公共文化服务平台

胰岛素受体酪氨酸激酶底物基因的克隆表达及其对细胞形态的影响被引量：1: 2009年; 目的对胰岛素受体酪氨酸激酶底物（insulin receptor tyrosine kinase substrate，IRTKS）基因功能进行初步研究，检测IRTKS在正常组织及肿瘤细胞株中的表达情况，构建强力霉素DOX（tet-off）调控的高表达IRTKS的稳定株并研究其对细胞形态的影响。方法克隆并构建IRTKS的原核及真核重组质粒，制备针对IRTKS的多克隆抗体，Northern印迹检测IRTKS组织表达谱，Western印迹检测IRTKS细胞株表达，转染HT1080细胞构建DOX调控的IRTKS高表达tet-off稳定株，细胞免疫荧光实验研究IRTKS高表达对细胞形态的影响。结果在多种组织和细胞株中都检测到IRTKS的表达，构建了受DOX调控的高表达IRTKS的稳定株，高表达IRTKS蛋白的细胞变得铺展，纤维状肌动蛋白（F-actin）出现丝状聚集，细胞伸出板状伪足（lamellipodia）。结论IRTKS是一个在多种组织和细胞株中都有表达的蛋白，构建的IRTKS稳定株可以在DOX调控下稳定高表达IRTKS蛋白，IRTKS蛋白的高表达促进HT1080细胞铺展，纤维状肌动蛋白包装及细胞伸出板状伪足。; 李婷婷程志红王克生陈斐韩泽广张新; 关键词：组织表达谱

重组腺病毒介导RNA干扰人DLK1基因表达的研究被引量：1: 2009年; 构建抑制人DLK1基因表达的重组腺病毒载体,利用腺病毒载体介导的RNA干扰技术评价其在肝癌细胞株中的基因沉默效应.将针对人DLK1基因的RNAi寡核苷酸序列,连接到腺病毒穿梭质粒中,在含有腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的大肠杆菌BJ5183内进行同源重组.重组腺病毒载体在HEK-293细胞中包装扩增,得到高滴度的重组腺病毒.通过绿色荧光蛋白示踪腺病毒的感染效果,并通过荧光实时RT-PCR,Western blot的方法证实重组腺病毒能够显著抑制DLK1基因在肝癌细胞株中的表达.; 邢文明徐晓陈斐张新韩泽广; 关键词：RNA干扰腺病毒肝癌

生长抑制蛋白4核定位信号和PHD指状结构域共同调控丝裂原活化蛋白激酶通路中ERK1的激活被引量：2: 2008年; 目的探索生长抑制蛋白4(inhibitor of growth 4,ING4)的核定位信号(nuclear localization sig-nal,NLS)和PHD指状结构域(plant homeodomain)在刺激丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)细胞信号通路成员ERK1磷酸化中的作用。方法通过构建ING4的NLS和PHD结构域突变或缺失重组质粒,将上述质粒分别与ERK1表达载体共转染HEK-293细胞,Western印迹检测ERK1总蛋白和磷酸化ERK1蛋白水平。结果在HEK-293细胞中,ING4蛋白分别缺失NLS和PHD结构域后,其对MAPK细胞信号通路成员ERK1磷酸化的促进作用均降低,突变ING4的NLS结构域中两个重要位点Lys-Lys(KK)和Arg-Ala-Arg-Ser-Lys(RARSK)并不改变对ERK1激活的能力,但突变ING4 PHD结构域中RKKK位点则改变了调控ERK1磷酸化的能力。结论ING4的NLS和PHD指状结构域同时参与了刺激MAPK细胞信号通路成员ERK1的激活。; 潘春阳王克生王勤婉韩泽广张新; 关键词：核定位信号 ERK1

