国家自然科学基金(31160469)
- 作品数：9 被引量：20H指数：4
- 相关作者：王志钢王彦凤李聪马凯丽秦毅更多>>
- 相关机构：内蒙古大学赤峰市医院同济大学更多>>
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- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- Rho鸟嘌呤核苷酸交换因子家族及其在疾病发生中的作用被引量：6
- 2014年
- Rho GTP酶(Rho GTPase)家族在真核生物细胞中参与细胞骨架调节、基因转录、膜泡运输等过程,扮演着分子开关的角色。Rho型鸟嘌呤核苷酸交换因子(RhoGEF)是调节Rho GTPase活性的关键因子,在Rho GTPase信号调节、组织器官的生长发育及免疫应答中起着至关重要的作用。RhoGEF与肿瘤、发育及神经类疾病、病原微生物感染等也有密切关系,对其功能的深入了解有助于人们认识某些生理和病理现象的发生机制。
- 刘明涛杨军王志钢
- 关键词：RHO
- 转录激活因子Krox-20被引量：1
- 2013年
- 早期生长应答基因2(early growth response 2,EGR2/Krox-20)是血清诱导的立早基因(immediate early)家族成员之一,其编码的蛋白质有3个锌指结构,可以与特异DNA序列结合,起转录激活作用。Krox-20的表达受多个信号通路的调控,进而对动物脂肪细胞的分化及神经系统的发育产生影响。对转基因鼠的研究表明,Krox-20可以促进动物脂肪形成及毛发生长等生理过程相关基因的表达,从而改良性状。本文概述了Krox-20的研究现状。
- 马凯丽李聪刘增力王志钢
- 关键词：转录激活
- 内蒙古白绒山羊erk2基因的克隆及表达模式分析
- 2013年
- 旨在克隆内蒙古白绒山羊erk2基因cDNA并分析其基本表达模式。采用RT-PCR方法克隆白绒山羊erk2基因cDNA。通过在线软件Blast进行核酸序列分析,用SMART与Psite进行氨基酸序列分析。定量RT-PCR检测erk2基因在绒山羊组织中的表达特异性。免疫组化法检测绒山羊睾丸中erk2表达。克隆到的内蒙古白绒山羊erk2基因cDNA片段(GenBank Accession No.JX569765)长1 083 bp,包含了编码360个氨基酸残基的全长ORF,氨基酸序列与牛的ERK2(Bos Taurus BC133588.1)同源性为100%。SMART分析表明,ORF编码的蛋白包含了活化位点"TEY"及具有丝氨酸/苏氨酸激酶催化活性的S-TKc结构域。Psite分析表明,含2个N-糖基化位点、1个依赖于cAMP/cGMP的蛋白激酶磷酸化位点、3个蛋白激酶c磷酸化位点、5个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点、2个N-豆蔻酰化位点、2个异戊二烯基结合区(CAAX box)、7个微体羧基端靶向信号、2个蛋白激酶ATP结合区标记及一个丝/苏氨酸蛋白激酶活性区域标记。PSORT(k-NN prediction)程序预测其定位于细胞质中。定量RT-PCR分析显示erk2基因mRNA丰度在心脏、皮肤以及乳腺组织中mRNA丰度较高,脾、肾中的表达相对较低。在睾丸中检测到ERK2蛋白表达。
- 王彦凤吴曼琳王晓晶王婧李洋连梦瑶王志钢
- 关键词：ERK2基因克隆
- 蛋白质组学技术在细胞信号转导研究中的应用被引量：4
- 2013年
- 蛋白质组学技术提供了从蛋白质整体活动的角度来研究生命活动规律的手段,为研究细胞信号转导提供了新的方法和思路。应用于蛋白质分离鉴定中的双向电泳和液质联用等技术有效地促进了细胞信号转导研究中蛋白之间相互作用,分子伴侣功能的确定,信号通路的关联机制及细胞内信号转导的动态变化等方面的研究。综述近年来蛋白质组学技术在细胞信号转导研究中的应用情况及所取得的成就,并展望未来的发展前景。
- 王玮鹏苗芳芳武丹丹杨军王志钢
- 关键词：蛋白质组学细胞信号转导串话
- TSC1/TSC2二聚体及其在细胞生长调控中的作用被引量：4
- 2013年
- Tsc1和Tsc2是常染色体基因,在体内作为抑癌基因广泛表达,表达产物Hamartin/TSC1和Tuberin/TSC2直接相互作用形成异二聚体(TSC1/TSC2)而起作用。Tsc1和Tsc2突变可导致一种显性遗传性多系统并发症,即复合型结节性硬化症(tuberous sclerosis complex,TSC),具有很高的表现度和多样的并发表征,成人和小孩分别有1/8 000和1/6 000的几率受到TSC的影响。TSC1/TSC2能响应生长因子、胰岛素及各类环境胁迫信号,并发挥其靶向小G蛋白Rheb的GAP(GTPase active protein,GAP)活性,经由Rheb/mTORC1(mammalian target of rapamycin complex1)模式信号途径来调控细胞生长、分化及迁移并在胚胎发育及机体代谢过程中发挥重要的功能。综述Tsc1和Tsc2的分子遗传特性及其产物TSC1/TSC2在细胞生长调控中的作用。
