国家科技重大专项(2008ZX08009-3)
- 作品数：5 被引量：5H指数：1
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- 平邑甜茶MhVPE基因ihpRNA干扰载体的构建及转拟南芥验证
- 2011年
- 根据平邑甜茶液泡加工酶(vacuolar processing enzyme)基因MhVPE(GenBank登录号为FJ891065)cDNA序列,设计两对含有酶切位点的特异性引物F1/F2和R1/R2,以pMD-MhVPE质粒为模板,分别克隆了用于构建干扰载体的正反义片段pMD-F和pMD-R。将该正反义片段分别插入表达载体pART27的相应位置,构建成了含有内含子发夹结构的ihpRNA表达载体pART-RNAi-MhVPE。通过农杆菌介导,用花序浸泡法转化拟南芥进行验证,经过抗性筛选和PCR检测,得到17株转基因阳性植株;半定量RT-PCR结果显示所获得的转基因拟南芥植株中AtVPE同源基因的表达量明显降低,表明该干扰载体能够有效抑制VPE基因的表达,MhVPE基因的ihpRNA干扰载体构建成功,为进一步鉴定该基因的功能奠定了基础。
- 冉昆杨洪强孙晓莉沈伟姜倩倩李强刘智新
- 关键词：平邑甜茶RNA干扰拟南芥
- 平邑甜茶延长根和吸收根抗凋亡基因的表达差异及其对2,4-D的响应
- 2013年
- 以3年生平邑甜茶[Malus hupehensis(Pamp)Rehd.var.pinyiensis Jiang]盆栽树为材料,通过 2,4-D水溶液灌根处理,探讨了新根(延长根和吸收根)细胞死亡及其抗凋亡基因的表达特征。结果表明,在60mg·L-12,4-D处理后的70d内,新根细胞死亡量和类 caspase3/7(半胱天冬酶)活性先上升后下降,ATP含量和根系活力的变化与之相反。平邑甜茶抗凋亡基因 MhBAG、MhBI-1 与 MhHSP70 在新根中均受 2,4-D 诱导,随着2,4-D处理时间的延长,MhBAG基因的表达水平先下降后逐渐升高,MhBI-1与MhHSP70则先升高后下降。在2,4-D处理下,吸收根细胞死亡量与根系活力的变化幅度明显高于延长根,吸收根MhBI-1与MhHSP70表达量的早期升高幅度大于延长根,表明吸收根细胞对2,4-D 的敏感性高于延长根;但在基因表达高峰时,延长根抗凋亡基因表达量的升高倍数明显高于吸收根,暗示延长根比吸收根有更强的抗凋亡能力。
- 樊树雷杨洪强冉昆沈伟张玮玮
- 关键词：平邑甜茶2,4-D吸收根抗凋亡基因细胞死亡
- 平邑甜茶MhWRKY15基因cDNA克隆及其生物信息学分析被引量：3
- 2011年
- 以平邑甜茶为材料,通过RT-PCR和RACE技术,获得平邑甜茶WRKY15基因的全长cDNA,命名为Mh-WRKY15(GenBank登陆号:GU576874)。生物信息学分析表明,该基因全长1 091 bp,包含810 bp的完整开放读码框,编码269个氨基酸,属于WRKY类转录因子的第II组,为WRKY15家族成员;其编码蛋白为可溶性蛋白,分子式为C1263H1941N365O425S12,相对分子量为29 423.2 ku,理论等电点为5.30;含有一个WRKY保守结构域,定位于细胞核,存在磷酸化、N糖基化和O糖基化位点,其二级结构主要以无规则卷曲为主。
- 孙晓莉冉昆杨洪强李强姜倩倩
- 关键词：平邑甜茶CDNA生物信息学
- 平邑甜茶MhHSP70的特征及其对镉和渗透胁迫的反应被引量：1
- 2012年
- 以平邑甜茶为试材,通过RT-PCR及RACE技术,获得了一个热激蛋白基因HSP70的全长cDNA序列,命名为MhHSP70,GenBank登录号为HQ876864;该基因全长2307bp,序列高度保守,编码650个氨基酸,与苹果、番茄和烟草亲缘关系最近。在根系和叶片中,热激蛋白基因MhHSP70的表达均受镉和渗透胁迫(非热胁迫)诱导,并且随着硫酸镉和氯化钠处理浓度的升高以及聚乙二醇(PEG)处理时间的延长,MhHSP70的表达量逐渐增强。
- 沈伟杨洪强李强冉昆姜倩倩孙晓莉张玮玮隋静
- 关键词：平邑甜茶热激蛋白镉胁迫
- 锡金海棠子叶再生体系的建立被引量：1
- 2012年
- 锡金海棠[Malus sikkimensis(Wenz.)Koehne]是我国稀有植物和优良苹果砧木种质资源。本研究探讨了影响锡金海棠离体再生的条件,建立了锡金海棠子叶高效离体再生体系。结果表明,子叶再生体系的最佳诱导培养基为SC+0.1mg·L-1NAA+2.0mg·L-1TDZ,最佳分化培养基为SC+0.1mg·L-1NAA+1.5mg·L-1TDZ,最佳继代增殖培养基为SC+2.0mg·L-16-BA+0.2mg·L-1NAA,最佳生根培养基为1/2MS+1.0mg·L-1IBA。炼苗后,移入珍珠岩、花生壳与草炭(1:1:1)的基质中,20d移栽成活率高达90%。
- 吴瑞刚杨洪强冉昆张玮玮
- 关键词：离体再生外植体
