广东省自然科学基金(04300199)
- 作品数：9 被引量：43H指数：3
- 相关作者：徐如祥杨志军姜晓丹魏玲柯以铨更多>>
- 相关机构：南方医科大学第四军医大学第四军医大学唐都医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 神经干细胞标记及活体示踪的研究现状及前景被引量：19
- 2005年
- 许多研究都表明神经干细胞具有再生和修复中枢神经系统神经损伤的能力。采用有效的无创伤性技术来监测和追踪干细胞移植治疗的效果将对其在动物实验研究和临床应用方面起到促进作用。通过用细胞标记试剂标记干细胞,可以活体显示移植至脑内的干细胞并进而揭示干细胞在脑内的迁移情况。活体追踪神经干细胞的迁移将有助于我们选择最优的移植策略和了解干细胞促进神经功能恢复的机理。本文对目前在神经干细胞移植领域能够用于干细胞迁移追踪的标记物质种类和应用前景进行回顾和展望。
- 杨志军徐如祥
- 关键词：神经干细胞活体脑内动物实验研究细胞标记
- 菲立磁标记大鼠骨髓基质细胞及自体移植后磁共振示踪的研究被引量：23
- 2005年
- 目的初步探索利用菲立磁(Feridex)和转染试剂体外磁性标记大鼠骨髓基质细胞这一方法的可行性,为将来临床上应用磁共振成像(MRI)追踪标记细胞奠定基础。方法无菌条件下行股骨取骨髓,梯度密度离心法分离获取大鼠骨髓基质细胞,使用“Feridex-多聚赖氨酸复合物(FE-PLL)”标记骨髓基质细胞,采用普鲁士蓝染色、电镜和台盼蓝排除实验等方法鉴定FE-PLL标记大鼠骨髓基质细胞的效率和细胞的活力,并对FE-PLL标记骨髓基质细胞的增殖和分化能力进行评估。将FE-PLL标记和未标记后的骨髓基质细胞分别移植入大鼠左右侧尾壳核脑内,细胞移植后1、4、7周应用MRI对脑内移植的细胞进行活体示踪,最后利用组织切片进行普鲁士蓝染色。结果菲立磁可以高效率地标记骨髓基质细胞,标记效率在99%左右。普鲁士蓝染色显示FE-PLL标记骨髓基质细胞胞质内出现细小的蓝色铁颗粒。电镜结果显示FE-PLL标记的骨髓基质细胞胞质内含有许多包裹铁颗粒的囊泡。与正常未标记的细胞相比较,FE-PLL标记对骨髓基质细胞的活力、增殖和分化等能力没有明显的影像。MRI检查发现脑内移植的标记细胞在磁共振上呈明显的低信号改变,未标记细胞侧脑组织无明显的低信号改变,与组织学切片结果基本相一致。结论以上结果提示菲立磁可以用来体外标记骨髓基质细胞。
- 杨志军徐如祥姜晓丹柯以铨魏黎雷皓温志波曹容段丽饶志仁魏玲蔡颖谦杜谋选邹雨汐
- 关键词：骨髓基质细胞脑内移植自体移植胞质
- 菲立磁标记兔骨髓基质源神经干细胞自体移植入纹状体后的形态学观察被引量：4
- 2005年
- 目的将体外标记的骨髓基质源神经干细胞经单细胞悬液微移植后观察其在兔纹状体的存活、迁移、分化和整合情况,为细胞移植治疗疾病奠定基础。方法分离兔骨髓基质细胞,利用神经干细胞培养基、白血病抑止因子和碱性成纤维母细胞生长因子进行细胞扩增并诱导成骨髓基质源神经干细胞,再经菲立磁和活细胞荧光染料PKH67标记后,采用微移植的方法,通过脑立体定位仪,用微玻璃针将干细胞分别植入兔脑纹状体内。存活1、4、8周后处死动物,组织切片,利用光镜和电镜观察标记细胞在脑内的形态学情况。结果菲立磁标记的兔骨髓基质源神经干细胞经微移植后可在兔脑内纹状体区域存活,移植的干细胞可向周围的脑实质内迁移和整合,迁移细胞沿特定的纹状体结构分布。少量菲立磁标记的干细胞可以分化成神经元。结论骨髓基质源神经干细胞移植后,可在脑实质内存活、迁移、分化和整合,这种细胞可能成为中枢神经系统自体移植的细胞来源。
