国家重点基础研究发展计划(G1999011905)
- 作品数：20 被引量：340H指数：10
- 相关作者：赵耘宁宜宝秦玉明张广川辛朝安更多>>
- 相关机构：中国兽医药品监察所华南农业大学中国农业科学院兰州兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划广东省科委攻关基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 猪水泡病病毒VP2基因抗原区在大肠杆菌中的表达
- 2004年
- 利用RT_PCR技术 ,以SVDVHK’70为材料 ,扩增出VP2基因抗原区。将目的基因的PCR扩增产物直接进行双酶切 ,然后将酶切产物与酶切后的表达载体pGEX 4T_1进行连接 ,转化BL2 1菌体并提质粒 ,经酶切、PCR鉴定为阳性的重组质粒命名为pGEX_VP2 ,并测序。测序结果表明 ,目的基因插入的位置、大小和读码框均正确 ,表达载体构建成功。将含有阳性质粒的BL2 1菌液经IPTG诱导后进行SDS_PAGE分析 ,出现预期的目的蛋白条带 ,此目的蛋白经Westernblot检测确定其有免疫活性。
- 冶贵生刘湘涛张彦明马玉花张淼涛洪海霞韩雪清
- 关键词：WESTERNBLOT
- 套式RT-PCR检测猪繁殖和呼吸综合征病毒的研究被引量：13
- 2003年
- 参照ATCC VR-2332株及LV株保守区段设计了3条引物,以此建立了检测猪繁殖和呼吸综合征病毒的套式RT-PCR方法。利用其分别对ATCC VR-2332株、LV株及B13株进行套式RT-PCR,结果从3个不同地区分离的毒株中均能特异性的扩增出相应的片段,大小分别约为430bp(预期片段为430bp)、410bp(预期片段为413bp)及410bp(预期片段为413bP),而3个非PRRSV的病毒(猪瘟病毒、细小病毒及伪狂犬病毒)均未扩增出相应的片段。其敏感性可达到10^(-2)TCID_(50),比一步法RT-PCR方法敏感性提高了10000倍。本方法的建立使猪繁殖和呼吸综合征病毒的检测更为敏感、快捷及准确。
- 赵耘张广州秦玉明宁宜宝王琴
- 关键词：套式RT-PCR特异性敏感性一步法RT-PCR
- 建立快速定量检测猪瘟兔化弱毒苗的荧光定量PCR技术被引量：40
- 2003年
- 在猪瘟病毒兔化弱毒疫苗株的5挿潜嗦肭杓埔欢砸锖鸵惶跤馓秸?利用荧光定量PCR原理,结合LightCycler检测系统,首次建立了定量检测猪瘟兔化弱毒苗方法。结果表明,该方法的灵敏度为102拷贝数,线性范围为107-102,达6个数量级;标准样品的变异系数为2.3%-5.1%(n=10),疫苗样品组内实验变异系数为0.85%-2.8%(n=5)、组间实验为2.5%-7.3%(n=5),对同一样品分5次RNA提取和逆转录,其变异系数为5.0%;对9份疫苗样品进行了检测,与兔体定型热反应方法相比较,有很好的相关性;整个检测过程仅需4h。该法可望取代传统的兔体定型热反应用于疫苗生产过程中的效价测定及指导疫苗的配制,也为猪瘟病毒分子生物学研究提供了一种新的、简捷有效的工具。
- 陈玉栋张楚瑜邹俊煊潘兹书陈立新李田郭长林
- 关键词：猪瘟兔化弱毒苗快速定量检测荧光定量PCR技术猪瘟
- 系统发生分析发现牛病毒性腹泻病病毒新基因亚型被引量：12
- 2005年
