国家自然科学基金(81071533)
- 作品数：29 被引量：106H指数：7
- 相关作者：于泳浩谢克亮陈红光王国林韩焕芝更多>>
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- 氢气对脂多糖诱导人脐静脉内皮细胞损伤的影响被引量：2
- 2013年
- 目的 评价氢气对脂多糖（LPS）诱导人脐静脉内皮细胞损伤的影响.方法 人脐静脉血管内皮细胞培养于含10％胎牛血清的DMEM培养基,以2×106个/ml的密度接种于6孔培养板,2ml/孔.采用随机数字表法,将细胞分为4组（n=35）：对照组（C组）、氢气组（H2组）、LPS组和L胳＋H2组.C组和LPS组用正常培养基培养,H2组和LPS＋ H2组用含饱和氢气培养基培养.LPS组和LPS＋H2组分别加入LPS1 μg/ml孵育,C组和H2组加入等容量生理盐水.分别于孵育6、12和24h时,取5孔细胞,采用瑞姬氏染色观察细胞损伤情况;分别于孵育6、12和24h时,取5孔细胞,采用Western blot法测定血管内皮细胞钙粘连蛋白和β-连环蛋白的表达.于孵育24h时,取5孔细胞,采用免疫荧光法测定血管内皮细胞钙粘连蛋白和p连环蛋白的表达.结果 LPS组内皮细胞出现病理学损伤;与LPS组比较,LPS＋ H2组内皮细胞病理学损伤减轻.与C组比较,LPS组和LPS＋ H2组血管内皮细胞钙粘连蛋白表达下调（P＜0.05）,β-连环蛋白表达差异无统计学意义（P＞0.05）;与LPS组比较,LPS＋ H2组血管内皮细胞钙粘连蛋白表达上调（P＜0.05）,p连环蛋白表达差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 氢气可有效减轻LPS诱导人脐静脉内皮细胞损伤,与抑制血管内皮细胞钙粘连蛋白表达下调有关.
- 王卫娜谢克亮陈红光韩焕芝王国林于泳浩
- 关键词：氢气脂多糖脐静脉内皮细胞
- 吸入氢气对脓毒症小鼠急性肺损伤时炎性反应的影响被引量：5
- 2012年
- 目的评价吸入氢气对脓毒症小鼠急性肺损伤时炎性反应的影响。方法雄性ICR小鼠48只，体重20～25g，5周龄，采用随机数字表法，将其随机分为4组（n=12）：假手术组（A组）、假手术＋氢气组（B组）、脓毒症组（c组）和脓毒症＋氢气组（D组）。采用盲肠结扎穿孔（cLP）法制备脓毒症模型。B组和D组于假手术或CLP后1、6h吸入2％氢气1h。CLP后24h时行行为学评分，随后采集动脉血行血气分析，计算氧合指数；采集静脉血样，随后处死小鼠取肺组织，测定血清及肺组织TNF—α、IL-1β、高迁移率族蛋白B1（HMGB1）和IL-10水平和计算凋亡指数。结果与A组比较，C组和D组行为学评分升高，氧合指数降低，凋亡指数升高，血清及肺组织TNF-α、IL-1β、HMGB1和IL-10水平升高（P〈0．05），B组差异无统计学意义（P〉0．05）；与C组比较，D组行为学评分降低，氧合指数升高，凋亡指数降低，血清及肺组织TNF-α、IL-1β和HMGB1水平降低，IL-10水平升高（P〈0．05）。结论吸人氢气可调节促炎和抗炎因子水平平衡，抑制炎性反应，减轻脓毒症小鼠急性肺损伤。
