国家自然科学基金(30471985)
- 作品数：8 被引量：22H指数：3
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- ATRA耐药基因HA117相关蛋白在肺癌和乳腺癌组织中的表达特点及临床意义被引量：2
- 2011年
- 目的探讨全反式维甲酸(ATRA)耐药基因HA117相关蛋白在肺癌和乳腺癌组织中的表达特点及临床意义。方法随机选择23例肺癌组织和21例乳腺癌组织作为实验组,9例非癌肺组织和11例非癌乳腺组织作为对照组,应用免疫组化S-P法检测HA117相关蛋白在上述组织切片中的表达,并结合其临床资料进行回顾性分析。结果 HA117相关蛋白在肺癌组织、乳腺癌组织、非癌肺组织及非癌乳腺组织中的阳性表达率分别为60.9%(14/23)、57.1%(12/21)、11.1%(1/9)及0.0%(0/11)。HA117相关蛋白在肺癌和乳腺癌组织中的阳性表达明显高于非癌组织(P<0.05)。HA117相关蛋白的表达水平与肺癌及乳腺癌患者的年龄、肿瘤分级、病理分型、淋巴结转移及有无术前化疗方面无明显相关性(P>0.05)。结论 HA117相关蛋白在肺癌和乳腺癌的高表达提示二者对ATRA具有较强的耐药性。
- 牟廷刚金先庆赵利华丁雄辉陈建飞孙艳辉李昆昆王士奇
- 关键词：多药耐药相关蛋白类肺肿瘤维甲酸
- 腺病毒介导的新基因HA117对Jurkat细胞多药耐药功能的影响被引量：3
- 2009年
- 目的研究新基因HA117对急性淋巴细胞白血病细胞Jurkat耐药性的影响,探讨新基因HA117多药耐药(multidrug resistance,MDR)相关功能。方法以携带HA117基因的重组腺病毒Ad5-HA117感染Jurkat细胞得到高表达HA117基因的细胞Jurkat/HA117,以荧光显微镜和流式细胞术检测细胞感染效率,RT-PCR检测感染前后实验细胞HA117基因表达,MTT检测比较高表达HA117基因前后Jurkat细胞药物敏感性变化。结果新基因HA117可使Jurkat细胞对多种化疗药物耐药性增强,转染Ad5-HA117重组腺病毒的Jurkat细胞对VCR、ADM、Vp-16、DNR、MMC、CTX药物的药物耐受性均比未转染的Jurkat细胞增高,增高3～7倍(P<0.05,P<0.01),转染空载体组耐药性跟未转染的Jurkat细胞相比无显著差异(P>0.05)。结论新基因HA117可使Jurkat细胞的耐药功能增加,证实新基因HA117具有多药耐药功能。
- 郭玉霞金先庆罗庆郑改焕于洁戴碧涛刘筱梅徐酉华
- 关键词：多药耐药JURKAT细胞
- wnt5a基因修饰bMSCs对HL60细胞生长分化影响的研究被引量：2
- 2010年
- 目的探讨外源性wnt5a基因修饰的骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,bMSCs)支持骨髓造血及抑制白血病细胞HL60生长的双重作用,为白血病治疗提供新的思路。方法用流式细胞仪鉴定所培养的bMSCs,重组腺病毒Ad5-wnt5a对bMSCs进行基因修饰,RT-PCR检测wnt5a的表达,流式细胞仪检测wnt5a基因修饰bMSCs的效率,描绘不同处理组(bMSCs组,Ad5-GFP组,Ad5-wnt5a组)的细胞生长曲线。采用外源性wnt5a基因修饰的bMSCs与HL60细胞共培养的方法,利用免疫细胞化学染色法和流式细胞仪检测各处理组(HL60细胞组,HL60+bMSCs组,HL60+Ad5-GFP组,HL60+Ad5-wnt5a组)细胞表面分化抗原CD13、CD14、CD68以及细胞分化周期的变化。结果腺病毒成功将外源性wnt5a基因转染bMSCs;HL60+Ad5-wnt5a组细胞单核细胞系表面标志抗原CD14、CD68表达高于对照组(P<0.05),而粒细胞系表面标志抗原CD13表达与对照比较差异无统计学意义(P>0.05);HL60+Ad5-wnt5a组细胞自第3 d开始,细胞周期阻滞在G2期。结论外源性wnt5a促进bMSCs增殖,抑制HL60细胞的生长并可诱导HL60细胞向成熟方向分化。
