云南省技术创新人才培养基金(2003PY07)
- 作品数：5 被引量：26H指数：3
- 相关作者：李卫东廖国阳姜述德高菁霞马磊更多>>
- 相关机构：中国医学科学院北京协和医学院更多>>
- 发文基金：云南省技术创新人才培养基金国家高技术研究发展计划云南省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 无血清微载体培养Vero细胞和H1N1流感病毒条件的优化被引量：4
- 2010年
- 目的优化无血清微载体培养Vero细胞和H1N1流感病毒的条件,为Vero细胞流感疫苗的开发奠定基础。方法在搅拌瓶中采用不同的细胞接种量和不同的微载体浓度培养Vero细胞,制备流感病毒,并检测不同的pH值、TPCK-胰酶含量、病毒接种量及病毒收获时间对流感病毒血凝滴度的影响。结果以(1.0～5.0)×105个/ml的Vero细胞接种至浓度为3mg/ml的无血清微载体中,病毒培养液pH值为7.2～7.4,TPCK-胰酶含量为1.0μg/ml,病毒接种量为1.0MOI,并在感染48h后补加TPCK-胰酶,培养72h后收获上清与细胞内病毒,血凝滴度可达1:512。结论已获得了无血清微载体培养Vero细胞和H1N1流感病毒的适宜条件,为应用生物反应器大规模制备流感病毒奠定了基础。
- 田石华孙明波张新文马磊高菁霞宋绍辉姜述德李卫东廖国阳
- 关键词：无血清微载体VERO细胞流感病毒A型H1N1亚型
- 低血清培养Vero细胞和流感病毒条件的优化被引量：11
- 2009年
- 目的优化低血清培养Vero细胞和流感病毒的条件,为开发Vero细胞流感疫苗奠定基础。方法分别在DMEM/F12和SLM-199培养基中,添加不同浓度的血清,培养Vero细胞,观察细胞连续传代的生长状态;接种流感病毒后,检测病毒培养液不同pH值、不同浓度TPCK-胰酶和病毒不同接种量对病毒血凝效价的影响。结果用SLM-199在1.0%血清浓度下培养的Vero细胞接种流感病毒血凝效价较高,病毒培养液pH值为7.2,TPCK-胰酶含量为1.0μg/ml,接种病毒MOI为1.0时,72h收获的病毒血凝效价最高。结论已筛选出低血清培养Vero细胞和流感病毒的适宜条件。
- 刘铮孙明波高菁霞马磊林小瑞燕景恩张勇吴忠香刘雅灵姚忠萍廖国阳李卫东
- 关键词：流感病毒VERO细胞
- 二乙烯亚胺对脊髓灰质炎病毒Ⅱ型Sabin株的灭活效果被引量：2
- 2010年
- 目的观察二乙烯亚胺(Binary ethylenimine,BEI)对脊髓灰质炎病毒Ⅱ型Sabin株的灭活效果。方法在不同温度(37、33、28和25℃)下采用4种浓度(0.002、0.001、0.0005和0.00025mol/L)的BEI及0.0925mg/ml的甲醛对脊髓灰质炎病毒Ⅱ型Sabin株进行灭活,采用微量滴定法测定病毒感染性滴度,ELISA法检测灭活病毒液D抗原含量,并进行病毒灭活验证试验。结果在37℃条件下,0.002mol/L的BEI能在48h内完全灭活病毒,灭活后的病毒液D抗原含量回收率为90.6%,显著高于甲醛灭活的回收率(60.6%)。经验证,灭活彻底,无活病毒存在。结论 BEI对脊髓灰质炎病毒Ⅱ型Sabin株的D抗原破坏小,能较好地保持疫苗的有效成分。
- 王白燕张新文蔡玮马磊高菁霞孙明波姜述德李卫东杨静思廖国阳
- 关键词：脊髓灰质炎病毒病毒灭活
- 流感病毒胰酶不依赖性的研究被引量：3
- 2008年
- 在无胰酶条件下将流感病毒在MDCK细胞和Vero细胞上连续传代,研究流感病毒生长对胰酶的依赖性.选择出细胞培养流感病毒的适宜pH值,在无胰酶条件下将流感病毒毒株在Vero细胞和MDCK细胞上连续传代,然后将无效价的病毒收获液与原毒种混合后再进行传代.获得了6株在MDCK细胞上无需胰酶就能扩增的流感病毒毒株.
- 丁士磊杨怀德何秀莲李卫东
- 关键词：流感病毒胰酶连续传代
- 流感病毒在Vero细胞上的适应性被引量：11
- 2008年
- 目的研究WHO指定流感疫苗生产用毒株在Vero细胞上的适应性,为用Vero细胞制备流感疫苗奠定基础。方法优化不同培养基、胰酶浓度、pH值等培养病毒的条件及收毒时间,将流感疫苗生产用毒株在Vero细胞上连续传代,并进行血凝效价检测及RT-PCR分析。结果在病毒维持液为F12+DMEM、pH为7.5、胰酶含量为1.5μg/ml、培养3 d收获病毒时,可获得较高的病毒血凝效价,连续传4代,病毒血凝效价降为0,RT-PCR检测结果为阴性。结论WHO推荐的流感疫苗生产用毒株在Vero细胞上连续传代,病毒血凝效价逐渐降低。
- 罗振武邱丰魏晓露余磊张云昆姚石宝郭自全唐成丽姜述德廖国阳李卫东
- 关键词：流感病毒疫苗株传代适应性
