国家自然科学基金(81060021)
- 作品数：12 被引量：50H指数：4
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- 一磷酸鞘氨醇／一磷酸鞘氨醇1受体信号通路在大鼠肥大心肌细胞缺血后适应中的作用及其机制被引量：7
- 2016年
- 目的探讨一磷酸鞘氨醇（S1P）／一磷酸鞘氨醇1型受体（S1P1）信号通路在肥大心肌细胞缺血后适应中的作用及其机制。方法将原代分离培养的SD乳鼠心肌细胞用去甲肾上腺素（NE）1μmol／L诱导肥大后，用三气培养箱缺氧复氧模拟缺血环境建立缺氧后适应模型并对其进行鉴定。诱导成功的肥大心肌细胞在缺氧后适应基础上添加药物干预，根据添加药物分为5组，即缺氧后适应组（IPost组，肥大心肌细胞建立缺氧血后适应模型，无其他特殊干预），缺氧后适应加S1P组（IPost＋S1P组，肥大心肌细胞在建立缺氧后适应模型前，先用S1P1μmol／L孵育2h），缺氧后适应加S1P1抑制剂W-146和slP组（IPost＋S1P＋W-146组，肥大心肌细胞在建立缺氧后适应模型前，先用W-1460．4μmo]／L处理20min然后添加SIP1μmol／L孵育2h），缺氧后适应加丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）阻滞剂PD98059和S1P组（IPost＋SIP＋PD98059组，肥大心肌细胞在建立缺氧后适应模型前，先用PD98059125μmol／L处理20min后再添加s1P1μmol／L孵育2h），以及缺氧后适应加P13K阻滞剂LY294002和S1P组（IPost＋SIP＋LY294002组，肥大心肌细胞在建立缺氧后适应模型前，先用LY2940020．1μmol／L处理20rain然后添加S1P1μmol／L孵育2h）。采用流式细胞仪检测各组肥大心肌细胞的凋亡率。蛋白印迹法检测凋亡蛋白caspase-3及相关信号通路蛋白细胞外信号调节激酶1／2总蛋白（t-ERKI／2）、细胞外信号调节激酶1／2磷酸化蛋白（p-ERKI／2）、蛋白激酶B总蛋白（t-Akt）、蛋白激酶B磷酸化蛋白（p-Akt）的表达水平。结果（1）肥大心肌细胞缺氧后适应模型建立的鉴定结果：缺氧复氧、缺氧后适应培养的肥大心肌细胞以及正常培养的肥大心肌细胞凋亡率分别为（27．90±4．49）％、（15．90±1．77）％以及（7．97±2．18）％，前两者均明显高于正常培养的肥大
- 包馨慧李海霞陶静李晓梅杨毅宁马依彤陈邦党
- 关键词：心肌再灌注损伤受体鞘磷脂
- 鼠尾胶原对过氧化氢所致体外心肌细胞氧化损伤的影响被引量：1
- 2015年
- 目的:探讨鼠尾胶原对过氧化氢导致的离体心肌细胞氧化损伤的保护作用。方法:原代培养的SD大鼠乳鼠心肌细胞随机接种到铺有鼠尾胶原的培养皿和普通培养皿中,均用0u M、100u M、200u M和300u M H2O2诱导。24h后,通过电子显微镜观察各组乳鼠心肌细胞的形态,应用MTT比色法检测心肌细胞存活率,TUNEL法检测心肌细胞凋亡形态,流式细胞技术检测心肌细胞凋亡率,Western-Blot检测凋亡蛋白Bax、Bcl-2的表达。结果:铺有鼠尾胶原的培养皿和普通培养皿中,随着H2O2浓度的增高,电子显微镜下可观察到细胞凋亡状态明显加重,细胞存活率明显下降,细胞凋亡率明显增高,Bcl-2/Bax比值显著降低。而在相同浓度H2O2诱导的鼠尾胶原组与普通组中,铺有鼠尾胶原培养皿培养的细胞凋亡状态较普通培养皿培养的细胞明显减弱,且细胞存活率及Bcl-2/Bax比值增高,细胞凋亡率减低。结论:鼠尾胶原对过氧化氢所致的心肌细胞氧化损伤具有保护作用。
- 包馨慧李晓梅杨毅宁马依彤陈邦党陶静陈小翠
- 关键词：鼠尾胶原氧化应激过氧化氢
- 再灌注抢救激酶在肥厚心肌缺血后适应中的作用被引量：5
- 2011年
