浙江省自然科学基金(Y3100480)
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- 浙江枝吻纽虫肌动蛋白基因的原核表达及其重组蛋白的体外自组装
- 2013年
- 肌动蛋白(actin)是细胞骨架的主要成分。细胞内肌动蛋白通过与actin结合蛋白(actin binding proteins,ABPs)相互作用,形成以F-actin为基础多种ABPs参与装配的高度有序的超分子聚合结构,行使各种重要生理功能。根据已获得的浙江枝吻纽虫actin的全长cDNA序列,构建actin的原核表达质粒pET-28a-A,并转化至E.coliBL21菌株,经IPTG诱导后,重组蛋白以包涵体的形式被大量表达。重组蛋白经Ni-NTA Agarose亲和层析分离纯化后,进一步透析复性,SDS-PAGE显示纯化复性后的r-actin的相对分子量约为43 kD,在体外聚合条件下,采用激光原子力显微镜(atomic forcem icroscope,AFM)技术,对r-actin通过自装配过程形成的大尺度聚集结构进行观察和分析。研究发现,r-actin在体外通过自装配过程除了形成无序的蛋白堆积物之外,还能够聚合形成复杂的离散结构,包括树状分支的纤维丛、无规卷曲的纤维簇等。Actin自装配过程反映了其固有的聚合热力学特性,深入探索将有助于进一步研究ABPs在体内actin超分子聚合结构体系装配中的调控作用及其分子机制。
- 李晔陈蕾周君李成华苏秀榕李太武
- 关键词：肌动蛋白原核表达AFM自组装
