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猪痘病毒P35基因的原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立: 2013年; 为建立猪痘病毒(SWPV)血清学检测方法,根据SWPV的P35基因设计1对引物,从SWPV江西分离株(JX01)的细胞培养物中扩增到975bp的P35基因。将P35基因克隆到原核表达载体pGEX-4T-1,将其进行原核表达,经SDS-PAGE分析,表达P35重组蛋白约64 000。采用MagneGST蛋白纯化试剂盒纯化P35重组蛋白,以纯化的重组蛋白为检测抗原,建立了SWPV抗体间接ELISA检测方法,间接ELISA条件为:P35重组蛋白包被质量浓度为10mg/L,被检猪血清的稀释倍数为1∶80。以建立的间接ELISA方法对江西省47个猪场的471份猪血清进行了SWPV抗体的检测,结果猪血清抗体阳性率为35.7%,表明江西省部分猪场存在较普遍的SWPV感染。; 邓舜洲蒋新华冷闯朱芝秀何后军张文波; 关键词：P35基因原核表达间接ELISA

抗三肽囊素(Bursin)单克隆抗体的制备及其与三肽囊素分子结合特性分析: 2013年; 为研制抗三肽囊素(Bursin,KHG-NH2)单克隆抗体(MAb),本研究采用EDC法、SMCC法将Bursin分子赖氨酰(K)上的氨基与载体蛋白(BSA、OVA)定向偶联,分别制备Bursin人工抗原BSA-KHG-NH2、OVA-KHG-NH2和BSA-S-KHG-NH2。以BSA-KHG-NH2免疫BALB/c小鼠,应用杂交瘤技术,筛选得到二株能够稳定分泌抗Bursin MAb的杂交瘤细胞株,命名为4A11和7B2。这二株MAbs均能够与BSA-KHG-NH2、OVA-KHG-NH2和BSA-S-KHG-NH2反应,不能与BSA和OVA反应;MAbs与OVA-KHG-NH2的反应均能够被KHG-NH2、GKHG-NH2、HHHHHHKHG-NH2肽阻断,但不能被KHGK四肽阻断。结果表明,在Bursin分子甘氨酰胺(G)上的氨基未与其他氨基酸连接时,本实验制备的二株MAbs均能够与Bursin分子特异性结合。抗Bursin MAbs的制备,为进一步以MAb为靶分子筛选Bursin模拟表位、Bursin的生物活性关键基团等研究奠定了基础。; 邓舜洲朱芝秀徐昌满郑智刚邹柳邬向东戴益民谌南辉何后军张文波; 关键词：三肽囊素人工抗原单克隆抗体

抗三肽囊素单克隆抗体的制备: 2013年; 为研制抗三肽囊素(bursin,KHG-NH2)的单克隆抗体,本试验采用EDC法将三肽囊素分子赖氨酰(K)上的氨基与载体蛋白(BSA或OVA)定向偶联,分别制备三肽囊素免疫抗原(BSA-KHG-NH2)和检测抗原(OVA-KHG-NH2)。以BSAKHG-NH2免疫BALB/c小鼠,应用杂交瘤技术,筛选到18株能稳定分泌抗三肽囊素单克隆抗体的杂交瘤细胞株。这18株单克隆抗体与三肽囊素人工抗原的结合均能被三肽囊素、GKHG-NH2四肽阻断,但不能被KHGK四肽阻断,表明18株单抗与三肽囊素分子的结合具有高度特异性。以本研究制备的单抗2D2建立间接竞争ELISA方法,检测三肽囊素含量,检测下限为4ng/mL,线性范围为4～500ng/mL,加标检测回收率为85.0%～92.4%。; 邓舜洲郑智刚张文波谢笑芳邹柳邬向东谌南辉何后军朱芝秀; 关键词：三肽囊素人工抗原单克隆抗体间接竞争ELISA

