国家现代农业产业技术体系建设项目(nycytx-45-12)
- 作品数：25 被引量：65H指数：4
- 相关作者：程安春汪铭书朱德康陈孝跃刘菲更多>>
- 相关机构：四川农业大学动物疫病与人类健康四川省重点实验室西南民族大学更多>>
- 发文基金：国家现代农业产业技术体系建设项目长江学者和创新团队发展计划四川省教育厅自然科学科研项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 不同剂量鸭瘟病毒gC基因疫苗在雏鸭体内的表达时相和分布规律被引量：3
- 2010年
- 本研究利用已建立的间接免疫组化方法检测鸭瘟病毒(DPV)gC基因疫苗(pcDNA-DPV-gC)免疫雏鸭后其表达蛋白在雏鸭体内的表达时相和分布规律,为DPV gC基因疫苗的进一步研究和应用提供基础数据。将不同剂量(50、100和200μg)DPV gC基因疫苗免疫3周龄天府肉鸭,于免疫后不同时间点(4h、12h、1d、3d、5d、7d、2周、4周、6周和10周)分别随机宰杀2只雏鸭,采集肝、脾、肺、肾、胰、脑、胸腺、哈氏腺、法氏囊、十二指肠、盲肠、直肠以及注射部位肌肉,应用间接免疫组化方法检测pcDNA-DPV-gC在雏鸭体内的表达时相和分布规律。结果显示:①各剂量免疫组第1天在肝、十二指肠、盲肠、直肠和注射部位肌肉检测到DPV gC蛋白,其中注射部位肌肉的阳性信号最强;第2周时各组织中的抗原表达量达到高峰,随着时间推移,阳性信号以不同速度逐渐衰减;第10周时各剂量免疫组仍在肝、脑、十二指肠、盲肠和直肠发现持续表达DPV gC蛋白;而胰在所有时间点均未检出阳性信号;②pcDNA-DPV-gC在不同组织的表达量也存在差异,肝、脾、法氏囊、脑、十二指肠、盲肠和直肠是DPV gC蛋白主要的分布器官;阳性信号主要出现在肠黏膜固有层细胞、脾白髓或红髓区的淋巴细胞以及脑皮质神经胶质细胞等部位;③根据各组织的阳性信号强度和持续时间的情况,得到pcDNA-DPV-gC在雏鸭各组织的总体表达规律:十二指肠、盲肠、直肠>肝脏>法氏囊>脾>脑>注射部位肌肉>胸腺>肺>哈氏腺>肾脏>胰脏;④不同剂量pcDNA-DPV-gC免疫雏鸭后各组织中抗原表达量和持续时间的总体规律依次为200μg组>100μg组>50μg组。结果表明不同剂量pcDNA-DPV-gC免疫后1d即可在雏鸭体内发现阳性信号,持续存在10周仍可检测到DPV gC蛋白,预示pcDNA-DPV-gC免疫期可持续较长时间。
- 沈福晓程安春汪铭书蒋金凤贾仁勇朱德康陈孝跃孙涛杨金龙
- 关键词：DPV
- 鸭肠炎病毒UL53截段基因的序列特性、原核表达与其抗原性检测被引量：2
- 2010年
- 【目的】通过选取DEV-UL53基因主要抗原域与进行DEV-UL53截段基因B细胞表位多参数预测相结合的策略,高效表达DEV-UL53截段基因,并通过Westernblot分析重组蛋白的免疫原性。【方法】通过生物信息学软件DNAStarProtean模块对UL53基因编码的gK蛋白进行主要抗原域预测,选取主要抗原域对应的UL53截段基因进行二级结构、蛋白质骨架柔性区域、表面可及性区域预测和在线预测该蛋白的亲水性及跨膜区,并对UL53截段基因进行克隆、亚克隆、原核表达与抗原性分析。【结果】UL53截段基因编码蛋白gK的B细胞表位最可能分布于Ala20—Leu25、Ser40—Met47、Leu68—Ile78、Val124—Phe128、Ile129—Tyr134、Asp176—Ile178,构建的阳性表达质粒转入BL21表达宿主菌经IPTG诱导外源基因获得了良好表达,经Westernblot分析表明该重组蛋白具有良好的抗原性。【结论】实现了UL53截段基因的高效表达,经Westernblot分析表明该重组蛋白具备良好的免疫原性,这为DEV-UL53基因及其编码的蛋白gK功能的深入研究、新型疫苗和诊断试剂的研制及开发等提供可用的试验材料。
