国家自然科学基金(30670963)
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
- 相关作者：杨红钱家鸣李景南徐峰极白文元更多>>
- 相关机构：北京协和医院北京和睦家医院河北医科大学第二医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金河北省科技支撑计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- ARHI基因抑制胰腺癌细胞增殖的作用机制研究被引量：1
- 2015年
- 目的观察ARHI基因对胰腺癌细胞增殖的影响,探讨其抑制细胞增殖的机制。方法 2009年3-9月人胰腺癌细胞株PANC-1选自北京协和医院,根据转入质粒将培养细胞分为Control组(无转染质粒的PANC-1细胞)、Vector组(稳定表达pIRES2-EGFP质粒的PANC-1细胞)、ARHI组(稳定表达pIRES2-EGFP-ARHI质粒的PANC-1细胞)。通过四甲基偶氮唑盐(MTT)法分析3组胰腺癌细胞在培养第0、1、2、3、4、5天增殖情况;应用流式细胞仪检测3组胰腺癌细胞周期;通过Western blotting法检测3组ARHI、磷酸化丝氨酸蛋白激酶(p-AKT)、MDM2、p53、p21^(WAF1)、丝氨酸蛋白激酶(AKT)表达;应用碘化丙啶(PI)-3K/AKT抑制剂LY294002干预ARHI组,检测ARHI、p-AKT、MDM2、p53、p21^(WAF1)、AKT表达。结果 3组培养第1、2、3、4、5天细胞增殖情况比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。Vector组培养第4、5天细胞增殖情况与Control组比较,差异有统计学意义(P<0.05);ARHI组培养第1、2、3、4、5天细胞增殖情况与Control组和Vector组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。3组细胞周期比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。Vector组G_0-G_1期、S期细胞所占比例与Control组比较,差异有统计学意义(P<0.05);ARHI组G_0-G_1期、S期细胞所占比例与Control组和Vector组比较,差异有统计学意义(P<0.05);ARHI组G_2-M期细胞所占比例与Control组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。与Control组和Vector组相比,ARHI组p-AKT、MDM2表达降低,p53、p21^(WAF1)表达增多,而AKT表达没有变化;ARHI组加入LY294002与未加入LY294002相比,p-AKT、MDM2表达降低,p53、p21^(WAF1)表达增加,而ARHI、AKT表达没有变化。结论 ARHI基因通过抑制PI-3K/AKT/MDM2,导致p53、p21^(WAF1)表达上调,在胰腺癌发生中起着重要的作用。
- 路新卿杨红李景南胡益群钱家鸣
- 关键词：胰腺肿瘤细胞增殖ARHI基因
- ARHI基因DNA去甲基化与胰腺癌细胞凋亡相关性被引量：1
- 2009年
- 目的探讨胰腺癌ARHI基因DNA甲基化与ARHI表达失活的关系以及其可能的作用机制。方法采用去甲基化药物5-aza—dC干预胰腺癌细胞株PANC1及P3细胞，RT—PCR方法检测ARHI mRNA表达；ATT法检测细胞增殖；流式细胞仪和TUNEL法检测细胞周期和凋亡，Western blotting法检测磷酸化star3蛋白表达。采用裸鼠胰腺癌移植瘤周围注射5-aza—dC方法，检测移植瘤细胞凋亡及ARHI蛋白表达。结果5-aza—dC干预后，PANC1、P3细胞再表达ARHI mRNA；细胞增殖有不同程度抑制；细胞凋亡率分别从（2．43±1．00）％和（1．85±0．12）％显著增加到（32．77±10．38）％和（20．56±8．