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重组毕氏酵母产中性纤维素酶条件的优化被引量：1: 2012年; 通过对6个重组毕氏酵母转化子的产酶试验,筛选出一个优良转化子。在摇瓶条件下对该重组毕氏酵母的发酵过程进行了研究,得到适宜的培养条件为:250 mL三角瓶装液量30 mL,培养基起始pH4.8,此后不加控制,接种量10%,发酵过程中每隔24h补加1%的甲醇对产酶有明显的促进作用,中性纤维素酶活力可达1 144U/mL。研究结果表明:重组毕氏酵母中性纤维素酶的适宜催化条件为:50℃、pH 6.0;Zn2+和Mg2+对该酶有激活作用,Fe2+、Fe3+和Cu2+对该酶有抑制作用。牛仔服水洗试验结果显示:重组毕氏酵母中性纤维素酶可以明显降低靛蓝对牛仔服的反染作用,其工业应用前景良好。; 江守坤顾斌涛夏黎明; 关键词：毕氏酵母中性纤维素酶基因重组牛仔布生物整理

重组酵母发酵半纤维素水解液生产酒精的研究被引量：10: 2010年; 玉米秸秆中的半纤维素主要由五碳糖组成,普通的酿酒酵母不能发酵五碳糖。今利用基因重组酵母Sacchromyces cerevisiae ZU-10发酵玉米秸秆半纤维素水解液生产酒精,针对半纤维素水解液中的主要发酵抑制物,研究了硫酸根离子、乙酸、糠醛对重组酵母生长的影响,发现S.cerevisiae ZU-10细胞对SO42·,乙酸和糠醛的耐受浓度分别为5g·L·1、0.25g·L·1和0.08g·L·1。对玉米秸秆半纤维素的水解工艺进行了比较研究,结果表明,玉米秸秆采用1%H2SO4(固液比1:10),在95℃水解12h,其中的半纤维素水解率达到93%,发酵抑制物相对较少。半纤维素水解液经石灰中和、真空浓缩及离子交换处理后,可用于酒精发酵。半纤维素水解液的糖浓度与浓缩倍数及发酵抑制物浓度成正相关,对于重组酵母S.cerevisiae ZU-10,半纤维素水解液的适宜糖浓度为80g·L·1。在此浓度下,接种量1.2g·L·1(细胞干重计)、30℃、厌氧发酵96h,酒精浓度为31.05g·L·1,水解液中的木糖利用率达到95.85%。该研究结果对于促进半纤维素资源的转化利用,加速秸秆酒精的产业化进程具有重要意义。; 赵晶夏黎明; 关键词：酒精发酵木糖半纤维素

厌氧真菌内切-β-葡聚糖酶基因在里氏木霉中的重组与表达被引量：11: 2011年; 里氏木霉(Trichoderm reesei)是重要的纤维素酶生产菌,为了显著提高其产酶性能,拟利用分子生物学技术构建高产的基因工程菌株。将前期优化后的瘤胃厌氧真菌内切-β-葡聚糖酶基因af 2置于里氏木霉纤维二糖水解酶I强启动子Pcbh1(及其信号肽)和终止子Tcbh1之间,并进一步以pCAMBIA1300为载体骨架,构建成含潮霉素B抗性标记的重组质粒pCB-hF。以里氏木霉ZU-02为宿主,采用优化的根瘤农杆菌介导转化技术将重组质粒转入经萌发处理的分生孢子。以潮霉素B为抗性标记初筛到318个阳性转化子,进一步接种到以羧甲基纤维素钠为唯一碳源的筛选培养基上,复筛到8株生长较快的转化子。以重组转化子基因组DNA为模板,分别进行PCR检测,均可获得目的基因片段,表明厌氧真菌内切-β-葡聚糖酶基因已整合到里氏木霉的染色体DNA上。在摇瓶条件下,分别对8个重组转化子进行产酶试验,获得3个高产内切-β-葡聚糖酶活力的转化子。发酵培养96 h时,发酵液的内切-β-葡聚糖酶活力最高可达到126.3 IU?mL-1左右,是出发菌株的4.23倍。研究结果表明:厌氧真菌内切-β-葡聚糖酶基因已在里氏木霉细胞中得到高效表达并实现了胞外分泌。; 金欣夏黎明; 关键词：厌氧真菌基因克隆里氏木霉

