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人肠道病毒71型感染免疫抑制恒河猴的分析被引量：5: 2011年; 目的:通过建立人肠道病毒71型(EV71)感染在免疫抑制恒河猴的动物模型,进一步分析人EV71在免疫抑制动物体内病毒增殖、病理变化以及病毒抗原在不同组织的表达情况。方法:按照每天15 mg/kg的剂量给8只恒河猴口服环孢菌素A连续7 d后造成其免疫抑制状态,再经呼吸道和消化道感染EV71病毒FY23株,对其进行14 d的临床观察后处死,采集各器官组织进行病毒载量检测,同时对不同的组织进行病理学分析和免疫组化分析。结果:感染EV71病毒后,免疫抑制组的临床症状、病毒载量、病理分析和免疫组化结果都明显比非免疫抑制组严重,从病毒对机体造成的影响来看呼吸系统感染较消化系统感染明显严重。结论:本实验分析了人EV71在免疫抑制动物体内病毒增殖的情况,为建立用于EV71疫苗评价的恒河猴动物模型提供了依据,并对未来的EV71疫苗的使用人群范围做出了新的限定。; 王晶晶张雪梅赵红玲董承红普晶廖芸王丽春纳锐雄刘龙丁张莹杨丽仙王庆林沈冬王玺李琦涵; 关键词：人肠道病毒71型恒河猴免疫抑制

一株引起手足口病重症感染的柯萨奇B3病毒变异株的生物学分析被引量：6: 2010年; 目的分析1株柯萨奇病毒B3型（CoxB3）新分离株FY-19的基因特性和生物性状，为进一步探讨其引起手足口病（HFMD）重症表现的机理提供线索。方法采用Lim Benyesh-Melnick组合血清方案对1株分离自2008年中国阜阳地区重症HFMD男性患儿的FY-19病毒株进行血清学鉴定，以全基因序列测定分析该病毒株的遗传特征，结合病毒增殖动力学和噬斑形成实验分析FY-19病毒的生物学特性，通过乳鼠脑内病毒接种研究该毒株的致病性特征。结果血清学鉴别确定FY-19毒株为CoxB3病毒；与标准株相比，FY-19株在3’、5’非编码区和编码区的差异分别为达到23．0％、16．5％和32．1％，与我国分离于非HFMD患者的毒株相比也存在较大差异（非编码区和编码区的差异分别为13．5％和25．0％）；FY-19株能在14h内达到增殖高峰，且其在小鼠体内引起心肌病变的致病性显示出明显的致死能力。结论FY-19株的生物学特性与标准毒株之间存在较大的差异，对该变异株的进一步分析将为了解其在HFMD的特殊的致病机理提供帮助。; 施海晶刘建生王丽春张雪梅刘龙丁廖芸纳锐雄李琦涵; 关键词：手足口病柯萨奇病毒B组变异株

利用恒河婴猴模型对肠道病毒71型传播感染特征的生物学分析被引量：4: 2011年; 本文在前期工作基础上,进一步对肠道病毒71型（EV71）从恒河婴猴的感染个体向其他未感染个体传播的可能性及相关生物学特性做了初步分析。通过喷雾形式经呼吸道感染1~2月龄恒河婴猴（A组）;在观察临床症状同时,于感染后第7天,取该组动物粪便处理后,将上清液以喷雾形式经呼吸道感染新的婴猴个体（B组）,随后对该次代感染个体进行同样临床观察;并对哺乳B组婴猴的母猴（C组）也进行全面观察和分析。同时,将A组动物粪便处理后的上清液经血液感染的婴猴作为对照。分析临床症状,血液、粪便及咽拭子病毒载量,中和抗体效价,组织病理学改变。结果提示,恒河婴猴作为EV71感染动物模型,能反映病毒在个体间传播的基本生物学特征。依据实验结果,可以初步推断,EV71在易感人群中的主要传播途径是呼吸道;同时,病毒也可从低龄个体向成年个体传播。这些资料为进一步探讨EV71在儿童群体中的发病规律提供了一定的理论依据。; 王晶晶李薇赵红玲刘龙丁唐东红杨丽仙董承红纳锐雄王丽春张莹梁燕廖芸李琦涵; 关键词：肠道病毒71型恒河猴动物模型

