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人内皮-单核活化多肽-2的重组表达及其活性鉴定: 2008年; 目的:采用原核表达系统重组表达抗肿瘤细胞因子——人内皮-单核活化多肽2(endothelail monocyte-activating polypeptideⅡ,EMAP-Ⅱ),并探讨重组EMAP-Ⅱ的抗肿瘤生物学活性。方法:采用pMAL-p2x表达系统和BL-21菌株克隆表达人EMAP-Ⅱ_(147-312),对表达产物进行纯化。以发光底物法测定重组EMAP-Ⅱ介导人脐静脉内皮细胞ECV-304产生组织因子的活性;以流式细胞术测定其增强ECV-304细胞对于TNFα致凋亡的敏感性;以MTF法检测定其对胰腺癌SW1990细胞增殖的抑制效果。结果:测序证实EMAP-Ⅱ编码序列被正确克隆进表达载体,经诱导表达、纯化,获得重组EMAP-Ⅱ产物,每克菌体(湿重)可获得约500μg的重组蛋白,纯度为电泳纯。重组EMAP-Ⅱ在体外培养条件下可使ECV-304细胞产生TF因子;并可增强ECV-304细胞对于TNFα介导凋亡的敏感性,使凋亡率明显增加[(16.6±2.5)% vs(25.6±2.3)%,P<0.01];在一定的质量浓度(1μg/ml)下,EMAP-Ⅱ对SW1990细胞的增殖有一定抑制作用(P<0.05)。结论:本研究采用原核表达系统pMAL-p2x可表达高纯度的重组EMAP-Ⅱ,该因子具有良好的抗肿瘤生物学活性。; 高云王梁华任娜孙铭娟郭爱云焦炳华; 关键词：克隆表达抗肿瘤增殖抑制

一条新的人类组氨酰tRNA合成酶类似物全长cDNA的克隆及表达谱分析被引量：1: 2002年; 从人胎脑文库中克隆到一条长为 12 19bp的cDNA ,它编码 2 3.4ku的肽链 .该肽链与葡萄球菌组氨酰tRNA合成酶N端同源 5 8% .利用humangenomicblast可将其定位于 2 0p11.Northern杂交显示胎脑中有一约1.5kb的单一条带 .基因芯片杂交分析表明 ,其在肺癌和前列腺癌组织中表达较高 .; 孟宪芳陈金中杨泉胜王曙周光云应康谢毅毛裕民; 关键词：克隆

应用荧光原位杂交检测人凝血因子Ⅸ在转基因小鼠染色体上的整合被引量：13: 2002年; 应用荧光原位杂交 (FISH)技术检测两个转基因小鼠家系从F1到F4 代的整合情况。阳性转基因小鼠 98%～ 10 0 %的中期分裂相 ,85 %～ 94%的间期核出现杂交信号 ;阴性对照小鼠 10 0 %的中期分裂相、95 %～ 96 %的间期核未出现杂交信号。结果表明 ,该FISH实验条件能对转基因整合位点进行高效特异检测。本文分析的两家系转基因小鼠均为单位点整合 ,但整合位点不同。各家系内F1到F4 代的转基因小鼠均可检出整合染色体 ,且整合位点相同 ,表明外源基因稳定整合并遗传给后代。; 肖艳萍奚鹰黄文英黄英; 关键词：荧光原位杂交转基因小鼠染色体整合位点

转基因小鼠中外源基因遗传及表达稳定性的研究被引量：6: 2002年; Two transgenic mouse strains , in which the expression of human factor IX (hFIX) in the milk were different significantly, were bred, and the foreign gene integration as well as the content of hFIX in the milk were detected by PCR, Southern blot, FISH and ELISA, respectively. The results showed that approximately 50% offsprings were transgenic positive. Foreign gene integrated in mouse chromosomes was intact. The hFIX expression of each mouse in the same strain was different, the content of hFIX in the milk was (43.32±5.41)μg/mL in FIX-33 transgenic strain and (1.16±0.45)μg/mL in FIX-124 transgenic strain. Meanwhile, the hFIX gene expression between the two strains was different remarkably (P<0.01). We conclude that the characteristics of inheritance and expression in the founder were able to be transferred to their offsprings stably.; 颜景斌肖艳萍方彧聃奚鹰黄文英黄英; 关键词：转基因小鼠外源基因

上海地区新生儿先天性肾上腺皮质增生症的筛查被引量：45: 2002年; 目的　在上海地区新生儿疾病筛查项目中调查先天性肾上腺皮质增生症的发病率。方法　对来自市郊 5 0家妇婴保健医院、产科医院 5 0 60 0例出生 3d的新生儿足根刺血 ,滴于专用采血滤纸上 ,用酶免疫吸附试验方法测定干血滤纸片上 17 羟孕酮 ( 17 OHP)水平。结果　在 5 0 60 0例新生儿中发现 8例新生儿 17 OHP水平明显升高。经进一步检查 ,3例确诊为先天性肾上腺皮质增生症 2 1羟化酶缺乏 ,患者伴有血钾升高 ,血钠降低 ,睾酮水平增高。另外 5例为早产原因所致 17 OHP升高。结论　干血滤纸片法测定 17 羟孕酮适用于大规模开展先天性肾上腺皮质增生症筛查。本病在上海地区的发病率为 1∶16866。; 顾学范周建德叶军; 关键词：新生儿筛查