PIK3IP1与其新剪切体PIK3IP1-v1均定位于细胞膜并诱导细胞凋亡被引量：2: 2008年; 目的:发现和克隆人类基因PIK3IP1的新变异体并鉴定其功能,研究其对细胞活力的影响和亚细胞定位,分析PIK3IP1在细胞系中的表达情况。方法:利用GenBank中的数据,从人的混合组织cDNA中通过PCR克隆PIK3IP1和它的新剪切体PIK3IP1-v1,运用生物信息学分析其结构特性。经萤光素酶活性检测、细胞形态观察和流式细胞检测研究PIK3IP1和PIK3IP1-v1对细胞存活力的影响,使用荧光显微镜观察其亚细胞定位。最后通过RT-PCR分析PIK3IP1在细胞系中的表达情况。结果:获得PIK3IP1和新剪切体PIK3IP1-v1的真核表达质粒和融合绿色荧光蛋白表达质粒。生物信息学分析显示,PIK3IP1和PIK3IP1-v1均有信号肽并包含跨膜结构域,但后者胞外缺失一个Kringle结构域。功能分析发现,PIK3IP1和PIK3IP1-v1均可诱导细胞凋亡。荧光显微观察证实,PIK3IP1的两种剪切体均定位于细胞膜。RT-PCR证明PIK3IP1在多种细胞中转录水平较低。结论:新剪切体PIK3IP1-v1和PIK3IP1均定位于细胞膜并诱导细胞凋亡,而且在多种细胞中低水平转录。; 高鹏曾沃坦邓唯唯李娜石太平马大龙; 关键词：1-磷脂酰肌醇3-激酶膜蛋白质类细胞凋亡

肝癌相关基因DLK1转基因小鼠的构建与鉴定: 2008年; 目的构建并鉴定肝脏特异性表达的DLK1转基因小鼠。方法通过基因重组方法，将小鼠DLK1 cDNA片段置于小鼠白蛋白基因增强子和启动子序列下游，构建肝脏特异性表达的DLK1重组质粒，酶切重组质粒得到转基因片段，转基因在体外进行表达鉴定后，显微注射获得DLK1转基因首建小鼠，对首建小鼠进行传代，利用F1代小鼠进行DLK1转基因表达的鉴定。结果逆转录（RT）-PCR和细胞免疫荧光显示，转基因DLK1片段可在小鼠肝癌细胞系Hep1-6中表达。RT-PCR和免疫组化结果显示，DLK1在F1代成年转基因小鼠肝脏中特异性表达。结论成功构建了肝脏特异性表达的DLK1转基因小鼠。; 黄丽钰王克生韩泽产张新; 关键词：肝肿瘤基因表达转基因

检测T-bet表达活性的荧光素酶报告基因质粒的构建和鉴定: 2009年; 目的构建一个能应用于T—bet转录活性研究和大规模筛选的报告基因质粒。方法以IFN-γ基因的CNS-22 T box结合位点序列为基础，人工合成顺式元件DNA（TbRE），重组连接到报告基因载体pLUC—MCS中。经测序验证后，转染293T细胞检测报告基因对T—bet的响应，并通过电泳迁移率检测（EMSA）证实T—bet与TbRE元件的特异结合。结果成功构建了TbRE—LUC报告基因质粒。经荧光素酶活性检测证实外源表达的T—bet对报告基因的表达可以有20倍左右的激活，并且存在剂量效应，T—bet的表达量与报告基因的表达水平呈正相关。经电泳迁移率检测验证，T—bet可以与TbRE顺式反应元件特异性结合。结论成功构建了T—bet转录活性相关的报告基因质粒TbRE—LUC，该报告基因系统反应灵敏，特异性强，可用于大规模筛选T—bet转录调控相关基因。; 高鹏郭帅石太平马大龙; 关键词：报告基因

ING5在肝癌中表达的研究被引量：8: 2010年; 背景：生长抑制因子（ING）家族基因对多种肿瘤的发生具有抑制作用。目的：研究ING5基因在肝癌发生、发展中的作用。方法：构建表达ING5的真核和原核质粒，制备ING5多克隆抗体。以实时荧光定量RT-PCR检测肝癌组织中ING家族基因mRNA表达以及肝癌组织和肝癌细胞株中ING5mRNA表达，分别以蛋白质印迹法和免疫组化染色检测肝癌细胞株和肝癌组织中ING5蛋白表达。结果：肝癌组织中ING家族基因mRNA表达均下调。肝癌组织和肝癌细胞株中ING5mRNA和蛋白表达均下调。结论：ING5在肝癌中表达下调．对其发生、发展可能起抑制作用。; 路美玲陈斐王勤婉韩泽广张新; 关键词：基因肿瘤抑制肝肿瘤细胞系肿瘤