- 沈亚莉徐酉华罗庆郭振华郑改焕郭玉霞
- 关键词：WNT5AHL60细胞基因修饰
- 新基因HA117在儿童急性白血病中的表达及其临床意义被引量：4
- 2009年
- 目的检测新基因HA117在急性白血病(AL)患儿骨髓单个核细胞(BMMNC)中的表达,并探讨其与多药耐药关系。方法应用RT-PCR方法检测36例不同时期AL患儿BMMNC HA117基因的表达;以10例特发性血小板减少性紫癜(ITP)患儿作为对照。结果36例AL患儿BMMNC HA117基因阳性表达率为75.00%,急性淋巴细胞白血病(ALL)组其阳性表达率(69.57%)与急性髓细胞白血病(AML)组(91.67%)比较差异无统计学意义。但AML组HA117/β-actin定量表达水平高于ALL组(q=4.5852,P<0.01)。AML组和ALL组HA117基因阳性表达率及HA117/β-actin定量表达水平均高于对照组(χ2=5.05,8.81;q=4.4612,6.9695,P<0.05)。初诊组患儿BMMNC HA117基因阳性表达率(72.00%)高于对照组(χ2=5.91,P<0.05),与缓解组患儿(77.78%)比较差异无统计学意义。初诊组HA117/β-actin定量表达水平高于缓解组和对照组(q=5.1991,6.3812,P<0.01)。缓解组HA117基因阳性表达率高于对照组(χ2=4.24,P<0.05),但其半定量表达水平与对照组比较差异无统计学意义。未缓解组HA117/β-actin定量表达水平高于缓解组和对照组(q=3.1705,4.4102;P<0.05),与初诊组比较差异无统计学意义。结论新基因HA117在初诊和未缓解AL患儿BMMNC中具有高表达。HA117可能参与了白血病的多药耐药,临床以HA117基因半定量检测更有意义。
- 车艳徐酉华郑改焕郭玉霞
- 关键词：急性白血病聚合酶链反应多药耐药
- 新基因HA117最佳siRNA的筛选及重组腺病毒构建被引量：3
- 2009年
- 目的验证pSOS-HUS筛选目的基因最佳siRNA的效果,应用pSOS-HUS筛选新基因HA117最佳siRNA,构建携带HA117基因最佳siRNA转录模板DNA的重组腺病毒。方法构建携带HA117基因及其siRNA模板DNA链的双克隆质粒。把双克隆质粒分别转染293细胞,通过镜下观察、流式细胞仪检测比较绿色荧光表达强度,RT-PCR检测HA117基因mRNA表达,筛选鉴定基因HA117最佳siRNA。构建HA117基因RNA干扰重组腺病毒。结果从5对模板DNA链中筛选出最有效片段HAi5,构建携带HAi5的重组腺病毒。结论载体pSOS-HUS可快捷有效地筛选目的基因的最佳siRNA;在5对模板DNA中,HAi5转录的siRNA对新基因HA117干扰效果最强;成功构建携带HAi5的重组腺病毒。
- 郑改焕金先庆罗庆郭玉霞宿玉玺徐酉华
- 关键词：RNA干扰多药耐药
- 耐药相关新基因HA117的克隆及重组腺病毒制备被引量：12
- 2008年
- 目的:构建表达耐药相关新基因HA117的重组腺病毒表达系统。方法:用基因工程技术将耐药相关新基因HA117的cDNA亚克隆至穿梭质粒pAdTrack-CMV上,然后在细菌内与pAdEasy同源重组,将重组腺病毒Ad5-HA117经脂质体转染293细胞包装、扩增腺病毒颗粒,通过荧光显微镜及流式细胞仪进行检测。结果:酶切鉴定及PCR结果证明耐药相关新基因HA117重组腺病毒载体构建成功,构建的耐药新基因HA117重组腺病毒载体的效价达到8.3×1011PFU/ml。结论:成功构建了表达ATRA相关耐药新基因HA117的重组腺病毒载体,为后续对HA117基因的相关研究奠定了基础。