- 刘宏伟史媛谢克亮于泳浩王涛韩焕芝
- 关键词：脓毒症呼吸窘迫综合征全身炎症反应综合征
- 氢气对脂多糖诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的影响被引量：7
- 2012年
- 目的评价氢气对脂多糖（LPS）诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的影响。方法离体培养人脐静脉内皮细胞株HUVEC-12，以1×104／ml接种于96孔培养板（每孑L200m）或以1×106／ml接种于6孔培养板（每孔2ml）。采用随机数字表法，将细胞随机分为4组（n=30）;正常对照组（C组）、氢气组（H2组）、LPS组和LPS＋H2组。C组和LPS组用正常培养基培养；H2组和LPS＋巩组用含饱和氢气的培养基培养，同时LPS组和LPS＋H2组加入LPS1μg/ml，而C组和地组加入等容量的生理盐水。孵育24h后用MrrT法检测细胞活力，流式细胞术测定细胞凋亡情况；采用ELISA法测定细胞上清液中HMGBl浓度。结果与C组和H2组比较，LPS组和LPS＋H2组细胞活力降低，细胞凋亡率和细胞上清液中HMGBl浓度升高（P〈O．05）；与LPS组比较，LPS＋H2组细胞活力升高，细胞凋亡率和细胞上清液中HMGBl浓度降低（P〈0．05）。结论氢气可有效减少LPS诱导人脐静脉内皮细胞凋亡，其机制与抑制HMGBl释放有关。
- 韩焕芝谢克亮陈红光刘大全张利军于泳浩
- 关键词：氢脂多糖类脐静脉内皮细胞细胞凋亡
- 氢气对脓毒症小鼠肠组织Rho/ROCK信号通路的影响被引量：4
- 2015年
- 目的 评价氢气对脓毒症小鼠肠组织Ras同源基因（Rho）/Rho相关螺旋卷曲蛋白激酶（ROCK）信号通路的影响.方法 雄性ICR小鼠64只,体重20～ 25 g,6周龄,采用随机数字表法,将其分为4组（n=16）：假手术组（SH组）、氢气组（H2组）、脓毒症组（S组）和脓毒症＋氢气组（S＋H2组）.采用盲肠结扎穿孔（CLP）法制备脓毒症模型.于CLP术后1和6h时H2组和S＋H2组分别吸入2％氢气1h.于CLP术后20 h时取8只小鼠,向胃内灌注异硫氰酸荧光素标记的右旋糖酐（FITC-右旋糖酐）,4h后心脏穿刺取血样,测定血清FITC-右旋糖酐的浓度.于CLP术后24 h时取8只小鼠,取血液、肝脏、脾脏和肾脏进行细菌培养,观察菌群移位情况;取小肠组织,透射电镜下观察肠上皮细胞超微结构,光镜下观察肠组织病理学改变并进行评分,采用Western blot法测定肠组织Rho、ROCK1和ROCK2的表达水平.结果 与SH组比较,S组和S＋H2组血清FITC-右旋糖酐浓度和肠损伤评分升高,血液、肝脏、脾脏和肾脏的菌群移位增加,肠组织Rho、ROCK1和ROCK2的表达上调（P＜0.05）,H2组上述各指标差异无统计学意义（P＞0.05）;与S组比较,S＋H2组血清FITC-右旋糖酐浓度和肠损伤评分降低,血液、肝脏、脾脏和肾脏的菌群移位减少,肠组织Rho、ROCK1和ROCK2的表达下调（P＜0.05）,肠组织病理学损伤减轻.结论 氢气减轻脓毒症小鼠肠损伤的机制与抑制Rho/ROCK信号通路激活有关.
