吉林省科技发展计划基金(20100220)
- 作品数：4 被引量：0H指数：0
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- 牛边缘无浆体膜表面蛋白5的原核表达及其免疫原性
- 2011年
- 目的原核表达牛边缘无浆体(Anaplasma marginale)膜表面蛋白5(Membrane surface protein 5,MSP5),并分析其免疫原性。方法 pQE-MSP5/BL21(DE3)阳性重组菌经IPTG诱导表达,表达产物经MagneHisTM蛋白纯化系统纯化后,进行SDS-PAGE分析。将纯化的MSP5蛋白免疫小鼠,以生理盐水免疫作为阴性对照,ELISA法检测血清抗体水平,淋巴细胞增殖试验检测脾淋巴细胞增殖水平,流式细胞术检测T淋巴细胞亚群分类。结果表达的重组MSP5蛋白相对分子质量约为23 000;纯化蛋白的纯度为83.2%,浓度为1.087 mg/ml;纯化的MSP5蛋白可刺激小鼠产生特异性抗体;免疫组小鼠淋巴细胞增殖水平明显高于阴性对照组(P<0.05);免疫组小鼠CD3+、CD4+和CD4+/CD8+比例高于阴性对照组,CD8+比例低于阴性对照组。结论已成功表达并纯化了牛边缘无浆体MSP5,其免疫原性良好,为制备单克隆抗体及建立准确可靠的诊断方法奠定了基础。
- 倪宏波姜海芳周玉龙王春仁宫大庆钱爱东
- 关键词：边缘无浆体原核细胞基因表达免疫原性
- 检测牛边缘无浆体抗体的竞争抑制ELISA方法的建立
- 2011年
- 为建立检测牛边缘无浆体(Anaplasma marginale)抗体的方法,本研究以牛A.marginale膜表面重组MSP5蛋白作为包被抗原,抗MSP5单克隆抗体(MAb)作为竞争抗体,建立一种用于检测牛A.marginale抗体的重组MSP5蛋白竞争抑制ELISA(CI-ELISA)方法。经优化确定CI-ELISA的最佳反应条件为:抗原包被浓度为2μg/孔,封闭液为2%脱脂乳,MAb的稀释度为1∶400,酶标二抗的稀释度为1∶1000,阴性和阳性血清临界值分别为33%和40%;该方法具有良好的特异性和重复性;2348份临床血清样品的检测结果表明,217份为阳性,阳性率为9.2%,与IDEXX A.marginale抗体检测试剂盒的阳性符合率为95.3%,阴性符合率为100%。本实验建立的ELISA方法具有较高的特异性和重复性,可用于流行病学调查研究。
- 倪宏波王冰姜海芳周玉龙王春仁宫大庆钱爱东
- 关键词：流行病学调查
- 边缘无浆体膜表面蛋白1a(MSP1a)的克隆与原核表达
- 2010年
- 为了给牛边缘无浆体的诊断和基因工程疫苗的研制提供理论依据,试验以牛边缘无浆体基因组DNA为模板,采用PCR技术对其膜表面蛋白1a(MSP1a)基因进行扩增,将扩增产物转入克隆载体和表达载体中进行克隆和表达,用重组表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),利用免疫印迹分析鉴定MSP1a基因表达产物的免疫活性。结果表明:MSP1a基因PCR扩增产物与GenBank上的PR1株MSP1a基因的序列同源性达98.3%,编码氨基酸的同源性为98.7%;将该基因亚克隆入原核表达载体pET-28a中,构建了重组原核表达载体;将其转化到DH5α大肠杆菌中,用IPTG进行诱导表达,实现了融合表达,表达产物的分子质量为49 ku;经SDS-PAGE电泳和免疫印迹检测,MSP1a基因在表达载体中得到高效表达,且表达产物具有免疫活性。
- 姜海芳倪宏波王春仁宫大庆邵光喜周玉龙崔玉东
- 关键词：边缘无浆体克隆原核表达
- 奶牛边缘无浆体MSP2的原核表达及抗原性鉴定
- 2012年
- 为克隆和原核表达牛边缘无浆体(A.marginale)膜表面蛋白2(MSP2),并分析其免疫原性,本研究通过PCR方法扩增A.marginale的MSP2基因,将其连接到pGEX 6p-1载体中,转化感受态细胞BL21(DE3),经IPTG诱导表达,进行SDS-PAGE分析,将纯化的MSP2重组蛋白免疫小鼠。结果表明表达并纯化了A.marginaleMSP2,其免疫原性良好,为制备单克隆抗体及亚单位疫苗的研制奠定了基础。
- 邵光喜马国林衣菲郎秀艳蒋慧婷王春仁刘娇田秋丰倪宏波钱爱东
- 关键词：边缘无浆体原核表达免疫原性
