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碱性木聚糖酶产生菌的筛选、XynG1-3基因克隆表达及酶学性质研究被引量：7: 2012年; 从造纸厂周边碱性土壤中分离、筛选到一株产碱性木聚糖酶的细菌G1-3,根据形态和生理、生化特性并结合16SrDNA序列分析,鉴定菌株G1-3为短小芽孢杆菌,命名为Bacillus pumilusG1-3。利用克隆表达载体pET-22b(+),实现了Bacillus pumilusG1-3碱性木聚糖酶基因XynG1-3在E.coliBL21中的表达。经氨基酸序列分析,木聚糖酶XynG1-3属于GH11家族的小分子木聚糖酶。重组木聚糖酶XynG1-3经镍离子亲和层析一步纯化后,获得凝胶电泳条带单一的蛋白样品,经SDS-PAGE检测其分子量为24 kD。对酶学性质进行分析,重组酶XynG1-3最适作用温度为55℃,最适作用pH为8.0;该酶在60℃保温1 h,残余酶活保持为原来的56%,pH作用范围较广,在pH10.0下保存1 h,残余酶活仍能保持75%,为耐碱性木聚糖酶。; 郑宏臣刘逸寒刘晓光韩杨王建玲路福平; 关键词：短小芽孢杆菌碱性木聚糖酶酶学性质

毕赤酵母表面展示磷脂酶D高密度发酵优化被引量：3: 2012年; 利用基因工程手段构建获得的一株细胞表面展示表达磷脂酶D的毕赤酵母工程菌株GS115/pKFS-pld,通过摇瓶单因素筛选进行发酵条件优化,确定了最佳发酵条件为:诱导产酶阶段28℃,初始pH6.5,甲醇浓度1.5%,装液量为30 mL/250 mL,250 r/min摇床培养144 h。在此优化条件下菌体量为19.6 g/L,酶活达17.8×10-7kat/g,分别是是优化前的1.38及1.44倍。同时进行了5 L规模发酵罐分批补料培养,结果表明15 mL(/L.h)速率流加甘油补料培养基6 h后,采用溶氧恒定流加法流加甲醇,诱导132 h后,菌体量及PLD活力分别达到67.4 g/L及27.3×10-7kat/g,是摇瓶发酵水平的3.44倍及1.53倍。; 刘逸寒薄嘉鑫乔婧张超王建玲路福平; 关键词：磷脂酶D 磷脂酰丝氨酸发酵优化酶活力

产耐高温木聚糖酶菌株的筛选及其产酶条件优化被引量：4: 2013年; 从牛粪堆肥中分离、筛选到1株产耐高温木聚糖酶的细菌NF1,经形态特征和16S rDNA序列分析,鉴定菌株NF1为类芽孢杆菌,命名为类芽孢杆菌(Paenibacillus sp.)NF1。采用响应面法对该菌种产木聚糖酶的发酵条件进行优化。首先利用Plackett Burman试验设计筛选出影响产酶量的3个主要因素,即牛肉膏浓度、NaCl浓度和初始pH值。在此基础上使用Design-Expert软件进行Box-Behnken试验设计,通过响应面分析得出菌株NF1发酵产酶的最佳条件为玉米芯20g/L、牛肉膏28.2g/L、K2HPO45g/L、MgSO40.5g/L、NaCl 7.1g/L、初始pH值为6.9;装液量40mL、转速160r/min、接种量2%、温度28℃。经过验证试验,优化后粗酶液酶活达到160.6IU/mL,与响应面预测结果一致,较优化前木聚糖酶酶活提高了51.4倍。; 孙明哲郑宏臣孙君社裴海生刘逸寒张璟韩杨路福平; 关键词：菌种筛选类芽孢杆菌发酵优化

枯草芽孢杆菌工程菌株产普鲁兰酶发酵条件的优化被引量：9: 2012年; 利用基因工程手段获得的产长野芽孢杆菌普鲁兰酶的枯草芽孢杆菌基因工程菌株WB600/pWB-pulB,通过单因素筛选及正交试验进行发酵培养基优化,得到产酶最佳配方为玉米淀粉3.0%,酵母膏2.0%,CaCl20.03%,Na2HPO41.0%。同时对重组菌株摇瓶条件下液体发酵的主要影响因素初始pH、接种量、装液量、转速、温度等进行探讨,确定了产酶最佳培养条件为,以3%接种量接种于优化后培养基,初始pH7.0,装液量30 mL/250 mL,37℃,200 r/min摇床培养36 h。在此优化条件下,普鲁兰酶活力达到20.16 U/mL,是之前研究结果(10.94 U/mL)的1.84倍。; 刘逸寒薄嘉鑫王亚品张志萌王建玲路福平; 关键词：普鲁兰酶发酵条件优化酶活力

