国家自然科学基金(30370058)
- 作品数：4 被引量：34H指数：3
- 相关作者：李桂新周雪平李云琴崔晓峰吴建祥更多>>
- 相关机构：浙江大学广西农业科学院更多>>
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- 烟草曲茎病毒复制蛋白基因的原核表达和免疫定位被引量：2
- 2004年
- 利用PCR方法从烟草曲茎病毒 (TbCSV)Y35分离物的病株中获得复制蛋白 (Rep)基因 ,将其克隆到原核表达载体pGEX 4T 1上获得重组质粒pGEX Y35Rep。重组质粒导入大肠杆菌BL2 1(DE3)pLysS中 ,IPTG诱导表达后发现部分Rep融合蛋白以可溶性形式表达。利用GST Sepharose 4B亲和层析柱纯化了Rep的融合蛋白 ,免疫家兔获得Rep蛋白的抗体。对TbCSV侵染烟草中Rep蛋白的亚细胞分布研究发现 ,Rep蛋白主要分布于含有细胞核的组份中。利用免疫胶体金技术对感病烟草中Rep蛋白进行了定位 。
- 崔晓峰李云琴李桂新周雪平
- 关键词：烟草曲茎病毒
- 烟草曲茎病毒复制相关蛋白基因原核表达条件优化被引量：21
- 2007年
- 为了提高烟草曲茎病毒(Tobacco curly shoot virus,TbCSV)复制相关蛋白(replication-associated protein,Rep)基因在大肠杆菌中表达量,研究了大肠杆菌菌株、温度、诱导时间以及诱导剂IPTG浓度等不同条件对GST-Rep融合蛋白表达量的影响.结果表明,大肠杆菌菌株Rosetta在37℃培养3h后,使用终浓度为0.5mmol·L-1的IPTG在28℃诱导培养4h时,GST-Rep融合蛋白表达量最高,表达的GST-Rep融合蛋白可占细菌总蛋白的42%以上.用GST-Sepharose 4B亲和层析柱对GST-Rep融合蛋白进行纯化,SDS-PAGE表明GST-Rep融合蛋白大小约为66kD,与预计的分子量大小一致,Western blot分析表明其能与GST多克隆抗体起特异性反应.Rep基因的优化表达为研究该基因的作用机理打下了基础.
- 潘滨吴建祥李桂新周雪平
- 关键词：原核表达
- 中国番木瓜曲叶病毒南宁分离物的基因组结构特征被引量：10
- 2005年
- 从广西南宁田间表现曲叶症状的番木瓜植株上分离到病毒分离物G4,经三抗体夹心ELISA(TAS-ELISA)检测,G4与粉虱传双生病毒的抗体呈阳性反应。对G4 DNA-A全序列测定和分析表明,G4 DNA-A全长2 748个核苷酸,共编码6个ORFs。同源性比较及系统进化关系分析表明,G4 DNA-A与在亚洲发现的粉虱传双生病毒关系较近,其中与我国报道的中国番木瓜曲叶病毒(PaLCuCNV)同源性最高,达到98.0%。进一步比较发现,G4 DNA-A编码的AV1、AV2、AC1、AC2、AC3和AC4与PaLCuCNV相应ORFs的氨基酸同源性分别为98.4%、95.7%、97.5%、97.8%、94.1%和94.6%,表明G4应属于PaLCuCNV的一个分离物。G4编码的ORFs与中国胜红蓟黄脉病毒(AYVCNV)、辣椒曲叶病毒(PepLCV)及烟草曲茎病毒(TbCSV)有较高的氨基酸同源性,可能起源于共同的祖先。利用DNA-B及卫星DNAβ的保守引物均未能从G4分离物中扩增出相应的组分。
- 蔡健和王向阳李桂新秦碧霞周雪平
- 关键词：番木瓜菜豆金色花叶病毒属基因组
- 烟草曲茎病毒 AC4基因的原核表达与免疫定位被引量：3
- 2004年
- 利用 PCR方法从烟草曲茎病毒 ( Tb CSV) Y3 5分离物的病株中获得 AC4基因 ,将其克隆到原核表达载体 p ET-3 0 a上获得重组质粒 p ET-Y3 5 AC4,重组质粒导入大肠杆菌 BL2 1 ( DE3 ) p Lys S中 ,IPTG诱导后 SDS-PAGE发现 ,AC4蛋白已在大肠杆菌中获得了表达。利用 Ni2 +-NTA亲和树脂纯化了 AC4重组蛋白 ,免疫家兔获得 AC4蛋白的多克隆抗体。利用免疫胶体金技术对感病烟草中AC4蛋白进行定位发现,TbCSV AC4蛋白主要在细胞质的叶绿体和线粒体中积累。
- 李云琴崔晓峰胡东维李桂新周雪平
- 关键词：烟草曲茎病毒原核表达
