国家自然科学基金(39970374)
- 作品数：13 被引量：131H指数：8
- 相关作者：黄天华谢庆东王晓梅熊小芳陈桂兰更多>>
- 相关机构：汕头大学中南大学湘雅二医院汕头大学医学院第一附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 精子携带的HBV DNA在小鼠早期胚胎中的复制与表达被引量：16
- 2005年
- 背景与目的:研究乙型肝炎病毒(HepatitisBvirus,HBV)DNA在早期胚胎中能否复制与表达,探讨HBV经雄性生殖细胞垂直传递的可能性。材料与方法:成熟雄鼠麻醉后双侧睾丸注射经脂质体DOSPER包裹的HBV质粒,手术后雄鼠与超排雌鼠合笼交配,用荧光原位杂变(Fluorescenceinsituhybridization,FISH)分别检测单细胞胚和二细胞胚间期核中HBVDNA的存在与复制,用逆转录聚含酶链反应(Reversetranscriptase_polymerasechainreaction,RT_PCR)和免疫荧光方法检测HBV基因在二细胞胚胎中的表达。结果:在单细胞胚和二细胞胚间期核内发现HBVDNA阳性杂交信号,RT_PCR可以扩增出HBx基因的特异条带,免疫荧光也可见到HBsAg阳性信号。结论:HBVDNA进入雄性生殖细胞后,可以整合到宿主基因组内,通过自然受精随精子进入卵母细胞,并在早期胚胎中复制与表达。提示HBV有可能通过雄性生殖细胞进行垂直传递。
- 熊小芳黄天华谢庆东王晓梅陈桂兰
- 关键词：乙型肝炎病毒DNA早期胚胎
- 卵母细胞携带的HBV DNA在小鼠早期胚胎中的复制与表达被引量：25
- 2005年
- 背景与目的:研究卵母细胞携带的乙肝病毒(HepatitisBvirus,HBV)DNA能否在小鼠早期胚胎中复制与表达,为HBV经卵垂直传播提供科学证据。材料与方法:手术暴露昆明小鼠卵巢,将pBR322_HBV重组质粒DNA注射到昆明小鼠卵巢内,1个动情周期(4d)后进行超排卵并与正常雄性小鼠合笼,收集二细胞胚,用荧光原位杂交(Fluorescenceinsituhybridization,FISH)检测HBV在早期胚胎内的整合和复制;用逆转录聚含酶链反应(Reversetranscriptase_polymerasechainreaction,RT_PCR)和免疫荧光试验检测HBV基因在早期胚胎的表达。结果:FISH在小鼠二细胞胚细胞核上检测到HBVDNA阳性杂交信号,RT_PCR和免疫荧光试验在二细胞胚内检测到HBxmRNA和HBsAg。结论:HBVDNA进入雌性生殖细胞后,可以整合到宿主基因组内,通过自然受精随卵母细胞进入胚胎,并能在胚胎中复制与表达。提示HBV有可能通过雌性生殖细胞进行垂直传递。
- 陈桂兰黄天华谢庆东王晓梅熊小芳
- 关键词：乙型肝炎病毒DNA卵母细胞小鼠胚胎
- 人精子携带的HBs和HBc基因在早期胚胎细胞中的蛋白表达被引量：9
- 2008年
- 背景与目的:探讨由人精子带入受精卵中的HBs和HBc基因能否在早期胚胎细胞中进行蛋白表达。材料与方法:人精子经重组质粒pIRES2-EGFP-HBV转染后,与金黄地鼠去透明带卵母细胞离体受精,选择带绿色荧光的2-细胞胚,用免疫荧光技术检测HBs和HBc基因在胚胎细胞中的蛋白表达,用ELISA方法分别对HBsAg和HBcAg进行半定量和定性分析。结果:在带绿色荧光的2-细胞胚中免疫荧光检测可见清楚的HBsAg和HBcAg阳性信号;ELISA结果表明,单个2-细胞胚内HBsAg的量小于0.064ng/ml,对HBcAg的检测得到阳性结果。结论:人精子携带到卵内的HBV基因可在早期胚胎细胞中表达表面抗原和核心抗原。
