“十一五”国家科技支撑计划(2006BAD06A04)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 相关作者：高玉龙祁小乐孙芬芬王笑梅高宏雷更多>>
- 相关机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所东北林业大学黑龙江省农业科学院更多>>
- 发文基金：“十一五”国家科技支撑计划国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 鸡法氏囊B淋巴细胞中与鸡传染性法氏囊病病毒VP2相互作用蛋白筛选被引量：2
- 2011年
- 为了获得鸡法氏囊B淋巴细胞中与鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2相互作用的蛋白质,利用酵母双杂交系统,用IBDV VP2蛋白为诱饵蛋白,筛选鸡法氏囊B淋巴细胞cDNA表达文库。将表达文库质粒转化含IBDV VP2诱饵质粒的酵母感受态细胞,检测报告基因在相应的营养缺陷型培养基(SD/-Leu/-Trp/-His)上表达情况,进一步经β-半乳糖苷酶报告基因检测,筛选到16个阳性克隆。提取阳性克隆质粒,经测序分析获得5个原鸡基因序列,分别是:线粒体DNA、蛋白质O位N-乙酰葡萄糖胺糖基化转移酶、肿瘤蛋白p53结合蛋白、微管解聚相关蛋白质和软骨蛋白硫酸GalNAcT-2。Co-IP试验进一步证实VP2蛋白能够与肿瘤蛋白p53结合蛋白、蛋白质O位N-乙酰葡萄糖胺糖基化转移酶和软骨蛋白硫酸蛋白相互作用。为研究IBDV与宿主细胞相互作用以及细胞受体筛选奠定了基础。
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- 关键词：传染性法氏囊病病毒B淋巴细胞CDNA表达文库
- 鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因的融合表达及兔抗血清的制备被引量：1
- 2009年
- 以鸡传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)Gt株基因组RNA为模板,通过RT-PCR扩增VP2基因,经EcoR I/SalI酶双酶切处理后与经相同酶切处理的pET30a原核表达载体连接,将酶切、PCR及序列鉴定正确的阳性重组子转化E.coliDE3菌,经IPTG诱导,表达的VP2蛋白通过Ni-NTA树脂纯化后,免疫新西兰白兔,制备兔抗血清,并对其进行间接ELISA、IFA和Western blot分析。SDS-PAGE分析表明,在IPTG诱导下成功表达了约为50kDa的His-VP2融合蛋白;间接ELISA检测制备的兔抗血清效价在1:25 600以上;IFA及Western-blot分析结果表明,其可特异性结合真核表达的VP2蛋白以及IBDV全病毒。研究结果提示,兔抗VP2血清可用于VP2蛋白及病毒的检测,为进一步研究IBDV分子生物学功能提供了物质基础。
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- 关键词：鸡传染性法氏囊病病毒VP2
