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国家自然科学基金(30370035)
作品数:
2
被引量:4
H指数:2
相关作者:
杨婧
牛艳
孔健
孔文涛
张可炜
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相关机构:
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发文基金:
国家自然科学基金
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相关领域:
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生物学
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绿色巴夫藻
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机构
2篇
山东大学
作者
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孔健
2篇
牛艳
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杨婧
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张可炜
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孔文涛
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1篇
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绿色巴夫藻cDNA文库的构建及EST序列分析
被引量:2
2006年
将绿色巴夫藻(Pavlova viridis)培养液逐种加入氨苄青霉素、硫酸庆大霉素、硫酸阿米卡星3种抗生素处理,经检验后无杂菌污染。以该藻种为实验材料,以λTriplEx2为载体,利用SMART技术构建其cDNA文库。经测定文库滴度为6×10^6pfu/mL,重组率为98%。利用PCR方法检测cDNA文库插入DNA片段的大小,其长度为0.5~2kb,表明该文库达到建库要求,可用来筛选低丰度mRNA的基因克隆。对cDNA文库中的阳性克隆进行随机PCR扩增,挑选插入DNA片段较大的克隆,进行5’末端单向序列测定,测序结果与NCBI数据库进行BLAST比对,获得了200个有研究价值的EST序列和cDNA克隆,为进一步研究和开发绿色巴夫藻的功能基因奠定了基础。
牛艳
孔文涛
杨婧
孔健
关键词:
绿色巴夫藻
多不饱和脂肪酸
一种适用于RT-PCR的微藻总RNA提取方法
被引量:2
2010年
以绿色巴夫藻(Pavlovaviridis)为实验材料,在比较了Trizol试剂法和异硫氰酸胍一步法这两种常用RNA提取方法的基础上,建立了一种十六烷基三乙基溴化铵(CTAB)和酸酚相结合的改良的CTAB-酸酚法。此方法利用高浓度的β-巯基乙醇来防止RNA提取过程中多酚的氧化,然后利用CTAB并结合乙醇和醋酸钾同时使用的方法来有效去除多糖类物质对RNA的干扰。经琼脂糖凝胶电泳检测,所提取的总RNA的28S、18S条带清晰明亮,无降解;其A260nm/A280nm值为1.968;200300nm全波长紫外扫描无多糖和蛋白吸收峰,表明提取的总RNA质量较好。对提取的总RNA直接进行反转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT—RCR),能够清楚地获得目的基因的cDNA片段,进一步证实了改良的CTAB-酸酚法是一种高质量提取微藻总RNA的有效方法。
杨婧
牛艳
张可炜
孔健
关键词:
总RNA
反转录聚合酶链式反应
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