国家教育部博士点基金(20060533026)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 相关作者：魏为唐罗生屈超义曾杰西陈百华更多>>
- 相关机构：中南大学湘雅二医院西安市第四医院西安交通大学更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金湖南省科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- CD105特异性shRNA表达质粒的构建和筛选被引量：1
- 2008年
- 目的：使用Pgenesil-1质粒构建CD105RNA干扰重组体，在激光诱导BN大鼠脉络膜新生血管模型中，筛选高效抑制CD105基因表达的shRNA。方法：根据CD105基因序列信息设计了3条shRNA以及1条非特异阴性序列，利用含U6启动子的表达质粒Pgene-sil-1构建其RNA干扰重组体。采用视网膜下注射的方法使shRNA表达质粒转染大鼠视网膜和脉络膜，观察质粒所携带绿色荧光蛋白基因表达情况。根据不同的表达质粒对BN大鼠CNV模型2wk时CD105基因mRNA表达的抑制效果与空白对照及仅加转染试剂组比较分析，筛选有效的抑制序列。结果：转染后1d，在荧光显微镜下可见有明显的绿色荧光分布于实验眼视网膜全层，包括RPE层。2～3wk荧光强度比1wk增强，并持续表达4wk。空白对照眼无绿色荧光表达。构建了3条CD105shRNA和阳性对照Pgenesil—HK，基因测序证实目的序列成功插入质粒Pgenesil-1中。研究发现不同的质粒转染后对CD105在CNV高峰期的表达干预效果不同。Pgenesil-eng2和Pgenesil-eng3可明显抑制CNV模型在2wk时CD105mRNA的表达，抑制效率分别为（78±5）％（P〈0．01）；（52±3）％（P〈0．01）。转染Pgenesil-engl，Pgenesil-HK组及仅加转染试剂组与空白对照组相比CD105mRNA表达水平无明显变化。结论：在阳离子脂质体辅助下，Pgenesil-1质粒可以成功地将目的基因转染至大鼠视网膜各层次，且表达强度高，时间长于4wk。Pgenesil-eng2能明显抑制BN大鼠视网膜组织CD105mRNA的表达。
- 屈超义唐罗生曾杰西陈百华罗静魏为王文军
- 关键词：CD105质粒短发夹RNARNA干扰脉络膜新生血管
- CD105 shRNA对激光诱导的脉络膜新生血管的干预作用及其机制被引量：2
- 2011年
- 目的:观察CD105shRNA对激光诱导的大鼠脉络膜新生血管的抑制作用,并初步探讨其作用机制。方法:40只BN大鼠单眼采用半导体激光建立CNV模型。随机取20只大鼠于建模后1天使用Pgenesil-eng2转染大鼠视网膜和脉络膜作为实验组。在建模后第14天行FFA检查,观察实验组与对照组视网膜激光斑的渗漏情况。各取5只实验组和5只对照组大鼠,行脉络膜铺片,检测并比较脉络膜新生血管渗漏面积。另32只BN大鼠任取一眼建立CNV模型,其中任取20只大鼠于建模后次日进行Pgen-esil-eng2转染,作为实验组。12只建模眼作为对照组,未建模眼作为空白对照组。于基因转染后1w,2w,3w和4w各取5只实验组大鼠和3只对照组大鼠眼球,获取每个时间点实验组、对照组和空白对照组的脉络膜组织。检测各组每个时间点CD105和VEGF在mRNA水平的表达。结果:FFA显示光凝后第14天时,对照组的渗漏率为63.2%,实验组为24.6%。实验组的BN大鼠眼底渗漏点数较对照组少,渗漏强度较弱。两组间比较有显著性差异。脉络膜铺片结果显示:2周时对照组大鼠的CNV面积为(31.22±1.46)×103μm2,实验组大鼠的CNV渗漏面积为(14.46±0.82)×103μm2,两组间比较有显著性差异。RT-PCR结果显示:实验组VEGF mRNA及CD105 mRNA的表达变化规律与对照组相似,但各个时间点的表达量较对照组均明显下降,其中实验组VEGFmRNA于2w时的表达约为对照组的36.7%;实验组CD105 mRNA在第2w时约为对照组的21.68%。结论:通过沉默CD105基因的表达可以抑制大鼠CNV的生成,下调VEGF的表达可能是其作用机制之一。CD105基因有望成为CNV的基础研究热点和临床治疗的新靶点。
- 屈超义屈超义唐罗生曾杰西罗静陈百华
- 关键词：脉络膜新生血管CD105RNAI