穿心莲内酯对慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞的免疫调节作用被引量：4: 2010年; 目的探讨穿心莲内酯对体外培养慢性乙型肝炎（CHB）患者外周血单个核细胞（PBMC）表达Th1细胞因子IFN-γ mRNA及Th2细胞因子IL-4 mRNA和IL-10 mRNA的影响及其抗HBV的活性.方法分别应用穿心莲内酯10mg/L（实验组）及0.1%二甲基亚砜（对照组）加入细胞培养液中刺激CHB患者PBMC.不同浓度穿心莲内酯（实验组）及阿德福韦（对照组）刺激HepG2.2.15细胞系,实时荧光定量PCR检测处理后PBMC的IFN-γ tuRNA、IL-4 mRNA及IL-10mRNA表达水平及HepG2.2.15细胞系HBV DNA复制水平.结果穿心莲内酯10 mg/L处理16 h后,实验组PBMC的IFN-γ mRNA表达水平高于对照组（Z=-2.78,P=0.05）,IL-4 mRNA及IL-10 mRNA的表达水平明显低于对照组（Z=-3.82,P〈0.01）,IFN一γ/IL-4 mRNA的比例较对照组明显提高（Z=-3.82,P〈0.01）,不同浓度穿心莲内酯对HepG2.2.15细胞系HBV DNA复制无明显影响（t=11.88,P〉0.05）,而阿德福韦对HBV DNA有抑制作用（t=15.95,P〈0.05）.结论穿心莲内酯对CHB患者PBMC内IFN一γ mRNA、IL-4 mRNA及IL-10 mRNA的表达水平有调节作用,改善Th1/Th2平衡,对HBV DNA无直接抑制作用.; 杨飞飞王维李新艳刘春红瞿涤张继明黄玉仙; 关键词：穿心莲内酯 TH1细胞 TH2细胞白细胞介素4 白细胞介素10

柯萨奇病毒A组16型G20分离株在不同培养条件下的增殖动力学被引量：1: 2012年; 目的探讨柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A16,CA16)G20分离株在不同培养条件下的增殖动力学。方法常规培养Vero和人二倍体KMB-17细胞,待细胞长至单层,接种G20株病毒,进行病毒蚀斑试验,以0.1 MOI的感染复数分别感染此两种细胞,置不同温度和pH维持液中进行培养,每2 h收样1次至第24 h,以48 h收样作为对照样,微量滴定法检测病毒滴度,并绘制增殖动力学曲线。结果 G20株病毒在Vero及KMB-17细胞中传代适应后,均可导致细胞病变。G20株病毒在此两种细胞中培养,pH 6.0、pH 6.5时,不同培养温度下,病毒基本不增殖;pH 7.5与pH 7.0的病毒增殖基本一致,增殖速度随温度呈现37℃>35℃>33℃的趋势;在33℃～37℃、pH 7.0～8.0时,病毒均有不同程度的增殖;在41℃、各pH条件下,病毒增殖均明显受到限制。结论病毒在此两种细胞中,37℃,pH 7.5培养条件下,增殖速度及滴度均较理想。; 刘尚允王丽春董承红赵恒杨二霞刘龙丁李琦涵; 关键词：柯萨奇病毒 PH 增殖动力学

呼吸道病毒感染核酸检测技术及其应用进展被引量：14: 2011年; 急性呼吸道感染是全球范围内人类疾病和死亡的主要原因之一,其绝大部分是由呼吸道病毒所引起的。建立切实有效的实验室诊断技术,对于呼吸道病毒的防御和控制至关重要。以核酸为检测目的的分子诊断法,因其快速、简便、高通量、高灵敏度及高特异性,成为新一代呼吸道病毒检测的金标准。简要综述了呼吸道病毒感染核酸检测技术及其应用进展。; 俞晓燕吕建新谭文杰; 关键词：急性呼吸道感染呼吸道病毒核酸检测技术

EV71灭活疫苗(人二倍体细胞)在恒河猴婴猴模型中的免疫保护性分析被引量：6: 2011年; 肠道病毒71型作为引起儿童群体常见传染性手足口病（HFMD）的主要病原，具有导致少量感染个体出现脑炎等神经系统病变以及相关心肺功能衰竭的病理学特性．因此其预防性疫苗的研发具有重要的公共卫生意义．在前期工作的基础上，一种EV71灭活病毒疫苗（人二倍体细胞）在本研究中基于恒河猴婴猴模型进行了相应的免疫保护性分析．以160EU剂量对2～3月龄婴猴进行0，4周免疫后，动物在第4周接受了剂量为10。～CCID50的病毒经呼吸道的攻击．对病毒攻击后动物在14天内的临床症状、血液生物学、器官病原学分布以及病理学检测的动态观察表明，经疫苗免疫的动物未出现对照动物所具有的特征性临床表现，其血液生物学及病理学检测均无异常．同时，器官病原学分布亦呈阴性．结合动物中和抗体的明确增长及对照动物的综合表现分析，本文的工作证实了该EV71灭活病毒疫苗（人二倍体细胞）在恒河猴婴猴体内的免疫保护性．; 李龙刘尚允董承红赵红玲王晶晶张莹纳锐雄谢忠平崔萍芳王丽春廖芸唐东红高家红刘龙丁李琦涵; 关键词：肠道病毒71型