- 张红涛于泳浩刘玲玲杨涛马小叶王国林
- 关键词：脓毒症RHO因子RHO相关激酶类肠损伤
- Nrf2在氢减轻脓毒症小鼠肠损伤中的作用被引量：2
- 2017年
- 目的评价核因子E2相关因子2（Nrf2）在氢减轻脓毒症小鼠肠损伤中的作用。方法清洁级雄性野生型及Nrf2基因敲除ICR小鼠各18只，6～8周龄，体重20～25 g，采用随机数字表法将2种小鼠各分为3组（n＝6）：假手术组（Sham组）、脓毒症组（Sep组）和氢气组（H2组）。采用盲肠结扎穿孔法制备小鼠脓毒症模型。H2组小鼠于术后1和6 h时各吸入2%氢气1 h。术后24 h时处死小鼠取小肠组织，采用ELISA法测定TNF-α、IL-1β和高迁移率族蛋白B1（HMGB1）的含量；采用分光光度计测定SOD和过氧化氢酶（CAT）的活性及MDA含量；采用Multiskan酶标仪测定人8异前列腺素F2α（8-iso-PGF2α）的含量；采用Western blot法及RT-PCR法分别检测血红素氧合酶1（HO-1）、HMGB1及其mRNA的表达。结果野生型小鼠和Nrf2基因敲除小鼠：与Sham组比较，Sep组TNF-α、IL-1β、HMGB1、MDA及8-iso-PGF2α的含量增加，HO-1和HMGB1及其mRNA表达上调，CAT和SOD活性降低（P〈0.05）。野生型小鼠：与Sep组比较，H2组TNF-α、IL-1β、HMGB1及其mRNA、MDA及8-iso-PGF2α水平降低，HO-1及其mRNA水平升高，CAT和SOD活性增强（P〈0.05）。Nrf2基因敲除小鼠：与Sep组比较，H2组上述指标差异无统计学意义（P〉0.05）。与野生型小鼠H2组比较，Nrf2基因敲除小鼠H2组TNF-α、IL-1β、HMGB1及其mRNA、MDA及8-iso-PGF2α水平升高，HO-1及其mRNA表达下调，CAT与SOD活性降低（P〈0.05）。结论氢减轻脓毒症小鼠肠损伤的机制与Nrf2有关。
- 王蓓于洋边映雪谢克亮李媛张洪涛于泳浩
- 关键词：NF-E2相关因子2基因敲除氢脓毒症肠损伤
- 氢气对PC12细胞缺氧复氧时内质网应激的影响被引量：3
- 2012年
- 目的探讨氢气对PCI2细胞缺氧复氧时内质网应激的影响。方法PCI2细胞采用随机数字表法，将其随机分为4组，正常对照组：细胞常规培养25h；阳性对照组：细胞正常培养1h后，用氢气饱和的RPMI-1640培养基继续培养24h；缺氧复氧组：细胞缺氧1h后复氧24h；氢气组：细胞缺氧1h后，用氢气饱和的RPMI-1640培氧基复氧24h。PCI2细胞加入含Na2S2O4终浓度为5．0mmol／L的RPMI-1640培养液，5％CO2培养箱37℃孵育1h；更换正常RPMI．1640培养液，继续培养24h，制备PCI2细胞缺氧复氧模型。采用WST-1法测定细胞相对增殖率，采用硫代巴比妥酸法测定MDA浓度，采用免疫组化法检测caspase-3表达，采用RT-PCR法检测活化转录因子4（ATF4）mRNA和C／EBP同源蛋白（CHOP）mRNA的表达。结果与正常对照组和阳性对照组比较，缺氧复氧组细胞相对增殖率降低，MDA浓度升高，caspase-3、ATF4mRNA和CHOPmRNA的表达上调，氢气组ATF4mRNA和CHOPmRNA的表达上调（P〈0．05）；正常对照组和阳性对照组间细胞相对增殖率、MDA浓度、caspase-3、ATF4mRNA和CHOPmRNA的表达比较差异无统计学意义（P〉0．05）；与缺氧复氧组比较，氢气组细胞相对增殖率升高，MDA浓度降低，caspase-3、ATF4mRNA和CHOPmRNA的表达下调（P〈0．05）。结论氢气可能通过抑制内质网应激，降低细胞凋亡，减轻PCI2细胞缺氧复氧损伤。
- 刘宏伟董亮陈红光赵婷婷焦阳于泳浩
- 关键词：细胞低氧内质网应激
- Nrf2在氢气治疗严重脓毒症肠损伤中的作用被引量：18
- 2014年
- 目的 探讨Nrf2在氢气治疗严重脓毒症肠损伤中的作用.方法 将152只雄性ICR小鼠按随机数字表法分为假手术组、氢气对照组、脓毒症组和氢气治疗组4组,每组38只.采用盲肠结扎穿孔术（CLP）制备脓毒症模型,假手术组和氢气对照组不进行CLP,其他操作相同.氢气对照组和氢气治疗组于假手术或CLP后1h、6h分别吸入2％氢气1h.每组取20只小鼠,观察术后7d内的生存率.每组剩余18只小鼠,分别于术后6、12和24 h各处死6只,取部分肠组织,用蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）检测Nrf2、高迁移率族蛋白B1 （HMGB1）的蛋白表达;用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测Nrf2 mRNA表达;于术后24 h取部分中段空肠,行苏木素-伊红（HE）染色,光镜下观察肠组织损伤程度.