- 张顺川向骏程安春汪铭书李丽娟李鑫
- 关键词：鸭肠炎病毒B细胞表位原核表达
- 小鹅瘟病毒VP3真核表达质粒与弱毒疫苗诱导鹅体免疫应答的比较被引量：6
- 2011年
- 【目的】比较小鹅瘟病毒(GPV)VP3基因疫苗(pcDNA-GPV-VP3)和弱毒疫苗免疫鹅体内的免疫应答,以期为进一步研究和阐明pcDNA-GPV-VP3免疫发生机理、免疫持续期等提供基础数据。【方法】将pcDNA-GPV-VP3和小鹅瘟弱毒疫苗分别免疫30日龄四川白鹅,用免疫组织化学方法检测免疫鹅体内GPV抗原的分布,用淋巴细胞增殖实验和间接ELISA分别检测免疫鹅的细胞免疫水平和血清抗体滴度,比较GPV基因疫苗与弱毒疫苗诱导鹅体免疫应答的能力。【结果】①弱毒疫苗组于免疫鹅的心、肝、脾、肺、肾、法氏囊、胸腺、哈氏腺、十二指肠、空肠、回肠、直肠、盲肠、胰腺、大脑及注射部位肌肉均中检测到GPV抗原;基因疫苗组于免疫鹅的心、十二指肠、空肠、回肠、直肠、盲肠及注射部位肌肉中检测到GPV抗原。②弱毒疫苗免疫雏鹅外周血T淋巴细胞14 d后对ConA的反应开始增强,35 d达到最高值后下降;基因疫苗免疫雏鹅外周血T淋巴细胞OD值先下降,14 d后开始上升并高于空白质粒对照鹅和PBS对照鹅,35 d时达最大值,以后又逐渐下降,第21-63天极显著(P<0.01)高于PBS对照鹅和空白质粒对照鹅,第21-63天时极显著(P<0.01)高于弱毒疫苗免疫鹅。③弱毒疫苗免疫鹅血清抗体第3天开始高于PBS对照鹅,第28天达到最大值后逐渐下降;基因疫苗免疫鹅血清体从第14天开始高于PBS对照组,第28天达最大值,第21-217天显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)高于PBS和空白质粒对照鹅;基因疫苗免疫鹅血清抗体除第28天极显著(P<0.01)高于GPV弱毒疫苗免疫鹅外,其余时间与弱毒疫苗免疫鹅差异不显著。【结论】pcDNA-GPV-VP3免疫雏鹅后能在免疫部位皮肤、心肌和各肠段中表达并能够诱导鹅体产生良好的细胞免疫和体液免疫,基因疫苗诱导鹅体产生免疫应答的能力优于弱毒疫苗,结果为阐述pcDNA-GPV-VP3的免疫机制和临床应用提供了数据资料。
- 朱德康黎敏车茜程安春汪铭书陈孝跃
- 关键词：小鹅瘟病毒基因疫苗
- 疱疹病毒US4基因及其编码蛋白的研究进展
- 2010年
- 通过对疱疹病毒US4基因及其编码蛋白的特点、基本功能以及US4基因编码蛋白与US3蛋白、US8蛋白的相互作用进行论述,为进一步开展对疱疹病毒US4基因的深入研究提供帮助。
- 杨晓圆程安春汪铭书
- 关键词：疱疹病毒编码蛋白
- 原位杂交检测鹅细小病毒VP3基因方法建立及肌注VP3基因疫苗在小鼠体内的动态分布被引量：1
- 2010年
- 将100μgpcDNA-GPV-VP3基因疫苗肌肉注射4周龄BALB/c小鼠,并以生理盐水和空载体质粒pcDNA3.1(+)为对照,建立并应用寡核苷酸探针原位杂交方法检测pcDNA-GPV-VP3在免疫小鼠各组织器官(心、肝、脾、肺、肾、肠、脑、免疫部位肌肉)的动态分布规律。结果表明,所建立的原位杂交方法具有特异性强、敏感性高、定位准确等特点,能检测约13pg的同源DNA。pcDNA-GPV-VP3基因疫苗在肌注后1h可分布到除脑以外的所有组织,肌注后3h脑呈阳性,21d除脑外的其他组织仍呈阳性,105d仍能在肌注部位检测到pcDNA-GPV-VP3;pcD-NA-GPV-VP3在小鼠各组织中持续时间为肌注部位>肝>脾、心>肾>肺、肠>脑。
- 李万奎程安春汪铭书朱德康罗启慧陈孝跃范波
- 关键词：原位杂交小鼠
- 介导鸭疫里默氏杆菌耐β-内酰胺类药物发生的研究被引量：4
- 2009年
