离纯化及性质研究被引量：2: 2007年; 目的:广西眼镜王蛇毒一种碱性蛋白的分离纯化和性质研究。方法:分离纯化采用DEAE-Sepharose CL-6B离子交换柱层析,Sephadex G-75凝胶过滤和CM-Sepharose CL-6B离子交换柱层析;通过电泳,磷脂酶A2(PLA2)酶活力测定,氨基酸组成分析,N端序列测定及药理实验进行性质研究。结果:从广西眼镜王蛇毒中分离到一种电泳纯的碱性蛋白(命名为CM-IV),相对分子质量约为14000,等电点约为8.65;PLA2的比活力为23μmol·mg-1/min。氨基酸组成分析表明,其分子中Cys的含量占6.85%;利用蛋白质直接测序N端序列为TKCYVTPDVK。药理实验表明它对实验用小白鼠有致死性(LD50约为0.2mg/kg),并具有心脏毒性,但无血小板抑制活性。根据Genebank Blast分析软件,它的N端序列与神经毒素具有高度的同源性。结论:这种碱性蛋白可能为神经毒素,但却拥有PLA2的活力。; 林文珍庄茂辛舒雨雁林政炯周元聪; 关键词：眼镜王蛇纯化碱性蛋白

蚯蚓纤溶酶组分B和F的鉴定、结晶和初步晶体学研究: ＜正＞蚯蚓纤溶酶是存在于蚯蚓体内的一组具有强烈溶解血纤溶酶蛋白及血栓作用的酶,与已有的溶栓剂相比具有原料丰富、价格低廉、安全无毒的特点,而且,具有可以口服的独特优势,因而自从1983年日本宫琦大学Mihara等发现以来...; 王锋望超李梅张季平桂璐璐梁栋材常文瑞; 文献传递

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