碳源对里氏木霉纤维素酶诱导合成的影响被引量：12: 2010年; 纤维素酶是诱导酶,理想的碳源应该既能提供菌种生长所需能量,又能诱导纤维素酶基因的高效表达。试验中分别以葡萄糖经过转糖苷反应后制备的复合糖(F)、微晶纤维素(C)以及上述两者(1∶2)的混合物(M)为里氏木霉(Trichoderma Reesei ZU-04)的碳源,在液态深层发酵条件下生产纤维素酶。对纤维素酶酶系组成的研究结果表明:F碳源诱导作用下,内切型-β-葡聚糖酶(Cx酶)和外切型-β-葡聚糖酶(C1酶)的活力在发酵初期上升很快,通常在40h左右达到峰值,此后活力呈下降趋势,而β-葡萄糖苷酶(CB酶)的活力始终较低;C碳源诱导作用下,Cx、C1和CB酶的活力上升在发酵初期比较缓慢,但持续时间长、后劲足;在采用M碳源的情况下,Cx、C1酶的初始合成速度较快,且2种酶的活力在较长时间内保持上升趋势。与F和C碳源相比,Cx酶活力分别提高了78.2%和51.9%,C1酶活力分别提高了20.6%和6.5%,但对CB酶的生产而言,M碳源略低于C碳源,F碳源最差。进一步研究了碳源对纤维素酶总活力(滤纸酶活力)的影响,结果显示:在采用F碳源的条件下,发酵6h即可检测到滤纸酶活力,在36h达到峰值1.6IU/mL,此后活力不再上升;在采用C碳源时,发酵初期酶活力上升缓慢,产酶周期较长,滤纸酶活力在144h达到峰值3.96IU/mL;而M碳源可结合两者优势,使纤维素酶活力和产率都能达到较高的水平。研究结果对于定向调控纤维素酶的酶系组成,提高纤维素酶的生产效率具有重要意义。; 吕雄赵晶夏黎明; 关键词：纤维素酶微晶纤维素

利用葡萄糖转苷酶制备纤维素酶可溶性诱导物的研究被引量：7: 2009年; 在纤维素酶生产中,常用的诱导物纤维素是不溶性的固体高分子化合物,存在着传质阻力大、不易于流加培养、产酶效率低等问题。今以葡萄糖为原料,利用葡萄糖转苷酶的催化作用,定向合成纤维素酶的可溶性诱导物。经高效液相色谱分析,发现转糖苷产物中含有纤维素酶的强诱导物槐糖。在50℃下,转糖苷反应的适宜葡萄糖浓度为300～500mg·mL-1,pH3～4.5,反应100h,产物中槐糖含量可达40mg·mL-1。将葡萄糖经转苷酶作用后的复合物用于纤维素酶的生产,与直接采用葡萄糖相比,产酶时间提前25h,滤纸酶活力提高14倍。该研究结果为酶法制备纤维素酶的高效可溶性诱导物探明了一条新途径,对于提高纤维素酶的生产效率、加速其工业化应用具有重要意义。; 黄振艳夏黎明; 关键词：纤维素酶

重组毕赤酵母发酵产纤维二糖酶被引量：2: 2011年; 采用含黑曲霉(Aspergillus niger)纤维二糖酶基因的重组毕赤酵母发酵生产纤维二糖酶,对重组酵母的基因表达调控及发酵性能进行了研究。摇瓶试验结果表明:产酶培养基中甘油和玉米浆粉的适宜浓度分别为2.0%和3.0%,培养基最适pH值为6.0。甲醇作为碳源和基因表达的诱导物,对重组毕赤酵母的发酵结果有重要影响。发酵过程中每24h加入体积分数为1.0%的甲醇、质量浓度为0.2%的甘油及质量浓度为0.3%的玉米浆粉,有利于重组毕赤酵母持续合成纤维二糖酶。摇瓶发酵8d,发酵液中纤维二糖酶活力可达到9.01 IU/mL。; 冀彤王冰冰夏黎明; 关键词：重组毕赤酵母纤维二糖酶发酵

