国家科技重大专项(2010ZX09401-403)
- 作品数：24 被引量：81H指数：5
- 相关作者：张雪霞李晓露李宁任风芝王海燕更多>>
- 相关机构：国家工程研究中心上海医药工业研究院福建省微生物研究所更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家自然科学基金福建省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程轻工技术与工程更多>>
- 利用土壤宏基因组技术定向筛选抗生素产生菌的方法学建立被引量：1
- 2011年
- 为了快速从土壤中定向筛选抗生素产生菌,本研究利用宏基因组技术进行了土壤中抗生素产生菌快速筛选方法的探索。对6种不同土质的土壤利用液氮冷冻法提取土壤基因组DNA并用PVPP柱层析法进行纯化,每克湿土可得到32.25-61.25μg DNA,片段大小为23 kb左右,说明宏基因组DNA样品完整,16S rDNA的PCR结果证明了该基因组DNA纯度可用于后期的分子操作。利用Herbimycin产生菌掺入法进行了抗生素产生菌筛选方法学的验证。结果证明,每克湿土掺入103个Herbimycin产生菌时,利用Herbimycin合成基因簇的特定引物即可从所提取的土壤基因组DNA中扩增出目标条带,并且可以利用传统菌种分离方法从土壤中重新分离出来被掺入到土壤的Herbimycin产生菌。这些结果证明本研究建立的定向抗生素产生菌筛选方法,具有快捷、灵敏的特点,大大减少传统筛选方法的工作强度和时间,为微生物新药的研发建立一种全新的研究方法。
- 栗若兰郑智慧路新华张华蒋沁
- 关键词：DNA提取DNA纯化基因筛选
- 聚合物微球分离纯化纽莫康定A_0与B_0的方法研究被引量：4
- 2014年
- 目的:开发一种高纯度纽莫康定A0与B0的分离纯化工艺。方法:以高纯度纽莫康定A0与B0的收率为指标,考察聚合物微球的洗脱参数和上样量。结果:型号为UniPSA30-300的微球为最佳层析介质,上样量为10 mg·mL-1层析介质,洗脱剂依次为体积分数30%,65%,70%的乙醇溶液,流速为1.5 BV·h-1层析柱体积;按此工艺所得产品纯度大于95%,层析总收率大于65%。结论:此种高纯度纽莫康定A0与B0的分离纯化方法简单易行、收率稳定,适于工业化生产。
- 李晓露任风芝王海燕李宁林毅林旸张雪霞
- 关键词：聚合物微球分离纯化
- 台湾海峡海洋沉积物放线菌的多样性被引量：3
- 2012年
- 目的探究台湾海峡海洋沉积物中放线菌的多样性及发现合成药物先导化合物的新菌源。方法采用6种选择性培养基分离15份来自台湾海峡沉积物样品中含有的放线菌。挑选不同培养特征的放线菌进行初步分类鉴别、16S rRNA基因序列系统进化分析及基于PCR的烯二炔抗生素基因筛选。结果共分离到497株放线菌,挑选的95株放线菌分别属于放线菌7个科,11个属。16S rRNA基因序列分析结果提示分离到的小单孢菌科菌种存在数个潜在新种,95株菌中有27%的菌株含有烯二炔抗生素核弹头的生物合成基因片段。结论海洋环境蕴含丰富的放线菌资源,具有产生烯二炔类抗生素的潜能。
- 梁效伟陈名洪林如王海龙谢阳连云阳江红
- 关键词：放线菌多样性系统发育
- 聚合物纳米微球分离纯化达托霉素方法研究被引量：5
- 2013年
- 目的开发高纯度达托霉素的分离纯化工艺。方法以聚合物纳米微球为载体,对洗脱条件进行优化,再进一步采用结晶的方法进行纯化。结果选择PS RPC-300型聚合物纳米微球为层析填料,上样量为0.5g/100g填料,流速控制为5mL/min,以体积分数为30%和40%的乙醇进行洗脱,收集40%乙醇洗脱液,浓缩后加入丙酮进行结晶,过滤,干燥得到纯度大于98.5%的达托霉素。结论建立了高纯度达托霉素的的分离纯化工艺,流程简单、可行,为该产品产业化开发提供基础。
- 林毅张雪霞李宁李晓露王海燕任风芝
- 关键词：达托霉素分离纯化
- 海绵共附生疣孢菌FIM06031细胞毒活性代谢产物的研究被引量：5
- 2011年
- 利用正相硅胶、葡聚糖凝胶Sephadex LH-20和反相C18柱层析等方法,从海绵共附生疣孢菌FIM06031的发酵菌丝体提取液中分离到三个化合物(1～3)。通过波谱方法鉴定其中一个化合物harrucomicin C(1)为新倍半萜,另外两个已知化合物为cyperusol C(2)和Nb-乙酰色胺(3)。活性研究表明harrucomicin C对肿瘤细胞株HepG2、EC109和HeLa具显著增殖抑制活性,其IC50值分别为16.99、25.33μM和34.64μM;cyperusol C对肿瘤细胞HeLa和HepG2增殖抑制作用的IC50值分别为149.99μM和167.78μM。
- 聂毅磊王传喜郑永标林如许丽艳彭飞方东升连云阳江红
- 关键词：细胞毒活性
- 产L-丝氨酸谷氨酸棒杆菌的代谢工程改造和代谢流分析被引量：5
- 2012年
- 作为胞内一碳单位的主要来源,L-丝氨酸对维持菌体生理代谢具有不可替代的作用,导致其难于实现以糖质为原料的直接发酵法生产.本研究采用系统代谢工程策略,构建了基因工程菌Corynebacterium glutamicum SER-8.连续补料发酵实验显示,SER-8的比生长速率降低,L-丝氨酸的积累量在不同的生长时期呈现变化.代谢流分析证明,过表达3-磷酸甘油酸激酶使糖酵解途径和三羧酸循环增强,过表达脱敏型3-磷酸甘油酸脱氢酶加强了L-丝氨酸合成途径.敲除激活蛋白GlyR部分减弱了L-丝氨酸向甘氨酸的转化,代谢流比率仍有38.2%.实验结果表明,胞内L-丝氨酸的代谢对维持C.glutamicum的生长至关重要,而通过引入GCV裂解系统,分解过量的甘氨酸,同时增加胞内一碳单位的供应将是未来L-丝氨酸代谢工程改造的新靶点.
