广东省自然科学基金(7001553)
- 作品数：6 被引量：43H指数：4
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- 重组金黄色葡萄球菌杀白细胞毒素对人肺泡巨噬细胞细胞因子表达的影响被引量：8
- 2009年
- 目的应用体外培养人肺泡巨噬细胞（AM），观察重组金黄色葡萄球菌杀白细胞毒素（rPVL）对AM的CD。白细胞介素（IL）-10及肿瘤坏死因子（TNF）-α表达的影响。方法从患者BALF中分离纯化AM，根据作用时间及rPVL浓度不同分为T0N0组[T为时间（h），N为毒素浓度（nmol／L）]、T6N0组、T6N10组、T6N100组、T24N0组、T24N10组、T24N100组共7组。半定量逆转录PCR法测定AM的CD14mRNA水平，双抗夹心ELISA法测定AM培养液上清IL-10及TNF-α浓度。结果rPVL作用后AM的CD14mRNA下降，降低幅度随时间延长和毒素浓度升高而增加。3组空白对照组间差异无统计学意义（F=1．708，P〉0．05）。LN10、T6N100组均较T6N0组低（t=4．132、6．818，均P〈0．001）；T24N10、T24N100组均较T24N0组低（t=7．401、11．415，均P〈0．001），表明毒素作用后CD14表达量降低。T24N10组低于T6N10组、T24N100组低于T6N100组（t=4．692、6．019，均P〈0．001），表明毒素作用后CD14mRNA随时间延长而降低。T6N100组低于T6N10组、T24N100组低于T24N10组（t=2．686、4．014，均P〈0．05），表明CD14mRNA随毒素浓度升高而降低。IL-10浓度T24N10、T24N100组均高于T24N0组（t=4．036、3．941，均P〈0．01），表明IL-10的释放随毒素浓度增加和作用时间延长而增加。TNF-α浓度T24N10组低于T24N0组，而T24N100组高于LNn组（t=2．824、8．468，均P〈0．01），表明低浓度毒素可抑制TNF-α释放而高浓度毒素诱导其大量释放。结论rPVL致AM的CD14表达下降并致AM促炎和抗炎因子表达异常，可致AM功能缺陷引起宿主免疫抑制，不利于炎性细胞对病原菌的清除，可能是杀白细胞毒素金黄色葡萄球菌感染，尤其是重症坏死性肺炎病死率高的重要原因之一。
- 吴本权石云锋黄静刘慧张文先周凤丽张天托
- 关键词：巨噬细胞CD14细胞因子
- 社区获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌肺炎死亡相关危险因素分析被引量：7
- 2010年
- 目的 揭示社区获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（CA-MRSA）肺炎临床特征及死亡相关危险因素.方法 系统检索1995年1月至2009年12月发表的中英文文献,对比分析CA-MRSA肺炎生存和死亡者的临床特征,对相关参数进行Logistic回归分析以探讨与死亡的关系.按照是否应用抑制杀白细胞素（PVL）治疗措施分层,对患者进行Kaplan-Meier生存分析.结果 52篇文献中报道了74例病例,病死率为41.1%;从出现症状入院至死亡的平均时间为（6.1±11.0） d;58.9%的生存者平均住院时间（28.6±29.1） d.Logistic回归分析显示,流感样症状（P=0.04）、咯血（P〈0.01）、白细胞减少（P〈0.01）与死亡相关,应用抑制PVL的抗生素克林霉素或利奈唑胺与生存相关（P〈0.01）;Kaplan-Meier生存分析显示,使用抑制PVL作为分层因素具有统计学意义（χ^2=21.59,P〈0.01）.结论 流感样症状、咯血和白细胞减少是CA-MRSA肺炎死亡的相关危险因素;使用抑制PVL治疗措施可能是CA-MRSA肺炎的优选抗菌治疗方案.
