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不同诱导剂对山羊精子体外获能和受精能力的影响被引量：8: 2005年; 比较不同获能诱导剂对山羊精子体外获能及受精能力的影响,优化山羊早期胚胎体外生产技术体系.山羊精子分别以不同浓度肝素、IA和EGS处理后,检查精子获能率、活力和体外存活时间,同时与体外成熟的卵母细胞受精,观察不同获能处理对精子受精能力的影响.在培养液中添加5,10,20 μg/mL肝素,都能促进精子获能,其中10μg/mL组的获能率达到55.6%,存活时间为18～19 h;低于此浓度,获能率显著降低,高于此浓度,获能率升高不显著,但精子存活时间和活力明显下降.0.1,0.4,0.7μmol/LIA都能提高精子获能率,其中0.4和0.7 μmol/L处理组精子获能率最高,分别为56.2%和53.6%,但两组中的精子活力和存活时间有明显差异.5%,10%和20%EGS都能提高精子活力,延长体外存活时间,但实验组的获能率最高不到20%.10%EGS获能组的受精率和卵裂率分别为27.9%和18.6%,显著低于10μg/mL肝素和0.4μmoL/LIA组,后两者的受精率相似,但IA组的卵裂率明显高于肝素组(52.0%VS 40.2%,P＜0.05).10μg/mL肝素和0.4 μmol/L IA都可诱导山羊精子高水平获能,并获得较好的受精能力,但IA表现出更强的促卵裂发生效应.; 叶华虎李福兵陈俊颖宋维平刘彦魏泓; 关键词：精子体外获能体外受精山羊

外源基因对精子的影响及其在山羊早期胚胎中的表达被引量：4: 2008年; 在前期实验中发现,山羊精子可自发结合外源DNA,但结合能力在不同动物个体之间差异显著。挑选结合能力明显不同的3只公羊,进一步探讨了外源DNA对精子的影响及其在早期胚胎中的表达,结果发现:外源基因与精子共同孵育后,精子的活率、顶体反应发生率和受精能力均呈下降态势,其降幅与精子的结合能力密切相关。利用与DNA共育后的精子进行体外受精,外源基因可被导入卵母细胞并在早期胚胎中获得表达,但胚胎阳性率因精子供体不同而差异显著(P<0.05);其中来源于高、中结合能力供体生产的胚胎,分别有16.2%(25/154)和5.3%(4/76)可检测到外源基因存在,但表达仅见于高结合能力供体生产的早期胚胎,表达率为6.5%(10/154);低结合能力供体生产的胚胎无外源基因。研究表明,在以精子载体方法生产转基因动物的实验过程中,筛选对DNA结合能力较强的精子供体是提高转基因效率的前提,但需要考虑外源DNA对精子受精能力的影响。; 叶华虎董罡袁菊芳隋丽华胡娟峰李瑞生刘彦马啸陈振文曾林; 关键词：精子胚胎山羊

山羊精子结合和内化外源DNA的特征及影响因素被引量：8: 2006年; 外源DNA与精子相互作用后的定位及内化率是精子载体法制备转基因动物的关键环节。实验以标记的DNA片段为示踪材料，就精子与外源DNA相互作用的基本特征及影响因素进行了研究。结果表明：山羊精子可自发性结合外源DNA，外源DNA最初结合于顶体后区质膜外表面，随后部分内化进入细胞内。精子对外源DNA的结合和内化能力随供体的不同而差异明显，在实验所检查的35只公羊中，结合率（DNaseⅠ消化前）波动于4．6％～62．4％，内化率（DNaseⅠ消化后）波动于2．1％～53．8％，个体间差异显著（P〈0．01）。对于同一供体的精子而言，阻止DNA结合的最主要因素是精浆，与射出的原精液相比，洗涤后精子的结合率和内化率分别提高了3倍和5倍；其次精子获能也将导致结合率和内化率降低（P〈0．01）。死精子不能完成外源DNA的内化过程，但反复冻融导致质膜破裂的死精子具有更高的结合率，而且阳性率与动物个体无关。上述结果提示，筛选合适的精子供体，采用优化的转染处理方法是提高精子载体方法效率的前提和保证。; 叶华虎刘彦刘珠果宋维平卢建申周艳荣绳纪坡邓继先; 关键词：外源DNA 内化精子山羊

精子介导外源基因在早期山羊胚胎中的表达: 实验以绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因,比较研究了不同山羊个体精子对外源DNA的结合能力,外源DNA转染对精子活力和受精能力影响以及精子介导基因转移的可行性和效率。结果表明,不同个体的山羊精子对外源DNA结合能力存在显著...; 刘彦叶华虎温叶飞朱贵明周艳荣袁菊芳高强陈红星邓继先; 关键词：绿色荧光蛋白胚胎山羊; 文献传递

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北京市自然科学基金(5052011)