C17orf62诱导细胞死亡的作用及其机制: 2011年; 目的:克隆功能未知的人类新基因C17orf62的长编码序列(C17orf62-L),分析其在细胞系中的表达情况,研究其在细胞内定位情况及其对细胞活力的影响。方法:利用GenBank中的数据,通过聚合酶链反应(polymerasechain reaction,PCR)从人的cDNA文库中克隆C17orf62编码187个氨基酸的长编码序列C17orf62-L,运用生物信息学分析其结构特性。通过逆转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)分析C17orf62在细胞系中的表达情况。经激光共聚焦显微镜观察C17orf62-L的亚细胞定位情况。使用流式细胞检测以及Western blot实验,分析C17orf62-L对细胞活力的影响及其机制。结果:生物信息学分析显示,C17orf62-L具有信号肽切割位点并包含跨膜结构域。RT-PCR证明C17orf62-L在多种细胞系广泛表达;激光共聚焦实验证实,C17orf62-L广泛分布于胞质,并且与高尔基体部分共定位。功能分析发现,C17orf62-L可诱导细胞死亡,且可通过多聚ADP核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)切割发挥作用。结论:C17orf62是一个新的人类细胞死亡诱导基因。; 邓暄赵红珊彭智邓唯唯李娜郭帅石太平; 关键词：基因表达细胞死亡

新细胞因子趋化素样因子(CKLF1)的发现与新药开发被引量：6: 2011年; 目的从人类基因组发现和开发新药靶标是新世纪药物开发的热点领域,并显现出良好的前景。本综述介绍作者实验室从人类基因组发现的新细胞因子趋化素样因子(chemokine-like factor 1,CKLF1),后续研究发现包括国内外多家实验室的研究工作。方法总经经过近10年的研究,包括国内外多家实验室细胞水平、动物体内及临床疾病相关性研究。结果 CK-LF1是一个新的非典型趋化因子,具有广谱的趋化活性,并发挥促进炎症的效应,而CKLF1的C端衍生肽CKLF1-C19是一个潜在的CKLF1拮抗肽。在小鼠哮喘模型中,CKLF1-C19可明显抑制Th2细胞和嗜酸性粒细胞在肺部的浸润,降低气道反应性。结论 CKLF1-C19有望成为新的抗炎多肽药物。; 王应马大龙; 关键词：细胞因子自身免疫病过敏性疾病

Recombinant human PDCD5 protein enhances chemosensitivities of hematologic malignancies被引量：3: 2009年; PDCD5 is a novel apoptosis-related gene. Overexpression of PDCD5 facilitates apoptosis in various tumor cells. Here, we investigated the roles of recombinant human PDCD5 (rhPDCD5) protein in chemosensitivities of hematologic malignancies. The rhPDCD5 increased the in vitro cytotoxicity of daunorubicin (DNR), adriamycin (ADM) and As2O3 in three hematologic tumor cell lines. In vivo studies showed that DNR combined with rhPDCD5 significantly suppressed tumor growth of U937 xenograft nude mice compared with DNR alone. In conclusion, rhPDCD5 combined with the chemotherapeutic drug has greater efficacy than chemotherapy alone, and rhPDCD5 is a very promising chemosensitizer.; WANG YanFangSHI LinSONG QuanShengZHANG YingMeiLOU YaXinZHENG YiMA DaLongWANG YingKE XiaoYan; 关键词：PDCD5 血液病肿瘤细胞凋亡柔红霉素凋亡相关基因

渝B2-20050021-1　渝公网安备 50019002500403号　违法和不良信息举报中心　互联网出版许可证　新出网证(渝)字10号

国家高技术研究发展计划(2006AA02A305)

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户反馈

国家高技术研究发展计划(2006AA02A305)

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户登录

用户反馈