国家自然科学基金(30370039)
- 作品数：4 被引量：12H指数：3
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- 相关机构：浙江大学厦门大学浙江大学城市学院更多>>
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- 相关领域：生物学更多>>
- 新型重组糖蛋白表达载体—盘基网柄菌被引量：3
- 2006年
- 近年来,盘基网柄菌作为异源重组糖蛋白表达载体的研究受到了学术界的重视,已经有多种具有生物活性的复杂糖蛋白成功地得到了表达。通过对表达产物的研究发现,盘基网柄菌具有各种翻译后加工机制,例如磷酸化、酰基化及形成GPI(糖基磷脂酰基醇)锚点等,具有类似于高等动物的糖基化修饰能力。与哺乳动物细胞表达载体相比较,盘基网柄菌具有培养成本低廉、细胞生长迅速及易于大规模培养的优势。盘基网柄菌有可能发展成为一种有重要应用前景的糖蛋白表达载体系统。
- 陈杰徐志南卢英华岑沛霖
- 关键词：盘基网柄菌糖蛋白
- 重组牛肠激酶轻链在大肠杆菌中的表达和纯化
- 2007年
- 密码子优化全基因合成了牛肠激酶轻链基因(sBEKLC),采用pET-39b(+)构建了融合表达载体,在大肠杆菌中进行了成功表达.37℃在含30 mg/L卡那霉素的LB培养基中培养,当细胞密度(D600)达到0.5时,降低温度到28℃,加入终浓度为0.1 mM的异丙基硫代-βD-硫代半乳糖苷诱导外源蛋白表达,继续培养6 h后收集菌体,融合蛋白(DsbA-sBEKLC)产量达到151.2mg/L,相当于80.6 mg/L sBEKLC.使用渗透冲击技术从细胞周质中提取sBEKLC,经过亲和层析可从每升发酵液中得到6.8 mg sBEKLC,经检测sBEKLC具有生物活性.
- 黄磊阮红徐志南顾玮彦岑沛霖
- 关键词：肠激酶纯化生物活性
- 利用his-tag纯化和复性基因工程产物肠激酶被引量：3
- 2006年
- 构建了融合表达肠激酶轻链（EKLC）的基因工程大肠杆菌，将该菌于37℃在含30mg／L卡那霉素的LB培养基中培养，当细胞密度（OD600）达到0．5～0．6时加入最终浓度为0．4mmol／L的IPTG并降温至26℃进行诱导表达，4h后目的蛋白质的表达量可达菌体总蛋白质的40％以上，但所表达的重组产物大多以包涵体形式存在于菌体中。利用产物N端携带6个组氨酸标签与金属螯合层析介质中镍离子的亲和性，应用镍离子金属螯和层析对样品包涵体进行了纯化和复性研究。实验结果表明，在变性条件下纯化的样品在柱上不经洗脱，直接用复性液洗涤6h，可以使EKLC在得到提纯的同时实现复性，得到了电泳纯度为96％的具有生物活性的EKLC，最高活性为712U。
- 顾玮彦黄磊徐志南岑沛霖
- 关键词：牛肠激酶复性
- 聚氨酯泡沫半固定化培养盘基网柄菌被引量：6
- 2007年
- 研究了聚氨酯泡沫应用于固定化盘基网柄菌的可行性,发现以简单处理过的聚氨酯泡沫为载体,能够高效实现盘基网柄菌的固定化培养。考察了载体粒径大小、载体量和摇床转速等对固定化培养的影响,在优化的培养条件和固定化条件下,盘基网柄菌的最大细胞密度是悬浮培养的2-4倍。
- 梁兴超卢英华陈杰徐志南
- 关键词：盘基网柄菌聚氨酯泡沫固定化培养