中性内切-β-葡聚糖酶基因在里氏木霉中的重组与表达被引量：9: 2013年; 中性内切-β-葡聚糖酶在棉织物生物整理方面具有重要的应用价值,研究首先从特异腐质霉(Humicola insolens)菌株中克隆到一个中性内切-β-葡聚糖酶基因,将该基因置于里氏木霉(Trichoderma reesei)纤维二糖水解酶I强启动子Pcbh1(及其信号肽)和终止子Tcbh1之间,并以pCAMBIA1300为载体骨架构建重组质粒pCB-PHT。采用根瘤农杆菌介导转化技术将重组质粒pCB-PHT导入里氏木霉的分生孢子中,进一步筛选得到八个重组里氏木霉转化子。摇瓶发酵培养72 h时,发酵液的中性内切-β-葡聚糖酶活力最高可达到98.8 IU mL 1左右,是出发菌株的5.1倍。研究成功地实现了外源中性内切-β-葡聚糖酶在丝状真菌里氏木霉中的重组与胞外表达,有关研究结果将在牛仔布水洗工业中发挥出重要作用。; 顾斌涛江守坤夏黎明; 关键词：里氏木霉基因重组牛仔布生物整理

木糖还原酶基因的克隆及其在酿酒酵母中的定向整合被引量：4: 2013年; 酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)是重要的乙醇生产菌株,但因缺少戊糖代谢途径而不能利用木糖,为了改良工业酿酒酵母利用半纤维素发酵生产乙醇的性能,利用分子生物学技术构建能够利用木糖的基因工程酵母。选取酿酒酵母染色体的rDNA重复序列作为外源基因整合位点,依此构建多拷贝染色体整合型载体pUG-LR。采用融合表达策略扩增得到含有酿酒酵母乙醇脱氢酶启动子PADH和树干毕赤酵母木糖还原酶基因xyl1的融合序列,并将其插入pUG-LR载体中,构建成含遗传霉素G418抗性标记的同源重组质粒pUG-LR-XYL1。以工业酿酒酵母ZU-01为宿主,通过优化后的电穿孔法将重组质粒导入经缓冲液处理的酵母细胞,30℃培养。通过提高YEPX复筛培养基G418浓度,得到10株生长较快的优良性状转化子。在不含G418的YEPX培养基上传代8次以上,以转化子基因组DNA为模板,进行PCR检测,均可获得目的基因片段。研究结果表明:木糖还原酶基因xyl1已定向整合于ZU-01染色体DNA上并稳定遗传,为后续构建工业酿酒酵母的木糖代谢通路、利用木糖产酒精的重组菌株奠定了基础。; 高岚夏黎明; 关键词：木糖还原酶基因克隆

基于能值分析的中国进出口贸易生态利益评价被引量：3: 2010年; 我国对外贸易一直保持高额的贸易顺差,但是在巨额贸易顺差背后可能隐藏着巨大的生态利益流失。本文借助生态系统价值评价方法——能值分析方法,全面、客观、综合地计算了我国进出口贸易中的能值流量,分析了中美、中欧、中日贸易中的生态要素转移,并利用一系列能值综合指标对比分析了中国同主要贸易伙伴开展进出口贸易的生态利益得失。; 余燕春王婧; 关键词：能值分析生态利益

固定化基因重组酵母发酵木糖产乙醇被引量：11: 2008年; 采用海藻酸钙凝胶包埋法固定基因重组酵母Sacchromyces cerevisiae ZU-10,研究了固定化细胞的发酵特性.结果表明,在30℃、pH 5.5下发酵80 g/L木糖,游离细胞的发酵周期为96 h,乙醇得率为0.37,细胞固定化后发酵周期缩短至60 h,乙醇得率提高到0.40.利用固定化细胞重复分批发酵8次,木糖利用率均在95%以上,平均乙醇得率为0.39.与游离细胞相比,固定化细胞对乙酸的耐受性明显增强,当质量浓度低于1.2 g/L时乙酸对木糖发酵的影响很小.利用固定化重组酵母发酵玉米秸秆水解液中的葡萄糖和木糖,36 h内65.0 g/L葡萄糖和27.0g/L木糖被完全利用,生成36.9 g/L乙醇,对葡萄糖和木糖的乙醇得率为0.40.; 陈明王周芳夏黎明; 关键词：木糖乙醇发酵固定化细胞水解液

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国家高技术研究发展计划(2007AA05Z401)

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