29）％（P〈0．01）；P3的G1期细胞从（58．28±0．30）％显著增加到（82．58±1．00）％（P〈0．01），S期细胞从（34．27±0．83）％显著减少到（12．12±1．18）％（P〈0．05），但PANC1细胞周期元明显变化。磷酸化stat3蛋白表达均降低，但PANC1细胞磷酸化star3蛋白降低不显著；5-aza—dC治疗裸鼠胰腺癌移植瘤后3、5、7、9d抑瘤率分别达到52．7％、78．9％、78．2％和97．1％；移植瘤细胞凋亡增加；ARHI蛋白再表达。结论DNA高甲基化是ARHI基因失活的重要机制。去甲基化药物可促进胰腺癌细胞及裸鼠胰腺癌移植瘤细胞凋亡，而这与ARHI基因再表达和磷酸化stat3蛋白表达降低相关。
- 杨红徐峰极钱家鸣许建明厉有名白文元陈原稼路新卿李景南
- 关键词：胰腺肿瘤DNA甲基化ARHI
- 结肠癌细胞上清液对CD4^+FOXP3^+调节性T淋巴细胞形成影响
- 2011年
- 目的观察结肠癌细胞上清液是否能促进正常CD4+T淋巴细胞转换成调节性T淋巴细胞,并且探讨TGFβ1在促细胞转换中的重要作用。方法应用流式细胞仪染色CD4+FOXP3+,ELISA检测结肠癌上清液中TGFβ1浓度。结果分选的CD4+CD25-细胞纯度高达96.58%±0.59%,这群细胞中表达CD4+FOXP3+较低,为0.34%±0.03%。健康正常人CD4+FOXP3-细胞分别与人结肠癌细胞colo320HSR及DLD-1上清液共培养后,CD4+FOXP3+细胞表达增高(colo320HSR组为4.78%±0.41%,DLD-1组为4.48%±0.29%);这两组与RPMI 1640培养液阴性对照组CD4+FOXP3+细胞2.54%±0.41%相比差异有统计学意义(P<0.05)。ELISA法检测colo320HSR细胞上清液TGFβ1浓度为(1 228.80±10.65)ng/mL,DLD-1细胞上清液TGFβ1浓度(624.50±12.26)ng/mL,而RPMI 1640无血清培养液中未检测到TGFβ1。在与结肠癌细胞上清液培养同时给与TGFβ抗体后,CD4+FOXP3+表达较未加入抗体组明显降低(colo320HSR组2.20%±0.09%,P=0.011;DLD-1组1.67%±0.34%,P=0.033);而RPMI1640阴性对照组CD4+FOXP3+细胞表达下降不显著(1.80%±0.58%,P=0.159)。结论人结肠癌细胞上清液可以促进正常CD4+T淋巴细胞(CD4+FOXP3-细胞)转换为调节性T淋巴细胞(CD4+FOXP3+),TGFβ1在肿瘤微环境中调节T淋巴细胞形成可能有一定的作用。识别人调节性T淋巴细胞(CD4+FOXP3+)的起源将为肿瘤治疗提供重要信息。
- 杨红钱家鸣邓卫萍李晓清李景南
- 关键词：结肠癌微环境TGFΒ1
- 甲基化特异性聚合酶链反应检测粪便ppENK基因甲基化对胰腺癌诊断的可行性
- 2012年
- 目的评价甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）检测粪便ppENK基因高甲基化用于诊断胰腺癌的可行性。方法收集胰腺癌患者24例和对照6例的新鲜粪便标本。采用MSP检测全部粪便标本中ppENK的甲基化状态；采用PCR检测全部粪便标本中野生型ppENK的阳性率。采用PCR-限制性片段长度多态性（RFLP）检测粪便K-ras的突变情况。将胰腺癌细胞PC3单细胞悬液加入同一健康者粪便标本，MSP法检测ppENK甲基化阳性，计算甲基化阳性时需掺人的胰腺癌细胞的最少数量。结果30份粪便标本的甲基化检出率为0（0／30），非甲基化检出率为10％（3／30），野生型ppENK检出率为6．7％（2／30）；PCR-RFLP可检测出所选10份野生型ppENK阴性的胰腺癌标本中的8份，其中7份有K-ras第12位密码子突变。MSP方法能够检测到粪便中ppENK甲基化条带所需胰腺癌细胞的数量至少为50个／ml。结论采用MSP方法检测胰腺癌患者粪便标本的ppENK基因甲基化状态，尚不能成为筛查和诊断胰腺癌的方法。
- 卜淑蕊钱家鸣杨红
- 关键词：聚合酶链反应粪便胰腺肿瘤脑啡肽