- 目的探讨再灌注抢救激酶细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)和磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶B(PI3K-Akt)信号通路在缺血后适应(IPost)对减轻肥厚心肌缺血再灌注(I/R)损伤中的作用。方法 12周龄C57/BL小鼠通过主动脉弓缩窄4周建立心肌肥厚模型,利用Langendorff灌流装置建立小鼠肥厚心肌I/R模型,30min全心缺血随后再灌注15、120min。分为缺血再灌注组(I/R组)、后适应组(IPost组,采取缺血10s及再灌注10s的3次IPost周期)、I/R+抑制剂组[分别加入ERK1/2特异性抑制剂PD98058,Akt特异性抑制剂渥曼青霉素(wortmannin)]、IPost+抑制剂组,进行心脏血流动力学检测,采用三苯基氯化四氮唑染色的方法确定心肌梗死范围,免疫印迹方法检测ERK1/2、p70s6k、Akt、糖原合成酶3β(GSK-3β)总蛋白及磷酸化蛋白表达水平。结果与I/R组比较,IPost组小鼠心脏血流动力学指标左心室收缩压、左室压力上升最大速度显著改善[(67±5)比(86±6),(2720±210)比(3678±330)mmHg,均P<0.05],心肌梗死范围减小(均P<0.05)。与I/R组比较,IPost组在再灌注15、120min心肌的ERK1/2、p70s6k蛋白磷酸化水平表达显著增加;与I/R组比较,I/R+PD98058组上述指标差异无统计学意义(均P>0.05);IPost+PD98058组显示在再灌注的最初15min使用PD98059能消除IPost对肥厚心肌的上述保护作用。与I/R组比较,IPost组再灌注15、120min心肌的Akt、GSK-3β蛋白磷酸化水平表达差异无统计学意义(均P>0.05);I/R+wortmannin组、IPost+wortmannin组上述指标差异亦无统计学意义(均P>0.05)。结论 IPost能有效地减轻离体小鼠肥厚心肌缺血再灌注损伤,ERK1/2细胞信号途径是IPost对缺血再灌注肥厚心肌保护作用的重要信号通路;而PI3K-Akt信号通路未参与IPost上述保护作用。
- 李晓梅杨毅宁马依彤陈邦党刘芬韩伟高晓明
- 关键词：缺血后适应再灌注损伤左心室肥厚细胞外信号调节激酶1/2
- 体外心肌细胞缺血后适应模型的建立及评价被引量：3
- 2014年
- 目的建立心肌细胞缺血后适应(IPost)模型并观察IPost对心肌细胞再灌注(I/R)损伤的影响。方法体外培养新生SD乳鼠心肌细胞,随机分正常对照组(SH组)、缺血再灌注组(I/R组)及缺血后适应组(IPost组),用烟酸己可碱(Hochest33342)及碘化丙啶混合溶液染色后观察细胞凋亡率情况,流式细胞术检测细胞凋亡率,逆转录PCR(RT-PCR)方法和蛋白质印迹法(Western Blot)方法检测Bcl-2/Bax基因表达。结果与I/R组比较,IPost组细胞凋亡率显著改善,Bcl-2蛋白表达上调,Bax蛋白表达下降,Bcl-2/Bax显著增加(P均<0.05)。结论 IPost能通过抗心肌凋亡有效地减轻离体心肌细胞缺血再灌注损伤。
- 李晓梅包馨慧杨毅宁马依彤陈邦党刘芬李海霞
- 关键词：缺血后适应心肌缺血再灌注损伤心肌细胞
- 原代乳鼠心肌细胞分离培养的改进被引量：9
- 2015年
- 目的探讨提高细胞纯度、存活率及活性的乳鼠心肌分离培养方法。方法改进心脏组织的处理方法,用胰酶预处理后再用II型胶原酶依次处理心肌组织,采用差速贴壁及化学药物纯化心肌细胞。结果提取的单个心肌细胞结构完整,呈类圆形;12 h时大部分细胞贴壁;24 h后几乎全部贴壁,仅见少量漂浮细胞,贴壁细胞伸出伪足,呈梭形、三角形等,细胞出现自主搏动。48 h后心肌细胞伪足间形成联接,交织成网状,局部心肌细胞出现同步搏动。3 d后心肌细胞聚集成簇,呈岛屿样搏动。心肌细胞存活率为96.6%,纯度>96%。结论此改进方法所提取培养的乳鼠心肌细胞存活率及纯度高,细胞活性好,结构功能完整,可用于相关实验中原代乳鼠心肌细胞的分离培养。
- 包馨慧李晓梅杨毅宁马依彤陈邦党陶静陈小翠
- 关键词：心肌细胞原代培养新生大鼠
- 重组腺相关病毒对内皮细胞增殖和凋亡的影响