- 张秋菊黄天华谢庆东谭小方刘戈飞陈德宇周小玲
- 关键词：HBV基因人精子胚胎细胞蛋白表达
- 17β-雌二醇对体外培养人成骨细胞CTGF和PAIP1基因表达的作用被引量：3
- 2005年
- 目的 观察结缔组织生长因子 (CTGF)和多聚腺苷酸结合蛋白相互作用蛋白 1(PAIP 1)mRNA在体外培养的人成骨细胞增殖分化不同阶段的表达 ,研究 17β- 雌二醇 (E2 )对成骨细胞CTGF和PAIP 1mRNA表达的作用 ,探讨雌激素对骨组织保护作用的新机制。方法 用改良的钙 钴法ALP染色 ,vanGieson法 1型胶原染色 ,0. 1%茜素红矿化结节染色 ,半定量RT- PCR检测成骨细胞碱性磷酸酶 (ALP)、骨钙素 (OC)和 1型胶原mRNA的表达 ,半定量RT- PCR和Northernblot方法检测成骨细胞CTGF和PAIP- 1mRNA表达。结果 半定量RT -PCR和组织化学染色的结果均表明 ,成骨细胞接种培养后 0～11d为细胞增殖阶段 ,7～ 15d为骨基质成熟阶段 ,15d后为骨基质矿化阶段 ;在成骨细胞培养的不同阶段 ,均检测到CTGF和PAIP- 1mRNA的表达 ,E2 可显著下调成骨细胞CTGFmRNA的表达 ,呈时间剂量依赖关系 (P <0 . 0 1) ,但对PAIP 1mRNA表达无明显作用。结论 E2 时间剂量依赖性下调成骨细胞CTGFmRNA的表达 ,但对PAIP 1mRNA表达无明显影响。
- 翟木绪彭依群隋国良王敏廖二元
- 关键词：CTGF人成骨细胞体外培养骨基质基因表达半定量RT-PCR
- 人卵母细胞染色体研究进展被引量：1
- 2000年
- 曾荔苹黄天华
- 关键词：遗传学
- HBV DNA重组质粒转染小鼠卵母细胞的研究被引量：18
- 2004年
- 背景与目的:乙型肝炎是危害人类健康的全球性疾病。为了探索乙肝病毒通过卵母细胞垂直传递的可能性,对HBV DNA重组质粒能否转染小鼠卵母细胞进行了研究。 材料与方法:将小鼠卵母细胞与pBR322-HBV DNA重组质粒进行共培养后,分别提取卵母细胞DNA及制备小鼠卵母细胞中期染色体。用PCR、Southern、斑点杂交及FISH技术证实HBV DNA能否转染小鼠卵母细胞。结果:PCR试验在受检样本中观察到HBV DNA阳性条带。Southern试验在受检PCR产物中观察到明显的阳性杂交信号。用每次实验的最后3次洗液进行斑点杂交未发现HBV DNA阳性信号,排除了PCR和Southern阳性结果来自洗液污染的可能性。荧光原位杂交在1000个卵母细胞中的36个中期相内发现HBV DNA杂交信号。结论:HBV DNA序列能够通过卵母细胞的透明带和细胞膜,进入卵母细胞内并整合到卵母细胞染色体上。此类卵母细胞与正常精子受精时,有可能作为载体将HBVDNA带进胚胎。
- 张清健黄天华谢庆东曾丽萍
- 关键词：HBV转染卵母细胞染色体
- 检测着床前胚胎非整倍性诱变的小鼠动物模型被引量：1
- 2002年