- 本研究对我国首次分离获得的牛源牛病毒性腹泻病毒(BVDV)毒株Changchun 184(CC-184)和猪源牛病毒 性腹泻病毒ZM-95进行了遗传衍化关系研究。选择主要抗原E2基因为研究对象,首先应用RT-PCR及套式PCR 克隆得到CC-184和ZM-95的E2片段,通过序列测定发现CC-184和ZM-95 E2基因长度分别为1,122bp和1, 125bp,各自编码374和375个氨基酸残基。核酸序列同源性比较和系统发生分析表明2株病毒均属于BVDV-1, CC-184与Osloss亲缘关系最近,都属于已有的b基因亚型,其E2基因同源性达91．8％。而ZM-95的E2基因有 一个特征性的变异区,包含一个密码子序列插入,这一变异区编码了一段有别于其他瘟病毒的五肽氨基酸序列 HYKKK。结果还表明ZM-95与BVDV-1现有的5个基因亚型的亲缘关系均较远,E2基因同源性最高(与Oregon c24v)只有72．4％。而BVDV-1亚型内毒株间的同源性大于85％,亚型间的同源性在69％～75％之间,充分说明 ZM-95是BVDV-1中一个新发现的基因亚型。通常认为猪源BVDV来源于牛,应该与牛源BVDV有十分近的遗 传关系,但是本研究发现ZM-95与其他已知牛源BVDV较低的基因同源性说明猪源BVDV还具有独立的遗传衍 化与传播来源的可能性。
- 徐兴然肖昌梁龙余兴龙张青婵涂长春
- 关键词：猪源BVDVE2基因
- H9N2亚型禽流感病毒的致病特性研究被引量：31
- 2001年
- 将SS、KMI、KMIII3个禽流感病毒的感染性胚液分别接种 2周龄及 5周龄的SPF鸡 ,观察其临床症状及病理变化 .结果显示 :1.3个毒株均可引起攻毒鸡体温升高 ,部分出现水样淡黄色稀粪 ,但不能致死攻毒鸡 .表明 3个毒株均为非高致病力毒株 .2 .攻毒鸡除胰腺充血出血外 ,其他器官不见明显的肉眼病理变化 ,但组织病理学的变化较为明显和一致 ,主要为 :脑及脊髓充血出血 ,神经元变性坏死 ,胶质细胞增生 ;心肌充血出血 ,组织变性坏死 ;胰腺充血出血 ,组织坏死 .3个毒株对 5周龄SPF鸡的病理变化无明显差异 ,但KMI毒株对
- 郭霄峰廖明辛朝安
- 关键词：禽流感病毒H9N2亚型致病力鸡病
- 石蜡切片研究H9N2亚型禽流感病毒的免疫原性被引量：2
- 2004年
- 目的 用石蜡切片评估禽流感病毒A/Chicken/Guangdong/SS/ 94 (H9N2 )株的免疫原性 ,以获得免疫原性良好的疫苗候选株。方法 以A/Chicken/Guangdong/SS/ 94 (H9N2 )株为抗原制备油乳剂灭活疫苗免疫 10d龄SPF鸡 ,免疫 2 1d后 ,以该毒株静脉注射免疫组与非免疫对照组 ,定期剖杀试验鸡并取脑、心肌、肺、胰腺、肝、肾、脾、气管和法氏囊等组织用石蜡切片进行病理组织学检查。结果 两组试验鸡的的病理组织学变化有明显差异 ,免疫组试验鸡获得保护 ,而对照组病变明显。结论 A/Chicken/Guangdong/SS/ 94 (H9N2 )株的免疫原性良好 ,可作为制备油乳剂灭活疫苗的候选株。
- 罗开健梁昭平赵明秋廖明郭霄峰任涛张桂红曹伟胜辛朝安
- 关键词：石蜡切片H9N2亚型禽流感病毒免疫原性
- 猪瘟病毒 猪细小病毒 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪伪狂犬病病毒多重PCR方法的建立以及初步应用被引量：26
- 2007年
- 猪瘟病毒、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒及猪伪狂犬病病毒均能导致猪繁殖障碍,对养猪生产影响很大。本研究通过设计4对针对这4种病毒的特异引物建立了多重PCR方法,分别对其最佳反应条件、特异性及敏感性进行了测定,结果表明:其敏感性可达到CSFV 10 TCID50,PPV 10TCID50,PRRSV 1 TCID50,PRV 100 TCID50 CSFV 10TCID50,PPV 10TCID50,PRRSV 1 TCID50,PRV 100 TCID50。同时具有较好的特异性,对猪瘟病毒石门株、猪瘟病毒兔化弱毒株、PRV闽南A株、PPV弱毒疫苗株、PRRSV KY 35株及PRRSV B13株6个毒株均能扩增出相应的片段,而BVDV、BDV均未扩增出相应的片段。本方法的建立对于这4种病毒病的早期快速检测具有十分重要的意义。