结果 假手术组和氢气对照组各指标差异均无统计学意义.脓毒症组小鼠7d生存率较假手术组明显降低（0比100％,P＜0.05）;氢气治疗组小鼠7d生存率较脓毒症组明显升高（55％比0,P＜0.05）.与假手术组比较,脓毒症组术后6、12和24 h肠组织Nrf2的蛋白表达（灰度值）和mRNA表达均明显升高（Nrf2蛋白6 h：1.973±0.350比1.000±0.000,t=4.411,P=0.002; 12 h：2.367±0.186比1.000 ±0.000,t=10.210,P=0.000; 24 h：2.517±0.280比1.000±0.000,t =9.521,P=0.000;Nrf2 mRNA 6 h：1.606±0.271比1.000 ±0.000,t=3.631,P=0.002; 12 h：1.692±0.399比1.000±0.000,t=3.233,P=0.005;24 h：1.784±0.341比1.000±0.000,t=3.894,P=0.001）,术后24 h肠组织HMGB1表达（灰度值）明显升高（1.507±0.220比1.000±0.000,t=3.948,P=0.004）.与脓毒症组比较,氢气治疗组术后6、12和24 h肠组织Nrf2的蛋白和mRNA表达明显升高（Nrf2蛋白6 h：2.583±0.395比1.973±0.350,t=2.765,P=0.024; 12 h：2.725±0.235比2.367±0.186,t=2.674,P=0.028; 24 h：2.930±0.212比2.517±0.280,t=2.595,P=0.032; Nrf2 mRNA 6 h：2.008±0.400比1.606±0271,t=2.405,P=0.029;12 h：2.188 ±0.475比1.692±0.399,t=2.317,P=0.034;24 h：2.333±0.406比1.78
- 李媛谢克亮陈红光王卫娜王国林于泳浩
- 关键词：NRF2脓毒症氢气肠组织高迁移率族蛋白B1
- 富氢液对脂多糖刺激离体肠上皮屏障功能障碍的影响被引量：4
- 2016年
- 目的：观察富氢液对脂多糖（LPS）刺激人肠上皮细胞（Caco2）单层模型细胞通透性的影响，探讨其对肠屏障功能障碍的保护作用机制。方法人结肠腺癌细胞株Caco2培养于含20%胎牛血清的DMEM培养基中，传代至第28～35代的细胞用于实验。采用随机数字表法将细胞分为空白组、富氢液组、LPS组和LPS＋富氢液组。空白组和LPS组用正常培养基培养，富氢液组和LPS＋富氢液组用含饱和氢气培养基培养；LPS组和LPS＋富氢液组分别加入1g/L的LPS孵育，空白组和富氢液组加入等量生理盐水。建立Caco2细胞单层模型模拟离体肠上皮屏障，孵育0、3、6、12、24、48h测定其跨上皮细胞电阻（TEER）值来反映肠屏障通透性；采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法和乳酸脱氢酶（LDH）法分别测定细胞活性和损伤情况；孵育6、12、24h采用蛋白质免疫印迹试验（WesternBlot）测定细胞紧密连接蛋白claudin-1与occludin的蛋白表达；孵育24h采用免疫荧光法观察claudin-1与occludin蛋白的分布。结果空白组与富氢液组各指标比较差异均无统计学意义。LPS组和LPS＋富氢液组细胞孵育6h起TEER值即较空白组明显降低，且呈时间依赖性；而LPS＋富氢液组细胞孵育6h起TEER值明显高于LPS组。与空白组相比，LPS组细胞活性明显降低〔（67.2±7.9）%比（100.0±0.0）%，P＜0.05〕，细胞损伤明显〔LDH释放率：（38.5±2.1）%比（1.2±0.3）%， P＜0.05〕，孵育6、12、24h时claudin-1和occludin蛋白表达明显下调〔claudin-1（灰度值）：0.351±0.079、0.272±0.075、0.190±0.049比0.518±0.030，occludin（灰度值）：0.416±0.044、0.290±0.062、0.226±0.019比0.602±0.038，均P＜0.05〕，孵育24h时细胞claudin-1和occludin蛋白分布紊乱且连续性中断。与LPS组相比，LPS＋富氢液组细胞活性部分恢复〔（88.8±7.4）%比（67.2±7.9）%，P＜0.05〕，细胞损伤减轻〔LDH释放率：（16.
