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番鸭1型病毒性肝炎病毒ZJX株分离鉴定及其3D基因序列分析: 2013年; 本研究从广东某养鸭场发病雏番鸭肝脏中分离到1株病毒。利用RT-PCR、基因序列分析、病毒中和试验及动物回归等鉴定为1型鸭病毒性肝炎病毒(DHV-1)。3D基因序列分析显示,该毒株与2011年分离自黑龙江的1型DHV Du/CH/LGD/111238和Du/CH/LGD/111239分离株核苷酸同源性最高,达99.6%。分离株F3代尿囊液病毒价为105.5ELD50/0.2 mL,能够被DHV-1阳性血清中和。接种病料研磨上清的鸭胚在接种后3 d～5 d内全部死亡,胚体充血萎缩侏儒。该分离株人工感染3日龄雏番鸭表现为角弓反张和肝脏肿大出血等与临床病症。结果表明该分离株具有较强的致病性。; 陈峰招丽婵张祥斌操胜雷雯刘闯覃健萍李海燕; 关键词：鸭病毒性肝炎病毒 3D基因

H9N2亚型禽流感病毒糖基化位点突变株的构建与生物学特性研究被引量：6: 2018年; 为了解H9N2亚型禽流感病毒(AIV)HA蛋白第200位N-糖基化位点的功能,利用流感病毒8质粒反向遗传系统拯救出重组病毒r-WZP株(缺失HA基因第200位N-糖基化位点)和r-WZP200株(含有HA基因第200位N-糖基化位点)。两株病毒的内部基因来自病毒株A/Puerto Rico/8/34(H1N1),HA基因与NA基因均来自H9N2AIV流行毒株。结果表明,两株病毒均能够在SPF鸡胚中稳定增殖,这一位点的缺失致使病毒与鸡红细胞的结合能力下降,HA效价热稳定性提高,对SPF鸡胚的致死能力增强,对进一步研究H9N2亚型AIV HA蛋白N-糖基化位点的功能具有重要的参考价值。; 廖昌韬曾凡桂严专强覃健萍曹永长曹永长陈峰; 关键词：H9N2亚型禽流感病毒 HA基因

新城疫病毒广东基因Ⅶ型分离株的分离鉴定及F基因克隆与序列分析被引量：8: 2013年; 2011年从广东一疑似新城疫病毒感染的养禽场通过SPF鸡胚接种试验、HA及HI试验和动物回归试验,生物学毒力指标(MDT,ICPI)测定,分离到一株新城疫毒株,命名为GD-X1-2011,并对该毒株进行了F基因的序列测定分析。GD-X1-2011株的MDT为45h<60h,ICPI为1.88>1.6,分离毒株具有血凝性且能被NDV La Sota标准阳性血清抑制,动物回归试验鸡出现典型的新城疫症状。毒株GD-X1-2011F基因的裂解位点序列为112R-R-Q-K-R-F117,属于强毒裂解序列,其F基因与基因Ⅶ型毒株SDWF07-2011同源性为97.5%,与其他不同基因型毒株的同源性在83.6%～90.1%之间。进化树分析GDX1-2011株属于基因Ⅶ型毒株。; 刘佳佳严专强刘迪李欣莲覃健萍谢青梅毕英佐薛春宜陈峰; 关键词：新城疫病毒 F基因

免疫鸭群中一株变异型番鸭呼肠孤病毒的分离与特性研究被引量：1: 2013年; 本研究从广东省某发病番鸭场分离得到的呼肠孤病毒(DRV)混合有番鸭细小病毒(MDPV)疫苗株。采用MDPV阳性血清中和后,经2轮番鸭胚有限稀释克隆获得纯化的DRV。电镜观察病毒粒子呈球形、无囊膜、双层衣壳、直径约70 nm。F6代病毒滴度为log107.5TCID50/0.1 mL,病毒能够致番鸭胚成纤维细胞产生细胞病变,并能够致死番鸭胚和SPF鸡胚,回归1日龄雏番鸭出现典型的肝脏点状或斑块状出血等特征性病变,与临床发病鸭相同。分离株S3基因核苷酸同源性与太湖流域2011年分离株DRV-TH11最高,为99.9%,与福建番鸭源分离株MDRV-J18为98%;与早期MDRV在66.8%～67.2%之间,处于不同进化分支上。本研究分离株对番鸭胚、SPF鸡胚及雏番鸭致病力强,而且其基因序列比早期分离株变异较大,应加强监测并及时筛选新疫苗株以有效防控该病的发生和蔓延。; 陈峰雷雯张祥斌招丽婵操胜刘闯覃健萍李海燕; 关键词：番鸭呼肠孤病毒电镜

应用宏基因组学鉴定国内第一株鸭2型腺病毒被引量：12: 2015年; 为分离鉴定广东某养鸭场疑似"肝坏死"病例的病原,本研究将采集的病料样品感染番鸭胚及番鸭胚成纤维细胞(MDEF)进行病原分离,提取出现细胞病变培养物的核酸,采用宏基因组学方法,以随机引物反转录并合成双链DNA进行PCR扩增,扩增产物进行分子克隆和测序分析。结果显示:F6代分离的病毒滴度为log10^(5.0)TCID_(50)/m L,能够导致9日龄~11日龄番鸭胚死亡及MDEF产生明显细胞病变。50个随机克隆经Gen Bank检索有28个为鸭2型腺病毒(DAd V-2)同源序列,核苷酸同源性为92%~99%。28个同源序列形成8个毗连序列群,共计15 107 bp,覆盖DAd V-2基因组全长的34.54%,分离株与Gen Bank中唯一的DAd V-2 GR分离株亲缘关系最近,其部分hexon基因编码的氨基酸同源性为83.3%。参照测定序列设计的引物能够特异性扩增病毒基因。本研究首次应用宏基因组学分离获得国内首株DAd V-2,也是迄今除了法国以外国内首次报道的DAd V-2分离株。; 陈峰招丽婵覃健萍周庆丰罗玉子林丽苗操胜李海燕; 关键词：宏基因组

传染性法氏囊病病毒四川分离株VP2基因序列分析被引量：1: 2013年; 为了解四川地区传染性法氏囊病病毒(IBDV)的变异规律,本研究对2011年分离自四川的10个毒株进行了VP2基因高变区的克隆与测序。序列分析表明,10个分离株之间核苷酸序列同源性在95.3%～99.9%之间,其推导氨基酸序列同源性在99.2%～100%之间;所有分离株与国内外IBDV超强毒株(HK46、OKYM、UK661)的核苷酸同源性在94.4%～98.5%之间,其推导氨基酸序列同源性在98.6%～100%之间。遗传进化分析表明,分离株与超强毒株属同一分支,亲缘关系较近,并且与超强毒株VP2高变区内的特征性氨基酸相符合,据此推测四川省目前流行的毒株仍以超强毒株为主。本研究分离株与常用疫苗株的亲缘关系较远,一定程度上反映了当前四川省IBDV流行毒株与疫苗毒株之间的进化距离。; 严专强刘迪刘佳佳覃健萍鲁俊鹏谢青梅毕英佐陈峰; 关键词：传染性法氏囊病病毒 VP2基因高变区克隆

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广东省教育部产学研结合项目(2010B090301019)