白细胞介素12对肝癌基因治疗的实验研究被引量：3: 1999年; 目的研究携带白细胞介素１２（ＩＬ１２）基因逆转录病毒载体对体内肝癌生长抑制作用，探索基因治疗肝癌新途径。方法构建携带ＩＬ１２的逆转录病毒载体，转染逆转录病毒包装细胞系ＰＡ３１７，应用该包装细胞对实验性肝癌大鼠进行治疗，观察抗肿瘤作用，免疫功能变化。结果将包装细胞ＰＡ３１７ＩＬ１２肝癌局部或脾内注射后能明显抑制肝癌细胞系ＣＢＲＨ３的生长，接种ＣＢＲＨ３第１、３天注射ＰＡ３１７ＩＬ１２者能长期生存，第５、７天注射者生存期明显延长。而空白对照组及携带空载体的逆转录病毒包装细胞系均可见肿瘤生长（Ｐ＜００１）。结论肝癌局部及脾内注射携带ＩＬ１２基因逆转录病毒载体的包装细胞株均能产生有效抗肝癌作用。; 杨家和钱其军薛惠斌曹惠芳崔贞福石文芳杨广顺吴孟超; 关键词：肝肿瘤肝细胞癌基因治疗白细胞介素12

重组天花粉蛋白突变体质量标准的研究和建立被引量：3: 2006年; 目的：建立重组天花粉蛋白突变体（MTCS）的质量控制标准和检测方法。方法：用HL-60细胞株／MTT比色法定量测定MTCS体外生物学活性；用C4-HPLC和非还原型SDS—PAGE测定蛋白纯度；用毛细管电泳法测定等电点；用胰酶消化／RP—HPLC测定肽图；用还原型SDS—PAGE测定蛋白分子量等。结果：MTCS原液和成品对HL-60细胞的反应曲线与参考品的反应曲线一致，都呈现典型的S型曲线并且符合四参数方程式Y=（（A—D）／（1＋（X／C）^B））＋D，相关系数大于0．99；蛋白质纯度大于95．0％；等电点为9．16；蛋白原液的肽图与参考品肽图图形一致；分子量为2．72×10^4。结论：建立的MTCS质量控制标准和检测方法可以有效控制该制品的质量，并用于该制品的常规检定。; 韩春梅袁力勇饶春明李响丁有学郭莹王军志; 关键词：HL-60细胞株 HPLC 等电点

外源基因在转基因小鼠中整合状况的分析被引量：1: 2006年; 目的研究外源基因在转基因小鼠及其家系中的整合状况。方法采用PCR、定量PCR和荧光原位杂交(FISH)的方法对原代转基因小鼠中外源人凝血因子Ⅸ(hFⅨ)基因的整合和嵌合情况进行分析。使用PCR、直接测序法鉴定整合的外源基因多拷贝的连接方向和连接方式。结果7个家系中F0-8、F0-10和F0-11的后代中阳性个体比例明显低于50%,3个原代小鼠DNA中hFⅨ基因拷贝数分别只有子代中的66.2%、18.8%和28.3%。F0-11小鼠各脏器中嵌合比差异极大,且未见胚系特异性分布。不同个体间整合拷贝数差异极大,最少的F0-69为单拷贝,最多的F0-10有43个拷贝。而整合位点分析发现外源基因在随机分布中仍呈现一定的趋向性。PCR和测序结果证明所有小鼠中外源基因多拷贝均为头尾连接,连接的机制以粘性末端介导的连接为主,F0-13中还存在同源序列配对、断裂、修复介导的头尾连接。结论在整合有hFⅨ基因的转基因小鼠中多拷贝外源基因多以粘性末端介导的头尾连接方式整合在染色体的某些特定区域。; 颜景斌朱怡文肖艳萍王舒任兆瑞黄淑帧曾溢滔; 关键词：转基因小鼠外源基因拷贝数嵌合体

两种卤代菊酸含氟对甲氧甲基苄酯的合成及其杀虫活性被引量：15: 2003年; 报道了两种含氟对甲氧甲基苄酯类拟除虫菊酯新化合物 ,即三氟甲基氯菊酸含氟对甲氧甲基苄酯和二溴菊酸含氟对甲氧甲基苄酯的合成 .; 邹新琢杜劲梅; 关键词：杀虫活性

阿莫西林黏膜黏附微球稳定性及黏附性研究被引量：4: 2004年; 目的比较pH 1盐酸溶液条件下阿莫西林原料药与黏膜黏附微球中阿莫西林稳定性,考察阿莫西林黏膜黏附微球(Amo-Cb-Ec)与阿莫西林乙基纤维素微球(Amo-Ec)体内外黏膜黏附效果。方法用乳化-溶媒蒸发法制备Amo-Cb-Ec和Amo-Ec;以高效液相色谱法测定Amo-Cb-Ec中阿莫西林及阿莫西林原料药在pH 1条件下稳定性;分别以拉力法和冲洗法考察Amo-Cb-Ec与离体大鼠肠黏膜和胃黏膜表面的黏附效果;以灌胃法考察微球在大鼠胃肠道黏附滞留程度。结果pH 1条件下,37℃振荡放置6 h,阿莫西林原料药降解大于50％,含0.5％卡波普有助于减少其降解程度,而Amo-Cb-Ec中阿莫西林相对含量均在85％左右。Amo-Cb-Ec与大鼠离体肠黏膜间黏附力显著高于不含黏附材料的Amo-Ec(P<0.05);Amo-Cb-Ec在大鼠离体胃黏膜表面滞留率显著高于Amo-Ec(P<0.05);Amo-Cb-Ec在大鼠胃肠道内的滞留率也显著高于Amo-Ec。结论在pH 1条件下游离阿莫西林不稳定,而卡波普对阿莫西林具有一定保护作用,Amo-Cb-Ec中所含阿莫西林稳定程度显著提高。体内外黏附试验结果显示,Amo-Cb-Ec对离体和活体胃黏膜具有良好的黏附作用。; 刘哲鹏潘俊陆伟跃; 关键词：阿莫西林稳定性

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