陕西省自然科学基金(2006C101)
- 作品数：3 被引量：29H指数：3
- 相关作者：梁东马锋旺侯长明李明军高静更多>>
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- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程更多>>
- 苹果果实L-半乳糖脱氢酶cDNA的克隆及其RNAi载体的构建被引量：3
- 2010年
- 【目的】从"皇家嘎拉"苹果幼果外果皮中克隆L-半乳糖脱氢酶(L-galactose dehydrogenase,GalDH)cDNA,进行生物信息学分析并构建其RNAi植物表达载体,为该基因功能鉴定奠定基础。【方法】应用同源序列克隆法克隆"皇家嘎拉"苹果GalDH基因,并进行生物信息学分析;利用噬菌体同源重组原理构建其RNAi植物表达载体pMDR-GalDH,并导入农杆菌EHA105。【结果】通过RT-PCR扩增得到1条约1.1 kb的条带,序列分析表明,该片段长为1 111 bp,包含一个975 bp的开放阅读框,可编码324个氨基酸残基,包含有醛酮还原酶的保守结构域和3个跨膜螺旋结构,其理论上的等电点pI为5.44,蛋白分子质量为34.99 ku;聚类分析显示,苹果GalDH核苷酸与已知其他植物GalDH核苷酸的相似性均在95%以上,判断其为苹果GalDH基因cDNA全长,命名为MdGal DH(GenBank登录号为:GQ131419)。另外,通过RT-PCR获得GalDH基因保守区段,成功构建了其RNAi植物表达载体pMDR-GalDH。【结论】从"皇家嘎拉"苹果中克隆了GalDHcDNA的编码区全长,并构建了该基因的RNAi植物表达载体。
- 高静尚增振王小华马锋旺梁东
- 关键词：苹果基因克隆
- 苹果果实GalDH和GalLDH基因的表达与AsA的关系被引量：10
- 2010年
- 【目的】进一步探明苹果果实是否具有抗坏血酸(AsA)合成的能力。【方法】从‘嘎拉’苹果果实中克隆AsA合成关键酶L-半乳糖脱氢酶(L-galactose dehydrogenase,GalDH)全长cDNA序列,检测它与另一合成酶L-半乳糖-1,4-内酯脱氢酶(L-galactono-1,4-lactone dehydrogenase,GalLDH)在苹果不同组织中的表达及酶活性与AsA含量的关系。【结果】克隆获得的苹果GalDH cDNA含有975bp的完整开放阅读框,编码一条分子量为34.97kD、含324个氨基酸残基的蛋白质,登录号为GQ131419。在叶片和苹果果实不同组织中,均能检测到GalDH和GalLDH基因mRNA表达和活性,叶片高于果实,幼果高于成熟果,果皮高于果肉。同时,苹果果皮中的AsA含量受光的调控,二者在阳面果皮的表达和活性明显高于阴面果皮,而阳、阴面果肉间无明显差异。不同组织中的AsA含量与GalDH和GalLDH活性均呈显著正相关性。【结论】进一步证明了苹果果实自身具有经L-半乳糖途径合成AsA的能力,且合成可能是苹果果实AsA形成的主要决定因子。
- 李明军高静马锋旺梁东侯长明
- 关键词：苹果果实抗坏血酸
- 猕猴桃果实发育过程中AsA代谢产物积累及相关酶活性的变化被引量：19
- 2009年
- 以美味猕猴桃品种‘秦美’果实为材料,研究了其生长发育过程中与AsA代谢循环系统相关的物质抗坏血酸(AsA)、谷胱甘肽(GSH)、草酸(OA)、酒石酸(TA)和过氧化氢(H2O2)的含量及相关酶活性的变化及其相互关系。结果表明:在果实生长发育过程中,花后AsA含量明显增加,花后30d达到最高后开始下降,花后75d后基本保持不变。就整个果实中总的AsA积累量而言,花后开始显著增加,到45d达到最大值后至成熟基本保持不变。这表明猕猴桃果实的AsA积累主要发生在幼果期。GSH随着果实发育在花后120d前其含量及积累量均有增加,但积累也主要发生在幼果期。OA含量的变化与H2O2含量和抗坏血酸过氧化物酶(APX)活性相似,均在花后开始显著下降,到花后30d后变化不大;而TA含量的变化趋势与AsA一致。抗坏血酸氧化酶(AO)、单脱氢抗坏血酸还原酶(MDHAR)和脱氢抗坏血酸还原酶(DHAR)的活性变化基本一致,均在花后开始显著升高,60d达到最大后迅速下降,在90d后至成熟基本保持不变。
- 侯长明李明军马锋旺梁东杜国荣
- 关键词：猕猴桃果实代谢物酶活性
