国家自然科学基金(30800434)
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 相关作者：张爱峰史瑞明孙超峰魏峰强华更多>>
- 相关机构：西安交通大学医学院第一附属医院教育部更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 多质粒共转染建立Cav1.3 L-型钙通道的研究模型被引量：2
- 2009年
- 目的:提高多质粒转染效率,建立钙离子通道的研究模型。方法:在传统的脂质体转染过程中,通过不断调整细胞密度、转染质粒DNA的量,将含Cav1.3L-型钙通道相关亚基的质粒DNA转染至HEK293T细胞,采用全细胞膜片钳技术检测Cav1.3L-型钙通道的电流表达。结果:转染后的HEK293T细胞在荧光显微镜下可见明显的绿色荧光;全细胞膜片钳技术检测出Cav1.3 L-型钙通道电流的表达。结论:通过调整细胞密度和转染质粒DNA的量,可以提高脂质体介导多质粒共转染HEK293T细胞的效率,建立钙离子通道的研究模型。
- 强华魏峰张爱峰史瑞明孙超峰马爱群
- 关键词：基因脂质体293T细胞
- Cav1.3L-型钙通道K228E突变体的构建及功能研究
- 2009年
- 目的通过构建Cav1.3基因K228E突变,观察K228E突变对L-型钙通道电生理特性及蛋白表达和转运的影响。确定钙通道α1亚基结构域ⅠS4段上N-端带正电荷的氨基酸对该通道电生理学特性的作用,从而为创建钙通道起搏器奠定基础。方法①一步法快速定点诱变构建Cav1.3基因K228E突变体的真核表达载体;②膜片钳观察突变钙通道电流,激光共聚焦技术观察突变钙通道蛋白在细胞内的表达和定位。结果①检测表达于HEK293细胞上的L-型钙电流:转染野生型Cav1.3质粒和相关亚基质粒,可检出L-型钙电流,其半激活电压V1/2=(-36.56±2.08)mV、半失活电压V1/2=(-42.93±0.14)mV(5mmolBa2+);而转染K228E-Cav1.3质粒和相关亚基质粒的HEK293T细胞上未检测到钙电流;②检测K228E突变通道蛋白在细胞内的表达和定位:转染野生型和突变型Cav1.3质粒及相关亚基质粒,48h后观察到野生型与突变型钙通道蛋白在细胞膜上都有表达。结论Cav1.3基因K228E突变虽不影响L-型钙通道蛋白质的表达与转运,但却不表达钙通道电流,是一种功能丧失性突变。
- 强华孙超峰魏峰张爱峰史瑞明马爱群崔长琮
- 关键词：生物起搏L-型钙通道定点诱变膜片钳