- 秦毅王彦凤王志钢
- 关键词：细胞生长信号通路
- IGFs及其信号通路研究进展被引量：4
- 2013年
- 胰岛素样生长因子(insulin-like growth factors,IGFs)是一个多功能的生长因子家族,对细胞的生长、分化和凋亡起着重要的调节作用。概述近年来在IGFs的成分、结构功能、信号通路以及在疾病中的作用等方面的研究进展,以期为细胞生长调控、动物胚胎发育及肿瘤发生等方面的研究提供参考。
- 李聪马凯丽刘增力王志钢
- 关键词：IGFS信号通路细胞生长
- 内蒙古白绒山羊FGF5基因克隆及其靶向shRNA表达载体的构建和鉴定被引量：1
- 2014年
- 旨在构建内蒙古白绒山羊成纤维细胞生长因子Ⅴ(Fibroblast growth factor 5,FGF5)基因shRNA真核表达载体(pRNAT-shRNA)。以内蒙古白绒山羊胎儿成纤维细胞总RNA为模板,PCR扩增FGF5基因。设计并合成3条FGF5基因的靶向shRNA序列,分别插入pRNAT-U6.1/Neo载体中,构建重组干扰质粒载体pRNATshRNA1、pRNAT-shRNA2和pRNAT-shRNA3,用脂质体LipofectamineTM2000将各重组干扰质粒转染内蒙古白绒山羊胎儿成纤维细胞,Real time PCR检测FGF5mRNA表达量。结果表明:克隆获得813bp的目的基因,包含了完整的ORF,编码270个氨基酸。核苷酸序列及推导的氨基酸序列与绵羊FGF5基因(NM_001246263.1)及氨基酸序列同源性均为99%。FGF5基因shRNA重组质粒经测序鉴定证明构建成功。重组表达质粒转染绒山羊胎儿成纤维细胞48h后可见绿色荧光表达;pRNAT-shRNA1组、pRNAT-shRNA2组和pRNAT-shRNA3组FGF5的mRNA表达水平均低于干扰空载体对照组(P<0.01),pRNAT-shRNA2对FGF5的表达具有最佳的抑制效应。综上表明,成功构建pRNAT-U6.1/Neo-FGF5表达载体,为探讨FGF5在毛囊生长中的作用奠定了基础。
- 鲍文蕾其布日姚睿原郭志新朝格图王彦凤王志钢
- 关键词：短发夹RNA荧光定量PCR
- 内蒙古白绒山羊TSC2基因克隆与表达模式分析
- 2012年
- 旨在克隆内蒙古白绒山羊TSC2基因cDNA并分析其特性及基本表达模式。利用RT-PCR分段克隆TSC2基因cDNA片段并测序,将得到的cDNA各片段核苷酸序列拼接后获得绒山羊TSC2基因编码区全长序列(HQ684023)并进行生物信息学分析。半定量RT-PCR方法检测TSC2基因在不同组织中的表达特异性。结果表明内蒙古白绒山羊TSC2基因cDNA编码区核苷酸序列为5 184 bp,包含了编码1 727个氨基酸残基的全长ORF。核苷酸序列与牛、猪、马、大熊猫、犬、恒河猴、人、小鼠及大鼠的同源性分别为97%、90%、89%、88%、87%、87%、87%、86%和86%。NCBI CDD程序预测该基因编码的蛋白质有一个Tuberin结构域和一个Rap-GAP结构域;Psite程序分析有5个N糖基化位点、2个cAMP和cGMP依赖蛋白激酶磷酸化位点、16个蛋白激酶C磷酸化位点、25个酪蛋白激酶磷酸化位点。PSORT程序预测其定位于胞内体膜。TSC2基因在内蒙古白绒山羊的睾丸、脑、肝脏、肺、乳腺、脾和肾脏等组织中都有表达,mRNA丰度在睾丸中较高,乳腺中较低。
- 史偈君杨娇馥张涛秦毅谢鸿云李树裕郝喜燕王志钢
- 内蒙古白绒山羊翻译控制肿瘤蛋白(TCTP)基因克隆及组织表达特性分析被引量：1
- 2014年
- 旨在克隆内蒙古白绒山羊翻译控制肿瘤蛋白(Translationally controlled tumor protein,TCTP)基因并分析其表达模式。采用RT-PCR技术扩增TCTP基因编码区cDNA序列,将得到的基因cDNA序列及其编码的氨基酸序列进行生物信息学分析,利用定量RT-PCR方法检测TCTP基因在绒山羊不同组织中的表达特异性。获得的内蒙古白绒山羊TCTP基因编码区cDNA序列全长519 bp,包含了完整的ORF,编码172个氨基酸残基组成的蛋白质。核苷酸序列与绵羊、牛、猪、人、猴及大鼠的同源性在99%-95%之间。生物信息学分析表明,编码的蛋白质理论分子质量19.6 kD,等电点(pI)4.673,含有一个N端糖基化位点,一个蛋白激酶C磷酸化位点,3个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点,定位于细胞质中。定量RT-PCR方法检测表明,TCTP基因在绒山羊肾脏、肌肉、胰腺、肝脏、睾丸和脑组织中均有表达,其中在肝脏中的表达量较高,在脑中表达量较低。
- 杨立敏姚睿原郭志新朝格图其布日郑旭鲍文蕾王志钢
- 关键词：基因克隆