- 杨志军徐如祥姜晓丹柯以铨魏玲曹容段丽饶志仁蔡颖谦杜谋选邹雨汐
- 关键词：纹状体骨髓基质自体移植脑实质纤维母细胞
- 大鼠海马CA3区内神经元和星形胶质细胞的空间形态(英文)
- 2005年
- 背景:星形胶质细胞能够积极参与脑内的神经活动,与神经元之间存在双向的空间信息联系。目的:观察大鼠海马CA3区神经元锥体细胞及其周围星形胶质细胞的分布,重塑两者之间的三维构象。设计:以实验动物为研究对象,随机对照的实验研究。单位:一所大学医院的神经外科、一所军医大学的神经科学研究所。材料:实验2001-10/2003-06在南方医科大学珠江医院神经外科和解放军第四军医大学全军神经科学研究所完成。出生30d的SD雄性大鼠由解放军第四军医大学实验动物中心提供。方法:采用脑片膜片钳全细胞记录、细胞内荧光黄染色、免疫荧光和激光共聚焦显微镜相结合的技术。主要观察指标:主要观察神经元的放电类型及其周围星形胶质细胞的空间分布。结果:根据放电形式的不同主要把海马锥体细胞分为两类:位相型和非位相型放电神经元。激光共聚焦显微镜下单层光学图像和三维立体重建显示许多星形胶质细胞紧密围绕在细胞内荧光黄染色锥体细胞周围并形成紧密接触。两类神经元与星形胶质细胞形成接触的部位存在区别。非位相型放电神经元的树突和胞体周围都有许多星形胶质细胞形成接触的部位,而位相型放电神经元则仅位于树突。结论:不同特性海马神经元周围星形胶质细胞的空间分布可能存在差异。
- 杨志军徐如祥饶志仁魏玲王晓斌姜晓丹
- 关键词：海马星形细胞膜片钳术
- 迷走神经阻断对哮喘诱导延髓内脏带及下丘脑室旁核和视上核Fos蛋白表达的影响
- 2005年
- 目的:研究支气管哮喘状态下迷走神经向脑传递免疫信息的作用。方法:实验于2003-10/2004-06在解放军第一军医大学珠江医院神经外科进行。清洁级雄性豚鼠20只单纯随机分为4组:假手术+生理盐水;手术+生理盐水;假手术+卵蛋白;手术+卵蛋白。建立豚鼠哮喘模型,在致敏状态下切断或假切断颈部双侧迷走神经,术后2周用卵蛋白经呼吸道激发豚鼠哮喘发作,2h后处死动物,用免疫组织化学ABC法观察延髓内脏带(MVZ)、下丘脑室旁核(PVN)和视上核(SON)Fos蛋白的表达。结果:假手术和手术组豚鼠给予生理盐水刺激后,仅在MVZ背内侧部、中间网状带和腹外侧部、SON和PVN内发现少数浅染的Fos蛋白阳性细胞。假手术组豚鼠卵蛋白激发后,MVZ,PVN和SON内可发现大量Fos蛋白表达,分别为(498.00±134.28),(99.27±15.32),(305.10±84.68)个,手术组豚鼠卵蛋白激发后上述核团内的Fos蛋白表达量则明显减少,分别为(239.78±48.28),(62.36±19.02),(127.14±57.01)个,两者比较差异有显著性意义(P<0.05)。结论:迷走神经在支气管哮喘免疫应答中,可能是传递呼吸道免疫信息的重要途径之一。
- 杨志军徐如祥魏玲姜晓丹蔡颖谦杜谋选
- 关键词：迷走神经切断术延髓下丘脑室旁核视上核
- 大鼠延髓内脏带与下丘脑室旁核、视上核往返投射通路参与高渗调节反应的研究(英文)被引量：1
- 2006年
- 目的探讨延髓内脏带(MVZ)与下丘脑室旁核(PVN)和视上核(SON)之间是否存在往返渗透压投射通路。方法通过给予大鼠饮用3%氯化钠的方法制作高渗刺激模型,并用WGA-HRP逆行追踪、抗Fos、抗酪氨酸羟化酶(TH)或加压素(VP)及胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫组织化学相结合的四重标记方法,观察MVZ、PVN和SON中WGA-HRP、Fos、TH、VP和GFAP阳性分布及表达状况。结果高渗刺激后MVZ、PVN和SON内Fos阳性细胞明显增多;GFAP阳性结构也明显增多,其分布与Fos阳性细胞分布基本一致,表现为胞体肥大、突起粗长。星形胶质细胞(AST)紧密包绕在神经元周围形成神经元-AST复合体(N-ASC)。结论神经元和AST以N-ASC的形式共同参与渗透压调节反应,体内存在MVZ和SON或PVN之间往返的渗透压调节通路。