定向偶联制备三肽囊素人工抗原及其多克隆抗体的研制被引量：1: 2013年; 为研制三肽囊素(Bursin,KHG-NH2,BS)抗体,采用EDC法将三肽囊素分子赖氨酰(K)上的氨基与载体蛋白(BSA、OVA)定向偶联,分别制备免疫抗原(BSA-KHG-NH2)和检测抗原(OVA-KHG-NH2)。以BSA-KHG-NH2免疫5只BALB/c小鼠,经4次免疫后,均产生了较高的抗体水平,其中5号小鼠血清抗体效价达1∶125 000。免疫小鼠血清多克隆抗体与检测抗原的结合不仅能被三肽囊素阻断,而且能被GKHG-NH2四肽特异性阻断,但不能被KHGK四肽阻断,表明本试验制备的三肽囊素人工抗原是由载体蛋白的羧基与三肽囊素分子赖氨酰(K)上的氨基定向偶联而成。利用小鼠多克隆抗体建立了三肽囊素间接竞争ELISA检测方法,线性范围为15～1 000 ng/mL,IC50为160 ng/mL。; 邓舜洲冷闯张文波许昌满胡杨邹柳邬向东谌南辉朱芝秀; 关键词：三肽囊素人工抗原多克隆抗体间接竞争ELISA

江西部分地区猪痘病毒PCR检测及P35基因的分析: 2013年; 为了解江西部分地区猪痘病毒(SWPV)的感染及流行情况,从江西省7个地区(市)共36个规模化猪场采集55份疑似猪痘病猪的皮肤痘痂组织,应用PCR方法对其进行猪痘病毒核酸检测,并随机挑选19个PCR产物进行序列测定和P35基因序列分析。结果表明,55份样品中,有44份样品检测为SWPV阳性,阳性率高达80%;所测的19条序列与SWPV参考毒株(登录号:AF410153.1)P35基因核苷酸同源性为96.3%～98.4%,推导的氨基酸同源性为87.5%～88.5%;各序列之间的核苷酸同源性为97.7%～100%,推导的氨基酸序列同源性为98.2%～100%。结果表明江西省部分地区的猪群中存在猪痘病毒感染。; 邓舜洲蒋新华冷闯朱芝秀邬向东戴益民张文波; 关键词：PCR检测 P35基因

母猪猪痘的诊断及病毒分离被引量：2: 2012年; 为确定江西某猪场部分母猪陆续发生皮肤痘斑的病原,根据猪痘病毒(AF410153.1)基因序列设计1对引物,采用PCR方法从发病母猪皮肤痘痂中扩增到猪痘病毒P35基因,与猪痘病毒参考毒株(AF410153.1)P35基因的核苷酸同源性为98%,说明该场母猪皮肤出现的痘斑是由猪痘病毒引起。利用PK15细胞从皮肤痘痂中分离到1株猪痘病毒,该毒株能在PK15细胞中连续传代,不产生严重的细胞病变(CPE)。采用间接ELISA方法对该场的10头母猪和8头肥猪血样进行猪痘病毒抗体检测,母猪和肥猪血清中猪痘病毒抗体阳性数分别为5头和4头,阳性率为50%。; 邓舜洲蒋新华冷闯余根莲段俊张文波; 关键词：母猪病毒分离

猪痘病毒江西株(SWPV-JX01株)的分离鉴定: 2013年; 本试验利用PK15细胞从江西省某猪场疑似猪痘的保育猪皮肤痘痂中分离到1株病毒,该分离毒株在PK15单层细胞上能连续盲传培养,不产生明显的细胞病变,通过PCR扩增猪痘病毒P35基因,扩增序列与猪痘病毒参考株(AF410153.1)P35基因的核苷酸同源性为97.9%,表明该分离病毒为猪痘病毒,并命名为SWPV-JX01。将SWPV-JX01株F5代细胞培养液经肌肉和皮下注射感染兔和小鼠,人工感染80h后,通过PCR检测不同组织的猪痘病毒P35基因,从兔的肾脏、脾脏、皮肤、心肌、淋巴结均能扩增到P35基因,且扩增序列与SWPV-JX01株同源性为100%。试验结果表明,SWPV-JX01株能在兔体内增殖,但不能在昆明鼠体内增殖。; 邓舜洲蒋新华冷闯张文波; 关键词：P35基因

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