- 杨涛谢克亮陈红光张红涛于洋王国林于泳浩
- 关键词：脂多糖肠屏障功能障碍紧密连接蛋白
- 氢气对脓毒症小鼠肺组织Nrf2/ARE通路的影响被引量：2
- 2014年
- 目的 评价氢气对脓毒症小鼠肺组织核因子E2相关因子2（Nrf2）/抗氧化反应原件（ARE）通路的影响.方法 雄性ICR小鼠72只,体重20～ 25 g,6周龄,采用随机数字表法,将其分为4组（n=18）：假手术组（SH组）、氢气组（H2组）、脓毒症组（S组）和脓毒症＋氢气组（S＋H2组）.采用盲肠结扎穿孔 （CLP）法制备脓毒症模型.于CLP术后1和6h时H2组和S＋H2组吸入2％氢气1h.分别于CL术后7、12和24 h时各处死6只小鼠,取肺组织,采用Western blot法测定Nrf2和血红素氧合酶-1（HO-1）的蛋白表达,采用RT-PCR法检测Nrf2 mRNA的表达;于CLP术后24 h时测定肺组织病理学损伤评分和湿重/干重比值（W/D比值）,采用Western blot法测定肺组织高迁移率族蛋白B1（HMGB1）表达.结果 与SH组比较,S组和S＋H2组肺组织病理学损伤评分和W/D比值升高,Nrf2蛋白及其mRNA、HO-1和HMGB1的表达上调（P＜0.05）,H2组上述各指标差异无统计学意义（P＞0.05）;与S组比较,S＋H2组肺组织病理学损伤评分和W/D比值降低,Nrf2蛋白及其mRNA、HO-1的表达上调,HMGB1表达下调（P＜0.05）.结论 氢气减轻脓毒症小鼠急性肺损伤的机制与激活Nrf2/ARE通路有关.
- 李媛谢克亮陈红光王卫娜王国林于泳浩
- 关键词：氢脓毒症NF-E2相关因子2反应元件
- 氢对脓毒症小鼠肠组织ROCK1和mDia1表达的影响
- 2017年
- 目的评价氢对脓毒症小鼠肠组织Rho相关激酶1（ROCK1）和哺乳动物Dia相关蛋白1（mDial）表达的影响。方法雄性C57BL／6小鼠90只，体重20～25g，6周龄，采用随机数表法，将其分为3组（n=30）：对照组（c组）、脓毒症组（s组）和脓毒症＋氢组（SH组）。采用盲肠结扎穿孔（CLP）法制备脓毒症模型。SH组于CLP后1和6h时吸入2％氢气1h。取20只小鼠观察7d生存情况；于CLP术后24h时处死10只小鼠，心脏取血，测定血清二胺氧化酶（DAO）活性，并行血液细菌培养并计数菌落数。取小肠组织，行肠损伤评分，采用免疫组织化学染色法测定ROCK1和mDial阳性细胞率，并计算ROCK1与mDial阳性细胞率的比值（ROCK1／mDial比值）；采用免疫荧光染色法测定肠上皮细胞钙粘附蛋白E的表达。结果与c组比较，S组和SH组生存率降低，血清DAO活性、血液培养菌落数及肠损伤评分升高，肠组织ROCK1阳性细胞率和mDial阳性细胞率升高，钙粘附蛋白E表达下调，s组ROCK1／mDial比值升高（P〈0．05），SH组ROCK1／mDial比值差异无统计学意义（P〉0．05）；与s组比较，SH组生存率升高，血清DAO活性、血液培养菌落数及肠损伤评分降低，肠组织ROCK1阳性细胞率降低，mDial阳性细胞率升高，ROCK1／mDial比值降低，钙粘附蛋白E表达上调（P〈0．05）。结论氢改善脓毒症小鼠肠屏障功能的机制可能与下调ROCK1表达，上调mDial表达，纠正ROCK1，mDial比例失衡有关。
- 张红涛姜连浩刘玲玲张素品梁禹于泳浩
- 关键词：氢脓毒症RHO相关激酶类PA肠粘膜