- 2014年
- 目的 通过重组9型腺相关病毒（rAAV9）载体介导R65核酶基因对体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVECs）进行转染,观察R65核酶基因表达对高脂血清刺激后HUVECs增殖和凋亡的影响.方法 体外培养HUVECs,高脂血清诱导建立动脉粥样硬化内皮损伤模型,重组rAAV9介导抗核因子（NF）-κB核酶基因（rAAV9-R65）腺相关病毒载体转染HUVECs.实验分为3组：（1）正常对照组;（2）高脂血清诱导组;（3）高脂血清诱导＋病毒转染组.通过Western blot检测HUVECs细胞中p65核蛋白的表达;酶联免疫吸附试验（ELISA）检测NF-κB信号通路下游肿瘤坏死因子（TNF）-α和白细胞介素（IL）-6的变化;Alamar Blue法检测rAAV9-R65转染后HUVECs的体外增殖;rAAV9-R65转染细胞96 h后流式细胞仪检测高脂血清刺激后HUVECs凋亡率的变化.结果 高脂血清诱导HUVECs 24 h后,细胞由卵圆形铺路石样逐渐变成类圆形,Western blot检测显示p65的表达水平分别为：空白组：0.0229 ±0.0024;高脂血清诱导组：0.224 3±0.008 6;rAAV9-R65转染＋高脂血清诱导组：0.071 4 ±0.007 0.HUVECs细胞中高脂血清诱导后p65蛋白表达明显增高,而病毒转染后p65水平降低.ELISA检测结果显示HUVEC分泌的TNF-α水平3组分别为：15.98 ±0.43、27.94±0.83、19.73±0.43.而3组IL-6水平分别为：3.94 ±0.12、6.32 ±0.21、5.08 ±0.12.高脂血清诱导后TNF-α和IL-6的分泌显著高于空白组,而rAAV9-R65干预＋高脂血清诱导后TNF-α和IL-6的浓度明显降低.Alamar blue法检测显示R65基因表达能明显减轻高脂血清刺激后HUVECs的增殖抑制.流式细胞术检测显示与空白组比较,高脂血清诱导后细胞早期凋亡比率为20.4％,晚期凋亡比率为4.7％;而rAAV9-R65转染＋高脂血清诱导组早期凋亡比率降至7.2％,晚期凋亡比率降为2.9％,证明R65表达可明显减轻高脂血清刺激后HUVECs的凋亡.结论 R65基因表达能有效减轻高脂血清刺激后HUVECs的增殖抑制,并
- 翟慧向阳杨毅宁马依彤李晓梅陈邦党刘芬张金宇
- 关键词：腺相关病毒高脂血清增殖脱噬作用
- 鼠尾胶原在心肌细胞氧化损伤中的保护作用被引量：1
- 2014年
- 背景:胶原蛋白具有抗氧化作用,但既往在实验室主要将鼠尾胶原用于促进细胞贴壁和支架构建,对于其抗氧化作用目前尚无相关研究。目的:探讨鼠尾胶原对过氧化氢导致离体心肌细胞氧化损伤的保护作用。方法:将原代培养的SD大鼠乳鼠心肌细胞随机接种到铺有鼠尾胶原的培养皿(实验组)和普通培养皿(对照组)中,并且均用0,10,100μmol/L H2O2诱导。24 h后,以电子显微镜观察各组乳鼠心肌细胞的形态,应用MTT比色法检测心肌细胞存活率,TUNEL法检测心肌细胞凋亡形态,流式细胞技术检测心肌细胞凋亡率,黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶活力,硫代巴比妥比色法检测丙二醛水平,Western-Blot检测凋亡蛋白Bax、Bcl-2的表达。结果与结论:两组培养皿中,随着过氧化氢浓度的增高,均可见细胞凋亡状态明显加重,细胞存活率及细胞内过氧化氢活力明显下降,细胞凋亡率及细胞内丙二醛水平明显增高,Bcl-2/Bax比值显著降低,呈剂量依赖性。而在相同浓度过氧化氢诱导下,与对照组相比,实验组细胞凋亡状态明显减弱,细胞存活率、超氧化物歧化酶活力及Bcl-2/Bax比值增高,细胞凋亡率和丙二醛水平明显减低。表明鼠尾胶原对过氧化氢所致的心肌细胞氧化损伤具有保护作用,其机制可能与提高超氧化物歧化酶活力,减少丙二醛产生及提高Bcl-2的表达有关。
- 包馨慧李晓梅陶静杨毅宁马依彤陈邦党
- 关键词：生物材料鼠尾胶原心肌细胞氧化应激过氧化氢国家自然科学基金