- 李洪涛张天托黄静朱家馨周宇麒吴本权
- 关键词：金黄色葡萄球菌杀白细胞素社区获得性肺炎
- 炎性细胞因子在细菌感染中的作用被引量：24
- 2009年
- 炎症是最基本的病理变化之一,包括感染性与非感染性炎症。在炎症发生发展过程中,细胞因子起着重要的作用,主要表现为促炎和抗炎细胞因子之间相互促进相互制约作用,前者主要有肿瘤坏死因子-α、干扰素-γ、白细胞介素(IL)-2、IL-6及IL-17、IL-23等,后者主要包括IL-4、IL-10、IL-13、转化生长因子-β等,两者的动态变化决定炎症的发展及结局。研究炎症尤其是感染性炎症中的炎性细胞因子对可能取得彻底治愈炎性疾病的突破有重要意义。本文对在细菌感染中起重要作用的主要促炎与抗炎细胞因子作一综述。
- 石云峰吴本权
- 关键词：炎症细胞因子细菌感染
- 金葡菌P-V杀白细胞毒素的原核表达及对人多形核白细胞的杀伤效应(英文)被引量：4
- 2008年
- 目的:通过基因工程方法获得重组的杀白细胞毒素,为深入研究其致病机制打下基础。方法:利用PCR方法从产杀白细胞毒素金葡菌临床分离株的基因组DNA中克隆PVL-S和PVL-F基因序列,分别将其克隆到载体pET22b中,构建重组pET22b-LuKS和pET22b-LuKF原核表达载体,转化感受态大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,异丙基硫代β-D半乳糖苷(sopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达,将其可溶性表达经镍离子螯合亲和层析纯化后,通过对外周血粒细胞和多形核白细胞的刺激反应鉴定其活性。结果:以PCR方法获得PVL-S和PVL-F基因片段,与克隆载体连接后测序与文献报道的基本一致,成功构建了pET22b-LuKS和pET22b-LuKF原核表达质粒,并高效诱导表达出相对分子质量约34 kD的S蛋白及相对分子质量约35 kD的F蛋白。重组蛋白(rPVS,rPVF)在37℃经IPTG诱导时均以包涵体形式存在,而30℃时部分出现可溶性表达,部分为包涵体。将上清可溶性重组蛋白作用于外周血粒细胞,可导致粒细胞出现凋亡,部分出现坏死。结论:成功构建了表达载体pET22b-LuKS和pET22b-LuKF,对其编码的S片段和F片段进行了原核表达和鉴定,高效表达了杀白细胞毒素的S和F两类蛋白,为进一步对其致病机制和免疫原性的研究奠定基础。
- 黄静张天托吴本权朱家馨刘慧周宇麒
- 关键词：杀白细胞毒素原核表达中性白细胞
- 重组金黄葡萄球菌杀白细胞毒素体外对人肺泡巨噬细胞Toll样受体2表达的影响被引量：3
- 2009年
- 金黄葡萄球菌杀白细胞毒素（panton-valentine leukocidin，PVL）是致病性金黄葡萄球菌产生的一种特异作用于中性粒细胞与单核／巨噬细胞的外毒素，是坏死性肺炎的重要毒力因子。我们用荧光定量PCR法观察重组PVL（rPVL）对人肺泡巨噬细胞Toll样受体（TLR）2表达的影响。
- 吴本权石云锋黄静刘慧张文先周凤丽张天托
- 关键词：TOLL样受体2金黄葡萄球菌肺泡巨噬细胞荧光定量PCR法体外
- Pam3CSK4对血小板活化及其TLR2表达的影响
- 2010年
- 目的 探讨Toll样受体2（TLR2）在血小板激活及免疫方面的作用.方法 取健康人（n=5）全血6 ml,以密度梯度离心法制备洗涤血小板.用1、5、10μg/ml的TLR2激动剂Pam3CSK4（一种合成的细菌脂蛋白）刺激人洗涤血小板,然后测定血小板聚集率,血小板表面蛋白CD62p和TLR2表达的变化.结果 Pam3CSK4以浓度0、1、5和10μg/ml激活血小板：聚集率增加分别为（12.83±2.43）%、（28.32±5.67）%、（52.56±8.54）%、（76.24±11.23）%,P〈0.01;血小板表面CD62p表达量增加分别为（11.20±1.67）%、（18.45±2.66）%、（22.45±2.04）%、（29.53±4.08）%,P〈0.01.Pam3CSK4在1μg/ml时TLR2表达为（16.85±6.10）%,与对照组（10.81±3.99）%相比差异无统计学意义（P〉0.05）,在5 μg/ml、10μg/ml时TLR2表达量分别为（21.15±9.90）%和（22.52±9.26）%,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）.结论 细菌脂蛋白Pam3CSK4通过激活TLR2引起血小板聚集、活化,是血小板参与抑制革兰阳性细菌感染的免疫应答机制之一.
- 吴本权支明俊刘慧周宇麒张天托
- 关键词：血小板TOLL样受体2血小板聚集血小板激活CD62P
