国家自然科学基金(30800455)
- 作品数：6 被引量：18H指数：2
- 相关作者：王亭忠魏峰马爱群张静倪雅娟更多>>
- 相关机构：西安交通大学医学院第一附属医院新疆医科大学环境与疾病相关基因教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 同种异体骨髓间充质干细胞在大鼠体内心肌缺血微环境中的分化及存活被引量：4
- 2014年
- 目的观察大鼠同种异体骨髓间充质干细胞(MSCs)在体内心肌缺血微环境中,向心肌细胞分化过程中主要心肌特异性标志物的分化表达及存活。方法采用左冠状动脉前降支(LAD)结扎术建立大鼠急性心肌梗死(MI)模型(n=62),将绿色荧光蛋白(GFP)转染标记的MSCs,于心外膜下注射到心肌梗死周边区;免疫荧光染色观察移植后3、5、7、9d移植的MSCs的存活情况及其主要特异性标志物(MYH、Cx43、cTnI、α-actin)蛋白的表达;应用激光捕获显微切割技术分离心肌组织中GFP标记的MSCs群,应用Real-time PCR法测定其MYH、Cx43、cTnI、α-actin相对于未移植的MSCs的mRNA表达,对移植后9 d的移植区域行TUNEL凋亡染色。结果免疫荧光染色观察到移植的MSCs于移植后3 d开始持续表达MYH、Cx43,于移植后5 d开始持续表达cTnI,未观察到α-actin的表达;Real-time PCR法结果显示,移植的MSCs上MYH于移植后5、7 d的表达量较3 d的明显增多(P<0.05),Cx43、cTnI于移植后7 d的表达量较5 d的均增加(P<0.05),于移植后9 d MSCs几乎观察不到,TUNEL凋亡染色示移植的MSCs发生了凋亡。结论移植的MSCs在大鼠体内心肌缺血微环境下向心肌细胞分化的过程中能够表达部分主要心肌特异性标志物,但其不能长时间、有效的存活。
- 张静魏峰吴忠东王亭忠倪雅娟马爱群
- 关键词：骨髓间充质干细胞MYHCX43CTNIΑ-ACTIN
- 大鼠骨髓间充质干细胞在心肌缺血微环境中Cav1.2的表达被引量：1
- 2017年
- 目的观察大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)在心肌缺血微环境中向心肌细胞分化过程中Cav1.2的分化表达。方法采用左冠状动脉前降支(left anterior descending coronary artery,LAD)结扎术建立大鼠急性心肌梗死(myocardial infarction,MI)模型(n=52),并行心电图检查。将绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)标记MSCs,贴壁培养,用心外膜下注射法将GFP标记的MSCs移植到心肌梗死周边区域;移植后7 d开胸取心脏组织,HE染色观心肌梗死区域病理变化。将移植后3,5,7 d的大鼠分为3 d组、5 d组、7 d组,每组10只动物,免疫荧光染色观察各组移植的MSCs上Cav1.2蛋白的表达;激光捕获显微切割技术分离各组心肌组织中GFP标记的MSCs群,应用real-time PCR测定各组心肌组织中Cav1.2及未移植大鼠MSCs mRNA的相对表达量;移植后9 d,对移植区域行TUNEL凋亡染色。结果免疫荧光染色观察3 d组、5 d组、7 d组心肌组织中移植的MSCs均不表达Cav1.2;real-time PCR测定显示,3 d组、5 d组、7 d组中Cav1.2相对表达量与未移植的MSCs相比均无明显变化(P>0.05),移植后9 d未观察到MSCs的表达,TUNEL凋亡染色显示移植的MSCs发生了凋亡。结论在大鼠心肌缺血微环境中移植的MSCs不表达Cav1.2且不能长期存活。
- 张静马爱群魏峰王亭忠
- 关键词：心肌梗死骨髓间充质干细胞
- 慢病毒载体介导GFP标记大鼠骨髓间充质干细胞被引量：9
- 2010年
- 目的探究慢病毒载体介导绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)标记大鼠骨髓间充质干细胞(mes-enchymal stem cells,MSCs)的理想条件,以获得稳定高表达GFP的MSCs亚群。方法慢病毒载体介导GFP以25、50、100、200和400的感染复数(multiplicity of infection,MOI)分别作用12 h和24 h感染MSCs,倒置荧光显微镜及流式细胞术检测各组的感染效率和荧光强度,MTT法评价感染对MSCs增殖的影响,从而确定理想的感染条件。平皿克隆套环法挑选理想条件下感染的MSCs单克隆。结果MOI为100、200和400作用24 h时,感染效率较高,分别为88.94%、99.65%、99.42%;MOI为100和200时,感染对MSCs增殖无影响,MOI为400时,感染的MSCs增殖减慢。挑选MOI为200、作用24 h感染组的单克隆细胞,其1月时感染效率为99.95%,且荧光均一、强度很强。结论MOI为200作用24 h是慢病毒载体介导GFP标记MSCs的理想条件;通过细胞单克隆技术可获得稳定高表达GFP的MSCs亚群。