- 王娆彭苹杨志军徐如祥饶志仁段丽姜晓丹
- 关键词：星形胶质细胞渗透压胶质纤维酸性蛋白
- 利用菲立磁细胞内标记恒河猴骨髓基质细胞的初步实验被引量：3
- 2006年
- 目的:探索利用菲立磁和转染试剂体外磁性标记恒河猴骨髓基质细胞的可行性,为临床上应用磁共振成像追踪标记细胞奠定基础。方法:实验于2004-04/2005-05在南方医科大学珠江医院全军神经医学研究所完成。纳入健康恒河猴3只,无菌条件下取骨髓,梯度密度离心法分离获取恒河猴骨髓基质细胞,使用“菲立磁-多聚赖氨酸复合物”标记骨髓基质细胞,采用普鲁士兰染色、电镜和锥虫蓝排除实验等方法鉴定菲立磁-多聚赖氨酸复合物标记恒河猴骨髓基质细胞的效率和细胞的活力,并对菲立磁-多聚赖氨酸复合物标记骨髓基质细胞的增殖和分化能力进行评估。结果:①菲立磁可以高效率地标记骨髓基质细胞,标记效率在99%左右。②普鲁士蓝染色显示菲立磁-多聚赖氨酸复合物标记骨髓基质细胞胞质内出现细小的蓝色铁颗粒。③电镜结果显示菲立磁-多聚赖氨酸复合物标记的骨髓基质细胞胞质内含有许多包裹铁颗粒的囊泡。④与正常未标记的细胞相比较,菲立磁-多聚赖氨酸复合物标记对骨髓基质细胞的活力、增殖和分化等能力没有明显的影响。结论:菲立磁可以用来体外标记恒河猴骨髓基质细胞。
- 柯以铨杨志军彭苹徐如祥姜晓丹魏玲王松青蔡颖谦杜谋选邹雨汐
- 关键词：干细胞骨髓细胞培养
- 超顺磁性氧化铁颗粒用于分子成像和神经细胞成像的研究进展被引量：2
- 2006年
- 柯以铨修俊刚杨志军徐如祥
- 关键词：超顺磁性氧化铁细胞示踪细胞成像
- 体外菲立磁标记恒河猴骨髓基质细胞自体移植入纹状体后磁共振对标记细胞形态学的示踪观察被引量：3
- 2006年
- 目的:体外菲立磁标记的骨髓基质细胞经单细胞悬液微移植后,观察将其在恒河猴纹状体的存活、迁移、分化和整合状况,为细胞移植治疗疾病奠定基础。方法:实验于2004-04/2005-05在南方医科大学珠江医院全军神经医学研究所和解放军第四军医大学神经科学研究所完成。纳入健康恒河猴3只,离恒河猴骨髓基质细胞,利用神经干细胞培养基、白血病抑止分因子和碱性成纤维母细胞生长因子进行细胞扩增并诱导成骨髓基质源神经干细胞,再经体外菲立磁和活细胞荧光染料PK67标记后,采用微移植的方法,通过脑立体定位仪上用微玻璃针将干细胞分别植入脑纹状体内。细胞移植后1,4,8周应用核磁共振成像对脑内移植的细胞进行活体示踪,最后利用光镜和电镜观察标记细胞在脑内的形态学情况。结果:①体外菲立磁标记结果:骨髓基质细胞经微移植后可在脑内纹状体区域存活,移植的干细胞可向周围的脑实质内迁移和整合,迁移细胞沿特定的纹状体结构分布,少量细胞可分化成神经元。②核磁共振成像检查结果:发现脑内移植的标记细胞在磁共振上呈明显的低信号改变,未标记细胞侧脑组织无明显的低信号改变,与组织学切片结果基本相一致。结论:髓基质源神经干细胞移植后,可在脑内存活、迁移、分化和整合,骨利用核磁共振成像技术可以对脑内移植后的标记细胞进行初步的活体追踪。
- 柯以铨杨志军彭苹徐如祥姜晓丹魏玲王松青饶志仁段丽曹容蔡颖谦杜谋选邹雨汐
- 关键词：骨髓纹状体恒河猴细胞形态学
