国家自然科学基金(30800492)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 相关作者：李霞茹懿王秦豪李瑗春钟代星更多>>
- 相关机构：第四军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 重组泛素连接酶PTB-U-box/RING的构建与表达
- 2011年
- 目的 构建重组泛素连接酶PTB-U-box、PTB-RING,并克隆进入pFLAG-CMV4真核表达载体,为研究靶向降解受体型酪氨酸激酶IGF-IR,抑制肿瘤细胞生长提供基础.方法 分别设计引物,扩增接头分子IRS-1的PTB结构域以及E3泛素连接酶CHIP的U-box、Cbl的RING结构域,再利用重组PCR,将PTB分别与U-box、RING进行融合,双酶切之后将其插入真核表达载体pFLAG-CMV4,经过酶切鉴定及测序后,转染HeLa细胞,Western 印迹验证重组质粒的表达.结果 PCR结果显示PTB-U-box条带大小840 bp,PTB-RING大小为620 bp,重组质粒经酶切鉴定和测序结果正确,转染后可见融合蛋白的表达.结论 成功构建真核重组表达载体pFLAG-CMV4-PTB-U-box和 pFLAG-CMV4-PTB-RING,并且转染HeLa细胞后证实其能够正确表达.
- 王秦豪茹懿申亮亮李霞药立波
- 关键词：重组质粒
- 重组泛素连接酶SH2-U—box／RING的构建与表达被引量：1
- 2012年
- 目的构建重组泛素连接酶SH2-U—box、SH2-RING，并克隆进入pFlag—CMV4真核表达载体，为研究靶向降解慢性粒细胞白血病（chronic myelocytic leukemia，CML）患者瘤细胞中过度活化的BCR／ABL，抑制肿瘤细胞的生长提供基础。方法设计引物，扩增接头分子Grb2的SH2结构域以及E3泛素连接酶CHIP的U—box、Cb1的RING结构域，通过重组PCR，将SH2分别与U—box、RING进行融合，融合片段双酶切之后插入真核表达载体pFlag—CMV4，经过酶切鉴定及测序后，转染HEK293T细胞，Western印迹验证重组质粒的表达。结果PCR结果提示SH2-U—box条带大小888bp，SH2一RING大小为633bp，重组质粒酶切鉴定和测序结果均正确，转染后可见融合蛋白的表达。结论成功构建真核重组表达载体pFlag—CMV4-SH2-U—box和pFlag—CMV4-SH2-RING，转染HEK293T细胞后能够正确表达，为后续研究奠定了基础。
- 茹懿李瑗春王秦豪钟代星李霞
- 关键词：泛素慢性粒细胞白血病重组质粒