以轮状病毒VP6为载体的RV/HBV嵌合蛋白的构建及抗原性研究(英文): 2012年; 目的构建轮状病毒(rotavirus,RV)VP6载体及携带乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)外源抗原表位的嵌合质粒,进一步探索研发携带HBV抗原表位的重组嵌合疫苗的技术。方法运用基因克隆和重组技术,构建轮状病毒VP6载体,同时将HBV编码中和抗原表位21个氨基酸的基因序列构建到VP6载体上相应酶切位点,在大肠杆菌中表达嵌合蛋白,并进行相关免疫学性质的研究。结果重组嵌合蛋白rVP6/Hs可在大肠杆菌系统中高效表达,表达的蛋白占菌体总蛋白的36.2%,纯度90%以上;ELISA结果显示,嵌合蛋白可与抗-HBs抗体反应;Western blot实验表明,嵌合蛋白可分别与抗VP6豚鼠血清抗体和乙型肝炎患者血清抗体特异性结合。结果表明所表达的嵌合蛋白具有较好的抗原反应性。结论成功构建载体质粒pETP6v及携带HBV外源抗原表位的嵌合质粒pETP6/Hs,对研究病毒抗原表位具有重要的价值;所构建和表达的携带HBV S抗原表位的重组嵌合蛋白在研发RV/HBV重组嵌合蛋白疫苗方面具有重要潜在应用前景。; 袁静吴绪伟郑红梅曹向红潘小霞滕玉梅李琦涵陈元鼎; 关键词：乙型肝炎病毒

2008年柯萨奇病毒A组16型昆明分离株KMM08全基因组序列分析被引量：5: 2012年; 目的分析柯萨奇病毒A组16型（CA16）昆明分离株KMM08全基因序列，了解其遗传特性。方法设计针对CA16引物，提取病毒RNA，RT-PCR扩增和产物直接测序获得序列。利用Mega4．1，RDP3和SimPlot3．5．1等软件分析全基因序列。结果获得KMM08全基因组核苷酸序列长度为7409bp，编码含2193个氨基酸残基的多聚蛋白；与其他CA16参考株核苷酸和氨基酸同源性分别为79．0％～98．2％和94．5％～99．3％，其中SZ—HK08-3与国际标准株G10核苷酸和氨基酸同源性分别79．1％和94．8％；而与肠道病毒71型（EV71）标准株BrCr同源性分别为78．7％和89．0％。在各个区段上，KMM08与SZ．HK08—3的核苷酸和氨基酸同源性分别为97．0％～99．0％和98．0％-100．0％，同源性最高；与G10的核苷酸和氨基酸同源性分别为74．2％～86．9％和90．9％～97．0％；与Ev71BrCr核苷酸和氨基酸同源性分别在65．0％～84．9％和71．0％。95．2％。进化分析发现KMM08属于B基因型的一个分支。RDP3和SimPlot3．5．1软件分析发现Tainan．5079—98序列发现重组信号，而KMM08未发现。结论KMM08分离株为B基因型；CA16与EV71在非结构区发生重组。; 马绍辉潘玥何春艳陈俊英施海晶孙强明李琦涵; 关键词：柯萨奇病毒A组16型全基因组

人冠状病毒NL63核壳蛋白和棘突蛋白的表达及其在血清学检测中的初步应用被引量：6: 2010年; 目的:重组表达人冠状病毒NL63(HCoV-NL63)的核壳蛋白(N蛋白)及棘突蛋白(S蛋白),用于检测血清中的相应抗体。方法:用原核表达系统表达HCoV-NL63的N蛋白,建立检测N抗体的Werstern印迹法;用真核表达系统表达HCoV-NL63的S蛋白,建立检测S抗体的间接免疫荧光(IFA)法。结果:经Werstern印迹检测,重组S蛋白和N蛋白表达正确;初步建立了N蛋白纯化方法。利用建立的检测方法,检测了100份正常成人血清,总阳性率为81%。其中S抗体阳性率为66%,N抗体阳性率为38%,S抗体和N抗体均为阳性的占总数的22%,双抗体均为阴性的占总数的19%;S抗体的检出率明显高于N抗体。结论:重组HCoV-NL63N蛋白及S蛋白表达成功;S抗体和N抗体共同检测可获得较好的检测结果,减少漏检。; 周为民张陵林陆柔剑王慧娟谭文杰阮力; 关键词：核壳蛋白血清学检测

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国家科技重大专项(2008ZX10004-014)

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机构

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