长野芽孢杆菌普鲁兰酶基因在枯草芽孢杆菌中的表达及酶学性质研究被引量：4: 2012年; 根据NCBI上报道的基因序列设计引物,以长野芽孢杆菌(Bacillus naganoensis)ATCC53909的染色体DNA为模板,PCR扩增普鲁兰酶编码基因pulB。将此基因与表达载体pWB980连接构建重组质粒pWB-pulB,并转化枯草芽孢杆菌WB600。SDS-PAGE结果显示,在100 kD处有特异性条带,经测定重组转化子粗酶液酶活力达10.94 U/mL。酶学性质分析表明,其最适反应温度为60℃,最适反应pH为5.0,且在温度30-60℃及pH4.0-6.0范围内稳定,适合淀粉加工行业的应用。; 张艳路福平刘逸寒李玉张春峰; 关键词：普鲁兰酶酶学性质

产耐酸性α-淀粉酶菌株的分离、鉴定、酶学特性研究及发酵培养基的优化被引量：7: 2014年; 从富含淀粉的土壤中筛选获得多株产耐酸性α-淀粉酶的菌株,将酶活最高的一株经16S rDNA鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),命名为Bacillus subtilis A-7,其所产的耐酸性α-淀粉酶最适温度和pH分别为60℃和4.5。通过单因素筛选及正交试验优化发酵培养基,得到最佳配方为可溶性淀粉2%,蛋白胨2%,CaCl20.07%,Na2HPO40.8%,在此条件下耐酸性α-淀粉酶活力达到221 U/mL,是未优化条件下的2.3倍。; 王建玲陈志鑫刘逸寒路福平; 关键词：枯草芽孢杆菌最适温度最适PH

产青霉素酶枯草芽孢杆菌发酵条件的优化被引量：3: 2011年; 目的:对一株产青霉素酶的重组枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis DB104/pWB-pemp)的摇瓶发酵条件进行优化。方法:利用单因素实验及正交实验等方法考查重组菌摇瓶发酵条件,研究不同浓度的碳源、氮源、金属离子、磷酸盐及不同pH、接种量、装液量和温度等条件对产青霉素酶的影响。结果:重组菌株摇瓶最适发酵条件为pH 7.0、接种量3%、装液量14%、发酵温度37℃,培养基成分为2%蔗糖、3.5%酵母膏、0.1mmol/L镁离子、0.4%磷酸盐。结论:最优条件下,发酵36h,产酶活力达到2227.8U/mL,为先前研究结果(1 580 U/mL)的1.41倍,为重组菌的大规模发酵生产奠定了基础。; 黄琳刘逸寒王春霞王建玲杜连祥路福平; 关键词：青霉素酶产酶条件摇瓶培养酶活力

枯草芽孢杆菌工程菌产耐酸性高温α-淀粉酶发酵条件的优化被引量：5: 2012年; 利用基因工程手段获得的产耐酸性高温α-淀粉酶基因枯草芽孢杆菌工程菌株pWB-amyd/WB600,通过单因素筛选及正交实验进行发酵培养基优化,得到的最佳配方为(g/L):玉米粉20,蛋白胨30,CaCl20.5,Na2HPO48.同时对实验室摇瓶条件下液体发酵的主要影响因素初始pH、接种量、装液量、转速、温度等进行探讨,确定了最佳培养条件:37,℃、pH 6.5、200,r/min摇床培养36,h,接种量为2%,装液量为30,mL/250,mL.在此优化条件下,耐酸性高温α-淀粉酶活力达到3,980,U/mL,是未优化条件下的2.1倍.; 胡博刘逸寒徐艳静薄嘉鑫薄嘉鑫; 关键词：培养基优化正交实验发酵条件优化

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国家自然科学基金(31101219)