- 来书娟张芸刘树文梁勇商秀玲柴欣温廷益
- 关键词：谷氨酸棒杆菌
- 夫西地酸产生菌菌落形态与代谢特征的研究被引量：1
- 2012年
- 通过对梭链孢脂球菌SIPI-A.3201进行紫外诱变处理,挑选出3种比较典型的单菌落.摇瓶发酵考察它们的生长代谢特性,检测菌体浓度、糖氮代谢、pH变化以及夫西地酸生物合成量等几项指标.并且对菌株Ⅰ和菌株Ⅲ发酵过程中的菌丝形态变化进行了研究.结果表明:与菌株Ⅰ和菌株Ⅱ相比,菌株Ⅲ草帽型的单菌落产抗水平最高,达到了约480×10-6g/mL.
- 邓昕蓝鸿董晓景李继安陈代杰
- 关键词：夫西地酸菌落形态
- 杆菌肽产生菌的诱变育种及培养基优化被引量：9
- 2013年
- 以地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis SIPI-669-3为出发菌株进行诱变选育和发酵培养基优化,以提高杆菌肽产量。采用硫酸二甲酯(DMS)、紫外(UV)及钴-60(60Co)射线对SIPI-669-3进行诱变选育,并采用单因素试验和响应面法优化高产菌株发酵培养基。经过连续复合诱变,筛得高产突变株SIPI-93-14,产量较出发菌株提高了81.4%。优化后的发酵培养基碳、氮源为淀粉5.71%、豆粕10.0%和硫酸铵0.15%,此条件下杆菌肽产量较优化前提高14.5%。
- 徐加兵魏晓东那可阎永贞赵文杰
- 关键词：诱变育种响应面法发酵
- 高效液相色谱-单四极杆质谱仪结合同位素峰形校正检索技术快速确定头孢呋辛水溶液降解杂质被引量：8
- 2012年
- 目的:探索一种利用同位素峰形校正检索技术(CLIPS),在低分辨率单四极杆液质联用仪上,实现对未知杂质元素组成的分析,进而快速推断降解杂质结构的方法。方法:头孢呋辛对照品经水浴降解获得未知杂质混合样品,用HPLC-MS进行分离,并获得降解产物的准分子离子和碎片离子的同位素峰形;用元素组成已知的同位素峰做校正,对未知降解杂质进行CLIPS校正分析,确定元素组成,再根据质谱谱图信息初步确定其结构式。结果:水浴降解溶液中7个降解杂质得到了有效分离。用CLIPS确定了降解杂质的准分子离子和部分碎片离子的元素组成,并初步推测出其中4个降解杂质的结构。结论:同位素峰形校正检索技术结合高效液相色谱-单四极杆质谱联用仪可以确定降解杂质的元素组成,进而帮助降解杂质的结构解析和确证。
- 钱建钦胡昌勤
- 关键词：液质联用头孢呋辛
- 小单孢菌FIM10-2207生物转化卡那霉素B的初步研究
- 2013年
- 在卡那霉素B的微生物转化研究中,从台湾海峡海底沉积物中分离得到五株对卡那霉素B具有转化作用的菌株,选取其中转化率较高的一株菌,编号为FIM10-2207,经分类学研究鉴定为小单孢菌。初步考察了培养基的选择,底物卡那霉素B的初始浓度和添加时间这3个因素对转化率的影响,发现转化培养基C,添加时间32h和底物初始浓度1500μg/mL时,转化率较高。卡那霉素B经该菌株转化后,得到一个新化合物,波谱数据分析结果表明该产物为1,3″-二乙酰化卡那霉素B。
- 杨良黄楷陈秀明陈晓明郑卫
- 关键词：微生物转化小单孢菌