- 魏峰马爱群王亭忠张静
- 关键词：间充质干细胞慢病毒载体绿色荧光蛋白单克隆
- 体内心肌缺血微环境下大鼠骨髓间充质干细胞钾离子通道的表达被引量：1
- 2013年
- 目的动态观察在体内心肌缺血微环境下,大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)向心肌细胞分化过程中主要钾离子通道的分化表达。方法采用左冠状动脉前降支(left anterior descending coronary artery,LAD)结扎术建立大鼠急性心肌梗死(myocardial infarction,MI)模型(n=60),将绿色荧光蛋白(green fluorescent pro-tein,GFP)标记的MSCs,心外膜下注射移植到心肌梗死周边区;免疫荧光染色观察移植后3d(MI-3d组)、5d(MI-5d组)、7d(MI-7d组)、9d(MI-9d组)MSCs的存活情况及其主要钾离子通道(Kv1.4、Kir2.1、Kv4.3、Kca1.1)蛋白的表达;应用激光捕获显微切割技术分离以上各组心肌组织中GFP标记的MSCs群,应用Real-time PCR测定其Kv1.4、Kir2.1、Kv4.3、Kca1.1的mRNA表达。结果免疫荧光染色观察到移植的MSCs于移植后第3天开始持续表达Kv1.4、Kir2.1、Kv4.3,不表达Kca1.1,于移植后第9天几乎未观察到MSCs;Real-time PCR结果显示移植后3、5、7d,移植的MSCs上Kv1.4和Kir2.1表达呈逐步增多趋势,差异具有统计学意义(P<0.05),Kv4.3的表达无此变化趋势,但高于未移植MSCs,未见明显差异。结论移植的MSCs在大鼠体内心肌缺血微环境下向心肌细胞分化的过程中能够表达部分钾离子通道表型,但其不能长时间、有效的存活。
- 张静魏峰王亭忠倪雅娟马爱群
- 关键词：骨髓间充质干细胞钾离子通道KIR2.1
- 非人工通气下建立大鼠心肌内干细胞移植模型被引量：2
- 2010年
- 背景:小动物心肌内干细胞移植术较多采用气管插管呼吸机辅助通气和剪断胸骨或肋骨而开胸造模,其损伤大、操作复杂、且影响模型存活率。目的:在非人工通气条件下,以较小创伤,简单快速建立正常及心肌梗死大鼠心肌内干细胞移植模型。方法:将SD大鼠随机均分2组:心肌梗死移植组建立心肌梗死模型后接受骨髓间充质干细胞移植,在心肌梗死周边区分5点迅速注射骨髓间充质干细胞;正常移植组于左心室前壁心外膜下进行注射,方法及注射量同心肌梗死移植组。移植后4d,取大鼠心脏行冰冻切片,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白标记的骨髓间充质干细胞存活与分布,免疫荧光染色检测骨髓间充质干细胞心肌特异性蛋白的表达。结果与结论:心肌梗死移植组模型存活率为80%,正常移植组存活率为93%。移植后4d,移植区可见大量骨髓间充质干细胞,呈带状分布,排列方向与心肌纤维一致,并表达缝隙连接蛋白Connexin43和肌球蛋白重链MYH。结果提示:在非人工通气条件下,快速、简单、有效地建立了大鼠心肌内干细胞移植模型。
- 魏峰张静王亭忠倪雅娟马爱群
- 关键词：细胞移植心肌梗死动物模型
- 同种异体骨髓间充质干细胞在大鼠体内心肌缺血微环境中Nav1.5的表达被引量：1
- 2014年
- 目的观察大鼠同种异体骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)在体内心肌缺血微环境中向心肌细胞分化过程中Nav1.5的分化表达。方法采用左冠状动脉前降支(left anterior descending coronary artery,LAD)结扎术建立大鼠急性心肌梗死(myocardial infarction,MI)模型(n=50),将绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)转染标记MSCs,并贴壁培养,用心外膜下注射的方法将GFP标记的MSCs移植到心肌梗死周边区;通过免疫荧光染色观察移植后3,5,7 d移植的MSCs上Nav1.5蛋白的表达;应用激光捕获显微切割技术分离移植后3,5,7 d心肌组织中GFP标记的MSCs群,应用realtime PCR测定移植后3,5,7 d Nav1.5及未移植MSCs mRNA的相对表达量;对移植后9 d的移植区域行TUNEL凋亡染色。结果免疫荧光染色观察移植的MSCs于移植后3,5,7 d均不表达Nav1.5;real-time PCR测定显示Nav1.5相对表达量在移植后3,5,7 d之间比较及分别与未移植的MSCs相比均无明显变化(P>0.05);移植的MSCs于移植后9 d在心肌组织中几乎观察不到,TUNEL凋亡染色显示移植的MSCs发生了凋亡。结论在大鼠体内心肌缺血微环境中移植的同种异体MSCs不表达Nav1.5且不能长期存活。
- 张静王亭忠魏峰倪雅娟马爱群
- 关键词：心肌梗死骨髓间充质干细胞NAV1.5
