国家自然科学基金(30672503)
- 作品数：4 被引量：6H指数：2
- 相关作者：吕元蒋晓飞魏取好杨泽华陈楠更多>>
- 相关机构：复旦大学上海交通大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市教育委员会重点学科基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 利用表型筛选法测定整合子对耐药性基因盒的整合频率被引量：4
- 2008年
- 目的建立一种利用表型筛选的方法来测定整合子对耐药性基因盒的整合频率。方法将整合子和aadA2耐药性基因盒克隆到同一质粒pACYC184的不同位点，该重组质粒和高表达整合酶的重组质粒分别转化大肠杆菌B121（DE3），挑选阳性克隆过夜培养后，取适量菌液涂布含有链霉素的LB琼脂平板，同时取适量菌液涂布不含链霉素的LB琼脂平板，过夜培养后计数菌落个数，用以计算整合频率。同时以链霉素平板上的阳性克隆为模板，进行PCR扩增。对扩增产物切胶回收纯化，然后进行测序，以确定aadA2耐药性基因盒整合位点。结果在大肠杆菌B121（DE3）宿主中，整合子对aadA2耐药性基因盒的整合频率为1．1×10^-3，主要的整合位点为attI。结论该系统可以用于整合子对基因盒捕获频率的测定。
- 杨泽华蒋晓飞魏取好陈楠吕元
- 关键词：整合子整合酶耐药性基因重组
- 利用EZ-Tn5转座子插入突变探索细菌基因组中影响其耐药性变化的因素被引量：1
- 2010年
- 目的研究细菌基因组中影响抗菌药物活性的因素。方法用EZ-Tn5转座复合物通过电转化,随机插入大肠埃希菌BL21细菌染色体基因组,获得BL21菌株的插入突变文库;对所有突变克隆株进行37种抗菌药物体外药敏试验;耐药性发生明显恒定改变的菌株进行反向PCR,并对产物进行测序和序列分析,确定转座子插入的确切位点;结合被灭活基因的表达功能推测耐药性改变的原因。结果确定大肠埃希菌电转化最佳条件为菌液OD值为0.8(600 nm)时进行感受态制备,10%甘油缓冲体系和2.7 V电击电压;共得到182株成功插入Tn5转座子的克隆,建立大肠埃希菌BL21菌株随机插入突变文库,其中插入突变菌株BLmu29对青霉素、头孢唑林、头孢克洛、头孢丙烯等抗菌药物的敏感性增加,其中以对青霉素的变化最为明显,抑菌圈直径从对照菌株的12 mm扩大到17 mm;对其进行反向PCR,并对PCR产物测序证实插入转座子的位点为1736,其灭活的基因为甘油-3-磷酸酰基转移酶。结论灭活大肠埃希菌基因组中甘油-3-磷酸酰基转移酶所对应基因,使对细菌对青霉素等亲水性抗菌药物的耐药表型发生改变,提示此基因可影响大肠埃希菌对于亲水性抗菌药物的耐药性。
- 陈晓耘蒋晓飞魏取好李茹王艳艳吕元
- 关键词：大肠埃希菌细菌耐药电穿孔
- 一种研究耐药性整合子整合功能体系的建立被引量：2
- 2007年
- 遗传物质在菌种内以及菌种间的水平传播，是细菌获得新耐药性的重要手段。耐药性快速广泛地传播以及在不同菌种间出现非常相似的耐药方式，说明了上述机制的重要性。细菌可以通过基因突变的方式获得耐药性，然而整合子通过捕获多种耐药性基因盒在临床菌株产生多重耐药性上具有重要意义。Hall和Collisl。将整合子定义为由一系列遗传元件构成的能够识别和捕获移动性基因盒的位点特异性重组系统。一个整合子包括编码整合酶（intI）的基因及其临近的重组识别位点（attI）。整合子不一定包括基因盒，但当基因盒整合入整合子时，这些基因盒就成为整合子的一部分。
- 杨泽华蒋晓飞魏取好吕元
- 关键词：整合子基因突变
- 肺炎克雷伯临床菌株新基因组岛KpGI-2的鉴定
- 2009年
- 目的研究肺炎克雷伯临床耐药菌株新基因组岛KpGI-2的结构和功能。方法采用PCR方法自一株肺炎克雷伯耐药菌株HS04160扩增得到新的插入序列KpGI-2，通过测序以及生物信息学方法分析其序列结构并推测其生物学功能，采用细菌生长试验证实其生物学功能。结果phe55 tRNA基因位点处PCR扩增得到的6．4kb的插入序列KpGI-2，序列分析发现其GC含量为38．03％，明显低于肺炎克雷伯菌株基因组平均的GC含量（57．5％）。KpGI-2中含有163bp的重复序列，可以确定为一个新的基因组岛。KpGI-2携带有5个orf，其中orf5与沙门菌属中的Fic（filamentation induced by cAMP）蛋白具有高度相似性。肺炎克雷伯临床菌株普遍携带有一个高度保守的fic基因以及一个相对保守的fic基因，携带有KpGI-2的临床菌株HS04160丢失了相对保守的fic基因。通过细菌生长试验分析发现orf5以及KpGI-2在cAMP诱导下对细胞生长具有调节作用，KpGI-2的功能可能与细菌生长的调节相关。结论KpGI-2是位于肺炎克雷伯临床菌株基因组岛插入热点phe55 tRNA基因位点上的一个新基因组岛，其携带的基因与细胞生长相关。
- 陈楠蒋晓飞李敏魏取好陈晓耘欧兹宇吕元
- 关键词：肺炎克雷伯菌细胞生长FIC