- C5L2基因新的SNP位点C698T与新疆地区维吾尔族人群2型糖尿病的相关性研究被引量：2
- 2012年
- 目的本研究旨在探讨促酰化蛋白（acylation—stimulating protein，ASP）的功能受体C5L2基因新的SNP位点C698T多态性与糖尿病的相关性。方法采用直接测序的方法，在C5L2基因第二外显子区发现新的SNP位点C698T；采用PCR-限制性片段长度多态性方法，对252例2型糖尿病患者和747名健康对照者C5L2基因C698T进行分析。结果C5L2基因C698T杂合子基因型在2型糖尿病组和对照组的分布频率分别为0．107和0．036，差异有统计学意义（r=18．576，P〈0．01）。在调整了年龄、性别、吸烟、饮酒，高血压、甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇等混杂因素后，C698T杂合子SNP仍为新疆维吾尔族人群2型糖尿病的独立危险因素（P〈0．01，OR=3．373，95％C／1．736—6．553）。结论在新疆维吾尔族人群中，C5L2基因C698T基因多态性与2型糖尿病具有相关性，CT基因型可增加新疆维吾尔族人群2型糖尿病发生的风险。
- 郑颖颖付真彦马依彤谢翔杨毅宁李晓梅杨思进刘芬陈邦党
- 关键词：促酰化蛋白维吾尔族
- S1P的心脏保护作用及相关信号通路的研究进展被引量：3
- 2014年
- 一磷酸鞘氨醇(S1P)是一种具有生物活性的磷脂信使,在体内主要由血小板和肥大细胞分泌,其对细胞的生长、增殖以及迁移等具有重要作用。S1P对心脏具有保护作用,尤其是在心脏缺血再灌注时,其能够降低缺血再灌注的损伤程度,减少心肌梗死面积、降低心律失常的发生。S1P还具有调节血管通透性以及抗动脉粥样硬化的作用。S1P的生物学效应的发生涉及多种信号通路,包括Akt、ERK、Rho等。
- 包馨慧李晓梅
- 关键词：心脏保护作用
- S1P信号通路在肥厚心肌缺血后适应中的作用被引量：1
- 2015年
- 目的探讨在缺血后适应(IPost)减轻肥厚心肌缺血再灌注(IR)损伤中S1P信号通路的作用。方法选取12周龄C57/BL小鼠,利用Langendorff灌流装置建立小鼠肥厚心肌IR模型,30 min全心缺血随后再灌注90 min。64只小鼠随机分为缺血再灌注组(IR组)、缺血后适应组(IPost组)、IPost+W-146组和IPost+PD98059组,每组14只,进行心脏血流动力学和心肌梗死范围检测,Western印迹方法检测S1P1、ERK1/2总蛋白及磷酸化蛋白表达水平。脱氧核苷酸转移酶介导的生物素原位缺口末端标记(TUNEL)法检测心肌细胞的凋亡。结果与IR组比较,IPost组小鼠心脏血流动力学指标左心室收缩压[(66±6)mm Hg vs(85±5)mm Hg]、左室压力上升最大速度[(2 820±220)mm Hg vs(3 778±230)mm Hg]显著降低(P<0.05),心肌梗死范围显著减小[(23.6±2.8)%vs(40.2±4.6)%]。IPost+抑制剂组显示在再灌注的最初15 min使用W-146、PD98059能消除IPost对肥厚心肌的上述保护作用并显著增加心肌梗死面积,与IR组水平相同。与IR组比较,IPost组在再灌注结束后心肌组织中的S1P1、ERK1/2蛋白磷酸化水平表达显著增加;IPost+W-146组与IPost+PD98059组分别与IR组比较,上述指标差异均无统计学意义(P>0.05);TUNEL法检测结果显示,IPost组Bcl-2的表达较其他各组明显升高,Bax的表达较其他各组明显降低,经比较各组之间Bcl-2和Bax的表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论 IPost能有效地减轻离体小鼠肥厚心肌缺血再灌注损伤,IPost的心肌细胞保护作用可能是通过S1P结合S1P1后激活ERK1/2信号通路实现的。
- 李海霞李晓梅陈邦党刘芬杨毅宁盖敏涛陈小翠马依彤
- 关键词：肥厚心肌缺血再灌注缺血后适应