- 赵耘秦玉明张广川赵启祖宁宜宝戴志红谢磊
- 关键词：猪瘟病毒猪细小病毒猪繁殖与呼吸综合征病毒猪伪狂犬病病毒多重PCR
- 中国猪源H5N1和H9N2亚型流感病毒的分离鉴定被引量：131
- 2004年
- 猪是禽流感病毒"禽＿猪＿人"传播链中重要的中间宿主,了解猪流感的疫情动态将为动物流感及人流感的疾病预测及防制提供重要依据。1999～2001年间进行的血清学和病毒学监测发现我国猪群存在大范围的H1和H3亚型猪流感感染(李海燕等,2002)。2002～2003年,我们进一步对来自全国14个省市的1936份血清进行了H9亚型猪流感的检测,同时在广东、福建等省进行了H5亚型猪流感的检测。2002年辽宁、广东、山东及重庆猪血清中出现H9亚型流感抗体,阳性率分别为7.3%、6.8%、5.1%和1.6%。2003年采集的猪血清H9亚型流感抗体均为阴性,同时发现广东、福建两省2003年出现H5亚型流感阳性猪群,阳性率分别为4.7%和8.2%。从2001～2003年收集和送检的样品中分离鉴定了6株H9N2亚型和2株H5N1亚型猪流感病毒,部分序列分析发现H9和H5亚型猪流感病毒均与我国分离的禽流感病毒高度同源。本研究进一步确证了我国猪群中存在H9N2亚型流感病毒,并且首次发现我国猪群已出现H5N1亚型流感病毒,为人类流感及动物流感的防制敲响了警钟。对这两个亚型流感病毒所具有的公共卫生和兽医公共卫生危害性应予以高度重视。
- 李海燕于康震杨焕良辛晓光陈君彦赵朴毕英佐陈化兰
- 关键词：猪流感病毒H5亚型H9亚型病毒分离病毒鉴定
- H7亚型禽流感病毒血凝素基因重组鸡痘病毒活载体疫苗免疫原性评估被引量：20
- 2004年
- 本研究以细胞感染＿转染技术构建了一株表达H7亚型禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)基因的重组鸡痘病毒rFPV＿HA。以5×105PFU的rFPV＿HA经翅下刺种免疫8周龄SPF鸡,免疫后第3周用100CID50的HA基因同源AIVA/ArfiStar/Eng＿Q/983/79(H7N1)进行人工感染,1周后采集泄殖腔棉拭子进行病毒分离。免疫后第三周及攻毒后第1、2周对所有动物进行静脉采血,检测血凝抑制(HI)抗体和免疫沉淀(AGP)抗体。结果,攻毒前部分rFPV＿HA免疫鸡可检测到HI抗体,但检测不到AGP抗体,野生型病毒(F017)接种组和空白对照组HI抗体和AGP抗体均为阴性。攻毒后rFPV＿HA免疫组的HI抗体上升速度明显高于野生型病毒接种组和空白对照组。rFPV＿HA免疫组有6/8的鸡为流感病毒分离阴性,野生型病毒接种组和空白对照组的试验鸡病毒分离全部为阳性。结果表明rFPV＿HA可诱导鸡产生有效的免疫保护反应,阻止或降低消化道病毒排泄。rFPV＿HA的成功构建为研制开发H7亚型禽流感活载体疫苗奠定了良好的基础。
- 马文军陈化兰于康震张建林田国彬唐秀英
- 关键词：禽流感病毒H7亚型血凝素基因重组鸡痘病毒疫苗
- 猪瘟病毒p80基因NTPase/RNA解旋酶功能区在E.coli中的表达被引量：3
- 2003年
- 采用PCR技术扩增出猪瘟病毒GXYL株和C株p80基因的NTPase/RNA解旋酶功能区(sGXNS3和sCNS3),将其克隆到表达载体pET-30a(+)中,获得重组质粒pET-sGXNS3和pET-sCNS3。PCR、酶切和序列分析鉴定目的基因插入位置、方向和读码框完全正确。1 0mmol/LIPTG诱导得到分子量为26kD的目的蛋白,Westernblot检测表明,表达的目的蛋白能被CSFV阳性血清识别。
- 庄淑珍刘湘涛韩雪清张彦明张永国薛青红冯卫权谢庆阁
- 关键词：猪瘟病毒
