重庆市自然科学基金(2009BB321)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 相关作者：王英黄复生张健王艳艳段建华更多>>
- 相关机构：第三军医大学更多>>
- 发文基金：重庆市自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 与按蚊唾液腺抗疟原虫子孢子入侵相关的差异表达cDNA文库构建被引量：1
- 2011年
- 目的构建与按蚊唾液腺抗疟原虫子孢子入侵相关的差异表达cDNA文库,为进一步筛选、克隆按蚊唾液腺抗疟原虫子孢子入侵差异新基因奠定基础。方法以大劣按蚊-约氏疟原虫为实验模型,分别将饱吸约氏疟原虫感染鼠血和正常鼠血后14 d的大劣按蚊作为T组和D组,采用抑制差减杂交方法和T/A克隆技术构建按蚊唾液腺抗疟原虫子孢子入侵相关cDNA文库。结果扩增差减cDNA文库获得2 670个阳性克隆,随机挑取克隆测序显示有与冈比亚按蚊未知功能基因同源的克隆。结论成功构建与按蚊唾液腺抗疟原虫子孢子入侵相关的差异表达cDNA文库。
- 张健王英李振伦黄复生
- 关键词：按蚊约氏疟原虫抑制差减杂交
- 大劣按蚊含硫脂蛋白基因在约氏疟原虫感染中的作用被引量：2
- 2011年
- 目的分析大劣按蚊含硫脂蛋白(TEP1)基因在约氏疟原虫感染过程中的作用。方法根据GenBank中大劣按蚊TEP1基因序列设计带有T7启动子的引物,以大劣按蚊cDNA为模板,进行PCR扩增,纯化产物,体外转录试剂盒合成AdTEP1双链RNA。羽化1～2日的雌性大劣按蚊分3组(200只/组):TEP1干扰组、绿色荧光蛋白(EGFP)干扰组和对照组。TEP1、EGFP干扰组按蚊分别进行胸部微量注射AdTEP1双链RNA、EGFP双链RNA各147 ng,对照组未处理。干扰后3d,每组取15只按蚊,去头,以大劣按蚊核糖蛋白S7(AdS7)为内参进行半定量PCR,检测干扰效果。干扰后4d,用约氏疟原虫BY256荧光株感染3组大劣按蚊。感染后9d,每组各解剖25只蚊胃,记录感染率和感染度。结果对照组和EGFP干扰组AdTEP1的表达条带亮度基本一致,而TEP1干扰组AdTEP1的表达条带亮度非常微弱。感染后9 d,蚊胃卵囊数统计学分析表明,对照组、EGFP干扰组和TEP1干扰组感染率分别为(24±2.83)%、(24±0.71)%和(80±3.54)%;感染度分别为0.32±0.7、0.44±0.85和5.52±4.84,TEP1干扰组明显高于对照组和EGFP干扰组(P<0.05)。结论 AdTEP1干扰后明显增加了大劣按蚊的感染率和感染度,增强了大劣按蚊对约氏疟原虫易感性。
- 王艳艳王英张健段建华黄复生
- 关键词：大劣按蚊约氏疟原虫RNA干扰