- 目的 :建立检测化学物对着床前胚胎是否具有非整倍诱变性的动物模型 ,探讨非整倍性诱变剂秋水仙素 (colchicine ,COL)对着床前胚胎细胞的影响。方法 :以昆明种小鼠作受试动物 ,分为空白对照、溶剂对照和秋水仙素 (0 .2 5mg/kg、0 .5mg/kg、0 .75mg/kg)处理组共 5个组 ,观察小鼠着床前胚胎丝裂指数和微核率的变化。结果 :① 0 .75mg/kg组的丝裂指数比空白对照显著增高 (P <0 .0 1) ;②微核率随秋水仙素剂量增加而升高 ,呈明显的剂量依赖关系 ,与空白对照组比较 ,差异有统计学显著性 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1)。结论 :①通过一系列预备试验 ,建立了一种有效地检测化学物非整倍诱变性的动物模型 ;②秋水仙素只有在其剂量达到一定的阈值时才能中止着床前胚胎细胞分裂 ;秋水仙素可诱导着床前胚胎细胞出现非整倍性 ,并呈剂量依赖关系。
- 帅祖兵黄天华曾荔苹黄建民孙希海
- 关键词：动物模型非整倍性秋水仙素染色体异常
- 乙型肝炎病毒垂直传播新途径的研究被引量：17
- 2003年
- 垂直传播是指患者的生殖细胞受病毒感染 ,在受精时由精子或卵细胞作为载体 ,将病毒基因带到胚胎进而使子代患病的一种新的、尚待证实的传播方式。近年来成为相关领域的研究热点。
- 张清健谢庆东黄天华
- 关键词：乙型肝炎病毒精子卵母细胞
- HBV基因经生殖细胞垂直传播与DNA甲基化研究进展被引量：3
- 2008年
- 乙肝病毒(HBV)基因可能通过生殖细胞垂直传播并在早期胚胎中复制与表达。DNA甲基化模式的改变是胚胎发育的关键,HBV感染可导致宿主细胞表观基因组修饰异常,诱发染色体不稳定,影响胚胎的正常发育并增加肿瘤发生的风险。本文中对近年HBV基因的垂直传播及其与DNA甲基化的关系的研究进行综述。
- 谭小方黄天华
- 关键词：HBVDNA甲基化
- 应用cDNA RDA联合cDNA阵列点杂交筛查差异表达基因的方法学分析被引量：1
- 2005年
- 目的探讨采用cDNA代表性差异分析法(representational difference analysis,RDA)联合cDNA阵列点杂交筛查差异表达基因的可行性及局限性。方法将17β雌二醇(E2)干预MG63细胞cDNA分别制备成检测和驱赶扩增子进行消减杂交作为整个cDNARDA的内部质控,以干预组扩增子、对照组扩增子和第4轮双向消减产物为模板,行内对照基因GAPDH的RTPCR进行消减效率分析,Southern杂交证实消减产物来源,快速Northern杂交证实消减产物确实呈差异表达;克隆到pGEMTeasy载体,转化JM109感受态细菌并铺Amp+XgalIPTG琼脂皿得到差异表达文库,随机挑取白色单菌落培养后点成尼龙阵列膜,分别与干预组和对照组扩增子及第4轮消减产物杂交,得到差异表达克隆用于后续研究。结果内部质控结果显示,第3轮消减杂交后,PCR未见差异性产物扩增;cDNARDA共得到3个雌二醇诱导表达上调条带和2个表达下调条带。Southern杂交结果显示在检测扩增子及第1～4轮差异产物中均可见阳性杂交信号,而驱赶扩增子中无杂交信号;快速Northern杂交证实干预组细胞总RNA的两处杂交信号均较对照组强;阵列膜同一克隆两个点对应的杂交信号呈高度相关一致性,共得到120个差异表达克隆(56个表达上调,64个表达下调)。结论cDNA代表性差异分析法联合cDNA阵列点杂交方法能有效快速高通量筛查E2诱导MG63差异表达基因。
- 彭依群邓小戈翟木绪隋国良王敏廖二元
- 关键词：CDNA阵列基因表达