- 郭玉霞罗庆徐酉华
- 关键词：腺病毒转染
- 新基因HA117在淋巴瘤细胞中的耐药相关功能研究被引量：7
- 2009年
- 目的:研究新基因HA117对淋巴瘤细胞系Raji细胞耐药性的影响,探讨新基因HA117与多药耐药(multi-drug resistance,MDR)的相关功能。方法:以重组质粒pAdtrack-HA117转染Raji细胞,得到高表达HA117的Raji/HA117细胞;以HA117靶向RNA干扰重组质粒pSES-HUS-HAi转染Raji/HA117细胞,得到外源性HA117基因表达沉默的Raji/HA117/HAi细胞;以荧光显微镜和流式细胞仪检测转染率,RT-PCR检测转染前后HA117基因的表达,MTT检测比较高表达HA117基因的Raji/HA117细胞以及RNAi沉默HA117基因表达前后Raji细胞的药物敏感性变化。结果:脂质体介导pAdtrack-HA117转染Raji细胞后,实验细胞有效表达HA117,高表达HA117的Raji/HA117细胞对柔红霉素(daunorubicin,DNR)、阿霉素(adriamy-cin,ADM)、长春新碱(vincristine,VCR)、环磷酰胺(cytophosphan,CTX)和5氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)的耐药性比未转染组Raji细胞增强2～7倍(P<0.05);转染PSES-HUS-HAi可有效沉默Raji/HA117细胞中高表达的HA117基因,与未转染组Raji细胞相比,Raji/HA117/HAi细胞对DNR、ADM、CTX、VCR和5-FU的耐药性消失(P>0.05)。结论:新基因HA117可使Raji细胞对多种化疗药物的耐药性增强,提示新基因HA117可能具有多药耐药相关功能,有望成为新的肿瘤基因治疗靶点。
- 郑改焕金先庆郭玉霞罗庆徐酉华
- 关键词：淋巴瘤抗药性多药RNA干扰
- Wnt5a 修饰的bMSCs 对白血病小鼠造血及白血病细胞生长的影响被引量：1
- 2011年
- 目的: 探讨Wnt5a基因修饰的骨髓间充质干细胞(bMSCs)对急性髓系白血病小鼠体内造血和白血病细胞生长的影响。方法:外周血瑞氏染色、骨髓流式细胞仪鉴定移植性HL60人白血病重度联合免疫缺陷(SCID)小鼠模型。造模成功的SCID小鼠,随机分为实验组(A组:Ad5-Wnt5a-bMSCs+模型小鼠);对照组(B组:Ad5-GFP-bMSC+模型小鼠;C组:bMSC+模型小鼠;D组:模型小鼠)。RT-PCR检测外源性Wnt5a基因经骨髓腔移植入白血病小鼠模型后的定植情况。骨髓MSC及CFU-Mix培养、流式细胞仪、组织细胞化学及组织病理检测白血病小鼠移植前后各组外周血、骨髓、肝、脾、肾中的白血病细胞以及骨髓造血的变化。结果:成功建立急性髓性白血病模型;外源性Wnt5a基因转染人bMSCs,转染率达37.38%。外源性Wnt5a基因成功定植于受体骨髓中。Wnt5a基因修饰bMSCs移植后,与对照组比较,实验组SCID小鼠生存率明显提高,差异有统计学意义(P<0.05);外周血有核细胞及瘤细胞计数明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);CFU-Mix和MSC集落生长恢复较快,集落数明显增多,差异有统计学意义(P<0.05);小鼠骨髓、肺、肝、脾、肾CD33阳性率明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:Wnt5a基因修饰的bMSCs在体内能有效地抑制白血病细胞生长,支持骨髓造血。
- 沈亚莉徐酉华顾晓艳
- 关键词：HL60
