广西壮族自治区自然科学基金(0728195)
- 作品数：2 被引量：13H指数：2
- 相关作者：康晓楠曹骥李瑗梁宏洁韦薇更多>>
- 相关机构：复旦大学广西壮族自治区肿瘤防治研究所广西医科大学第一附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划广西壮族自治区自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 醛酮还原酶1B10基因沉默对MHCC97H细胞生长和基因表达的影响被引量：6
- 2010年
- 目的 探讨醛酮还原酶1B10（AKR1B10）基因在肝癌发生和发展过程中的作用及其机制.方法 化学合成AKR1B10序列特异性小干扰RNA,用脂质体LipofectaminrTM2000介导转染人肝癌细胞系MHCC97H,设实验组转染AKR1B10-小干扰RNA,设阴性对照组转染非编码序列双链小RNA,设空白对照组不作转染.用实时定量PCR、Western blot和酶活性检测法检测AKR1B10 mRNA和蛋白的表达情况,用细胞计数试剂盒CCK-8检测转染细胞的生长增殖变化,用流式细胞仪检测膜联蛋白V/碘化丙啶双标记的凋亡细胞变化,并用实时定量PCR检测c myc、c-fos、N-ras、ki-67、caspas 3、bax肿瘤相关基因的表达变化.用析因设计的方差分析和完全随机方差分析进行组间比较,LSD法进行多重比较.结果 转染24、48 h和72 h后,AKR1B10 mRNA的相对表达量在实验组分别为0.382±0.048、0.098±0.008和0.257±0.032;阴性对照组分别为0.797±0.092、0.742±0.086和0.794＋0.105;空白对照组分别为0.808±0.118、0.716±0.083和0.706±0.067.不同转染时间和不同实验组中AKR1B10 mRNA的表达比较,F值分别为11.650和566.971,P值均＜0.01,差异均有统计学意义.转染24、48 h和72 h后,实验组的AKR1B10mRNA表达较空白对照组被明显抑制,抑制率分别为52.7%±5.6%、86.3%±4.4%和63.7%±6.1%,以转染48 h的抑制率最高（t=80.68,P＜0.01）;阴性对照组的表达水平接近空白对照组（P＞0.05）.Western blot结果显示,转染24、48 h和72 h后,实验组的AKR1B10蛋白表达水平均有下降,其中以转染72 h的降低幅度最大;阴性对照组的表达水平接近空白对照组.转染24、48、72h和96h后,实验组450nm处吸光度值分别为1.465±0.040、1.724±0.106、1.934±0.069和2.377±0.163;阴性对照组分别为1.528±0.044、2.019±0.091、2.711±0.204、3.151±0.159;空白对照组分别为1.567＋0.057、2.102±0.099、2.642±0.198、3.069±0.180;不同转染时间和不同实验组间比较,F值分别为128.092、36.535,P值均＜0.0
- 韦薇梁宏洁崔杰锋郭坤康晓楠曹骥苏建家李瑗刘银坤
- 关键词：肝细胞基因转染RNA干扰
- 二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌过程中癌前病变阶段差异表达蛋白质的筛选被引量：9
- 2009年
- 目的通过比较二乙基亚硝胺（DEN）诱发大鼠肝细胞癌发生过程中不同阶段的蛋白质表达谱，筛选在大鼠肝癌前病变阶段起重要作用的蛋白质分子。方法大鼠分为DEN组和正常对照组，诱癌过程中定期处死动物并取其肝组织；以γ-谷氨酰转肽酶染色阳性的肝细胞增生灶为标志，识别和获取肝癌前病变的组织标本。用双向电泳及基质辅助激光解吸飞行时间串联质谱法对大鼠正常肝组织、癌前病变组织和肝癌组织的全蛋白质组表达谱进行比较和鉴定。用Western blot和RT—PCR方法对部分差异表达蛋白质（如层黏连蛋白受体1和鲱精胺酶）进行表达水平的验证。结果筛选出表达水平差异≥2倍的蛋白质共82种，其中在癌前病变阶段即发生明显改变的差异表达蛋白质有47种，包括在正常对照组、癌前病变组、肝癌组呈现依次上调的层黏连蛋白受体1等8种蛋白质和在上述组织中呈现依次下调的鲱精胺酶等22种蛋白质。Western blot和RT—PCR方法对层黏连蛋白受体1和鲱精胺酶表达水平的验证结果与双向电泳的结果相似。结论大鼠肝癌形成过程中不同阶段的蛋白质表达谱有所不同；对癌前病变的差异表达蛋白质如层黏连蛋白受体1和鲱精胺酶等进行深入探讨，有望为人类肝癌的早期诊断和治疗提供线索。
- 梁宏洁韦薇康晓楠郭坤曹骥苏建家杨春欧超李瑗刘银坤
- 关键词：蛋白质组