- 采用平板二倍稀释法检测了临床分离的54株耐β-内酰胺类药的鸭疫里默氏杆菌(RA)的最低抑菌浓度(MIC值),进一步开展了耐药泵表型检测、β-内酰胺酶表型和基因型检测以及脉冲电泳指纹图谱和耐药泵相关性研究。结果显示,54株RA临床分离株对苯唑西林、青霉素、头孢噻肟和头孢吡肟的耐药率分别为100%、100%、66.7%和98.15%;耐药泵抑制剂氰氯苯腙可使53株RA对β-内酰胺类药物MIC值显著下降(P<0.01),MIC下降倍数最高达到2 048倍,耐药率依次下降为88.89%、46.30%、22.22%和38.89%;54株RA的β-内酰胺酶表型和基因型检测结果均为阴性;54株RA基因组经SmaⅠ酶切后以82%相似性系数为界,可分为13个脉冲电泳群,同一群的不同菌株可以认为是同一菌株不同克隆亚体或突变体。Ⅱ群、Ⅲ群、Ⅶ群、Ⅷ群、Ⅺ群和X群对头孢吡肟和Ⅴ群对头孢噻肟的耐药是由耐药泵介导的,而其他群的菌株则出现了其他机制。说明,耐药泵只是介导RA对β-内酰胺类药物耐药的主要因素之一。
- 仲崇岳程安春汪铭书朱德康张淑华罗启慧陈孝跃
- 关键词：鸭疫里默氏杆菌Β-内酰胺类药物耐药
- 疱疹病毒gI基因及其编码蛋白的研究进展被引量：1
- 2010年
- 李丽娟程安春汪铭书
- 关键词：疱疹病毒编码蛋白GI基因DNA病毒病毒种类哺乳类
- 天府肉鸭IFN-α基因的密码子使用法特征分析被引量：1
- 2011年
- 密码子简并性特征造成了不同物种密码子使用的偏好性不同,这对外源基因的表达强度有着较大的影响。运用软件对选取的16种IFN-α和天府肉鸭IFN-α基因(EU925650)进行了密码子偏爱性分析。通过进化树的构建结果显示天府肉鸭IFN-α,与北京鸭、河南肉鸭以及绍兴鸭IFN-α的亲缘关系最为接近。通过CAI,ENC,GC3S等数据分析进行了密码子偏爱性特征的分析。结果显示,天府肉鸭IFN-α系统保守基因,与禽类IFN-α基因的密码子使用类似。
- 刘菲高丽芹程安春汪铭书韩清林赵婷婷唐卫杰
- 关键词：IFN-Α密码子偏爱性
- 天府肉鹅IFN-α基因的克隆及生物信息学分析被引量：11
- 2010年
- 采用RT-PCR方法从天府肉鹅外周血单核细胞中扩增了IFN-α基因;并将上述扩增片段克隆到pMD18-T载体中,构建了重组质粒。用生物信息学软件及在线分析方法对IFN-α基因的核苷酸序列及其推导的氨基酸序列进行了分析,同时与13个物种的IFN-α基因进行了同源性比较。结果表明,成功地克隆了IFN-α基因,该基因与同类水禽(鸭、鹅)的IFN-α基因有90%以上的同源性,在进化树中位于同一分支,研究结果为开发鹅的干扰素制剂奠定了基础。
- 刘菲赵婷婷程安春汪铭书韩清林高丽芹唐卫杰
- 关键词：干扰素克隆生物信息学
- 抗鹅细小病毒卵黄IgG的制备及其间接ELISA检测方法的建立被引量：5
- 2011年
- 采用水稀释-辛酸-硫酸铵法粗提与DEAE50纤维素层析相结合的方法从免疫鹅细小病毒(GPV)的鹅卵内提取鹅卵黄IgG,通过核酸蛋白检测仪和SDS-PAGE测定IgG的浓度和纯度后,制备兔抗鹅IgG酶标抗体;建立了针对GPV的间接ELISA抗体检测方法,确定其最佳工作条件,并对该ELISA的特异性及重复性进行检测;应用该间接ELISA检测了GPV VP3基因疫苗的免疫效果。结果显示,获得的纯化鹅卵黄IgG浓度为10mg/mL,抗体纯度达到94.5%,兔抗鹅IgG的血清琼脂扩散效价约为1∶32;经筛选确定该ELISA的最佳工作条件为:最适抗原包被浓度为20μg/mL,最适血清稀释度为1∶100,酶标抗体的最佳工作浓度为1∶3 000。用建立的间接ELISA检测禽流感病毒、新城疫病毒、传染性支气管炎病毒、传染性法氏囊炎病毒、鸭肝炎病毒、鸭瘟病毒的阳性血清均为阴性,表明该方法特异性强、重复性好。经临床初步应用,能检出GPV VP3基因疫苗产生的抗体,在肌肉注射100μg与200μg基因疫苗的鹅血清中,IgG均从第14天开始上升,并分别在第35、21天达到最大值。表明本试验制备的兔抗鹅IgG酶标抗体具有较好的应用价值。
- 刘菲唐卫杰程安春汪铭书赵婷婷韩清林高丽芹
- 关键词：纯化间接ELISA
